多重耐药大肠埃希菌复方新诺明耐药相关基因研究

多重耐药大肠埃希菌复方新诺明耐药相关基因研究 () 摘 要: 目的 了解多重耐药大肠埃希菌 对复方新诺明耐药机制。方法 采用检测20 株多重耐药菌复方 ECO PCR ECO ( )() 新诺明耐药基因 1, 1, 5, 12, 17。结果 基因阳性率分别为90% 1820,1, 1, 12, 17 /su ldf rA df rA df rA df rA su ldf rA df rA df rA (()) () () 10% 220, 5% 120, 75% 1520, 未检出 基因。 共有 18 株检出 和或 基因 90% 。 结论 本组多重耐 5 ////df rA su l df rA 药 菌复方新诺明耐药与携带 基因相关, 复方新诺明耐药表型与基因型相符。1, ECO su ldf rA 关键词: 大肠埃希菌; 复方新诺明; 耐药 () 中图分类号: 378121; 781 文献标志码: 文章编号: 167127414 2008052042202 R Q A Study on the Gen e s of SM Zco Re s istan ce - - in M ult idrugre s istan t Stra in s of E sch e r ich ia co l i )(, 223300, 2, F irs t H osp ita l of H u a ia n C ity J ia n g su H u a ia n C h in a SU N H a ip in gL IN N in g 22. : : A bstrac tO bjec t iveT o inve st iga te m ech an ism s o f SM Zco re sistance in m u lt id rugre sistan t st ra in s o f E sch e r ich ia col i ( ) 1, 1, 5, 12 17M e thods T h e gene s su ldf rA df rA df rA and df rA o f SM Zco re sistance w e re de tec ted by po lym e ra se ch a in re2 ()( ) ( ) ( ) 220, 10% 220, 5% 120. 20 , 1, 1, 12, 1790% 18///ac t io n PCR Re sults In st ra in ssu ldf rA df rA df rA po sit ive ra te w a s () ( )75% 1520. 18 90% . //and re sp ec t ive lyA to ta l o f de tec t io n su l and o r df rA gene Con c lus ion T h e SM Zco re sistance 1 . .m ech an ism s o f th e ECO a re su land df rA re la tedT h e SM Zco re sistance p h eno typ e and geno typ e co n sisten t : ; ; KeywordsE sch e r ich ia col iSM Zcore sistance () , - 20 ?冰箱保存备用。 的模板液大肠埃希菌 , 是院内感 E sch e r ich ia col iECO 表 1 20 株 菌 18 种抗菌药物的敏感性 ECO 染常见菌种, 院内感染 菌对常用抗菌药物出 ECO 纸片浓度 敏感株数 中敏株数 耐药株数 现多重耐药性。有关菌耐药机制研究, 国内报ECO 抗菌药物 ( )()()()% % % Λg道 2内酰胺类耐药机制较多, 而复方新诺明耐药相 Β ()()()氨苄西林 10 0 0 0 0 20 100 关基因研究报道鲜见。 为了解淮安一院 菌临ECO ()()()哌拉西林 100 0 0 0 0 20 100 床分离多重耐药株复方新诺明耐药相关基因存在()()()头孢噻吩 30 0 0 0 0 20 100 状况, 我们对 20 株多重耐药 菌进行了复方新 ECO ()()()头孢西丁 30 6 30 1 5 13/65 诺 明 耐 药 相 关 基 因21, 1, 5, 12, su ldf rA df rA df rA ()()()30 头孢曲松 0 0 0 0 20 100 ()()()头孢噻肟 30 0 0 0 0 20 100 17 检测, 现报道如下。df rA ()()()75 头孢哌酮 0 0 0 0 20 100 1 材料与方法()()()头孢他啶 30 10 10 1 5 9 45 ()()()30 头孢吡肟 3 15 0 0 17 85 ()()()30 氨曲南 4 20 3 15 13 65 1. 1 菌株来源 20 株 ECO 菌均分离自 2007 年 1 ()()()10 亚胺培南 19 95 0 0 1 5 月, 7 月间淮安一院住院病人标本。标本来源分别 ()()()100/10 19 95 0 0 1 5 哌拉西他唑巴林 坦/()()()7575 /头孢哌舒巴酮 坦20 100 0 0 0 0 /为尿液7 份、痰液5 份、血液5 份、脓液3 份。病人年 ()()()10 4 20 0 0 16 65 庆大霉素 龄 2, 75 岁, 男 7 例、女 13 例。 全 部 菌 株 均 使 用 30 ()()()阿米卡星 14 70 1 5 5 25 5 ()()()细菌鉴定仪鉴定菌种。 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 菌株为大肠埃 环丙沙星 1 5 0 0 19 95 V IT E K ()()()30 451540氯霉素 9 3 8 希菌。25922A T CC 25 ()()()复方新诺明 2 10 1 5 17 85 1. 2 抗菌药物敏感性试验 为 2法测定 18 种 K B 1. 5 基因检测 均为PCR 法。靶基因引物序列和 抗菌药物的敏感性。 根据美国年版要求 2006 CL S I 目的产物长度见表 2。 进行敏感性判断, 其中头孢哌酮舒巴坦敏感性判 / 各种靶基因 扩增体系均为: 每反应体系PCR 别参照头孢哌酮。20 株 菌临床分离多重耐药 ECO , 引物各 0. 5 /各 200 /, P 1 P 2 Λmm o lL dN T P s mm o l 株 18 种抗菌药物的敏感性见表 1。 ) (4 2 4 8 2 2 , 10 , ,//L KC l mm o lL N H SO mm o lL M gC l1. 4 细菌处理 挑纯培养菌落置入 0. 5 离心 m l () 20., 9. 010 , //mm o lL T r isH C l pH mm o lL N P 40 () 管内 内预置 200 蛋白酶 溶液 200 , 56/n gm l K Λl 5% , 0. 02 。 总反应体 , 1/B SA g d lT aq DN A po l U ?水浴2 , 改95 ?水浴10 , 加入2100 40 h m in C h e lex ()积 20 其中模板液5 。热循环参数均为: 93 ?Λl Λl () Λl, 离心 15 000 rm in 30 s。上清液即为基因检测/ Ξ ( ) 作者简介: 孙海帄 1954- , 女, 大专, 副主任检验师, 主要从事医学微生物检验与质量控制工作。 ( ) 通讯作者: 林 宁 1969- , 男, 学士, 副主任检验师, 江苏省医学会检验分会会员, 科主任, 主要从事医学检验工作。 8, 9 预变性 2 m in , 然后 93 ? 30 s?55 ? 30 s?72 ? 抗菌敷料, 氯己定2磺胺银涂布导管常用做预防10 () 60 , 循环35 周期, 最后一个72 ?延长至5 。扩 导管留置性血行感染 2。 但细菌 1, sm inCR B S Isu l 增产物做 2 /琼脂糖凝胶电泳, 紫外凝胶电泳成基因携带率高, 预防作用需重新评估。gd l df rA 像仪下观察, 并 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 结果。耐药基因检测试剂盒、靶复方新诺明目前在临床并非常用药, 耐药性如 由无锡市克 基因 PCR 引物序列和阳性对照DN A 此高其原因值得深究。 ( 引物由无锡市克隆遗传技 术 研 究 所 糜 祖 煌 老 师 根 据PCR 隆遗传技术研究所提供。2007 年 12 月 10 日之前已在. . . . 登 /w w w ncbin lm n ihg ov nu cleotid e 表 2 靶基因 引物序列及产物长度 PCR 录的 基因序列的保守区域完成1, 1, 5, 12, 17 su ldf rA df rA df rA df rA ()基因名称 引物序列 5’?3’ 产物长度 ) 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 , 特此致谢! : P1TA GCG GGAGCTTT AGCC TAAsul 1300 bp 参考文献:: P2A TTC GAA TAGCCGAA CACCG1 汪 复. 抗菌药物作用机制和细菌耐药性. 闻玉梅. //: P1TTGTGAA TACACTCAT TAGGA G TAdfr A1 480 bp精编现代医学微生物学 [. 上海: 复旦大学出版社, M : P2CTTGTTAACCCTTTT GCCA GA2002: 3062307. : : P1TCCAC TAACCCACTGG2TCCG Pdfr A5 300 bp2 , , . : W a ldo r M K T sch ap e H M ek a lano s JJA new typ e A TCGT CTAG TAA TGG GACGT1A P : A TGAACTCGG GATAA CTG2CAC Pdfr A12 498 bpo f co n juga t ive t ran spo so n enco de s re sistance to su l2 TT AGCCGTTTCGA CGCGCA T, , fam e tho xazo let r im e thop r im and st rep tom yc in in : dfr A17 475 bpP1TTGAAA TA TAT ATTG TTATCT GGTC GA( ) , 1996, 178 14:139 . V ibr io ch ole rae O J J B ac te r iol : P2GTT GACCTTTTT TTCCCTAAGG TATG A 4157. , , , . 2 3 L ee JC O h J Y C ho JW e t a lT h e p reva lence o f t r2 结果 20 株多重耐药 ECO 其复方新诺明与基 22im e thop r im re sistanceco nfe r r ing d ih yd ro fo la te re2 因检测结果: 其中 17 株对复方新诺明耐药, 1 株中 duc ta se gene s in u r ina ry iso la te s o f E sch e r ich ia col i in 度敏感, 2 株敏感。 2 株敏感株未检出耐药基因; 共 ( ) [. , 2001, 47 5: 5992Ko rea J J A n t im ic rob C h em oth e r 604. () 有18 株检出su l 和或df rA 基因 90% 。其中, su l1/ , , , . 4 L ind sted t BA H e ir E N yga rd Ie t a lC h a rac te r iza2 + 17 阳性14 株, 1+ 1 阳性2 株, 1+df rA su ldf rA su lt io n o f c la ss I in teg ro n s in c lin ica l st ra in s o f 12 + 17 阳性 1 株, 1 阳性 1 株。 1,df rA df rA su lsu l.S a lm one l la en te r ica su bsp en te r ica se ro va r s T y 2 ( 1, 12, 17 基 因 阳 性 率 为 90% 18/df rA df rA df rA p h im u r ium and E n te r it id is f rom N o rw eg ian ho sp ita ls () [. , 2003, 52 2: 1412149.) () () () J J M ed M ic robiolP t 20, 10% 2/20, 5% 1/20, 75% 15/20, 没有检 5 , ,, . 2 C ab re ra R R u iz J M a rco F e t a lM ech an ism o f re s测到 基因。5 df rA istance to seve ra l an t im ic ro b ia l agen t s in S a lm one l la ( 讨 论3 复 方 新 诺 明 为 磺 胺 甲 基 异口恶 唑 su l2 [ . C lin ica l iso la te s cau sing t rave le r’ s d ia r rh ea J A n2 ( ) fam e tho x azo le, SM Z与 甲 氧 苄 胺 嘧 啶 t r im e tho 2 () , 2004, 48 10: 393423939. t im ic rob A g en ts C h em oth e r . 1 ) 6 的复合制剂, 磺胺的抑菌机制为与对 Sunde M P reva lence and ch a rac te r iza t io n o f c la ss , p r im TM P 2 and c la ss in teg ro n s in E sch e r ich ia col i iso la ted f rom () 氨苯甲酸 的化学结构相似, 两者竞争二氢 PA BA [ . m ea t and m ea t p ro duc t s o f N o rw eg ian o r ig in J J () 叶酸合成酶 使二氢叶酸合成减少; 甲氧苄D H P S () , 2005, 56 6: 101921024.A n t im ic rob C h em oth e r () 胺嘧啶则能抑制二氢叶酸还原酶 , 使四氢 D H F S, , , . 2 7 K ik uv i GM Schw a rz SOm bu i JN e t a lS t rep tom y c in and ch lo ram p h en ico l re sistance gene s in E s2 叶酸的生成受阻。 磺胺药与甲氧苄胺嘧啶合用后, , , ch e r ich ia col i iso la te s f rom ca t t lep ig sand ch ick en in 由于两者作用于细菌叶酸合成的不同环节, 因而有 () [. , 2007, 13 1: 62268.Kenya J M ic rob D ru g R es is t 1 协同作用。 近年来, 对细菌的可移动性遗传元件 ( Geo rge N , F ao aga li J ,M u lle r M . S ilvazine silve r su l2 8 研究发现, 转座子、I 类整合子的耐药基因盒中常) 200 fad iazine and ch lo rh ex id ineac t iv ity aga in st c lin2 携带二氢叶酸合成酶的编码基因 有些同时还 1, su l() [. , 1997, 23 6: 4932495.ica l iso la te sJ B u rns (携带二氢叶酸还原酶的编码基因早期文献中 df rA , , , . 2 F ra se r J F Bo dm an J S tu rge ss R e t a lA n in v it ro st9 2 , 7 ) 以 表示。 细菌额外获得 基因所表达 1 dh f r su l21% udy o f th e an t im ic ro b ia l eff icacy o f a silve r su l2 二氢叶酸合成酶抵消了磺胺与 竞争性抑制 PA BA 0. 2% p h ad iazine and ch lo rh ex id ine d ig luco na te 作用, 导致细菌耐磺胺。细菌额外获得基因所df rA , 1% c ream silve r su lp h ad iazine c ream and a silve r () [. , 2004, 30 1: 35241.co a ted d re ssing J B u rns 表达二氢叶酸还原酶补充了甲氧苄胺嘧啶靶位酶, , , D o ug la s J E Sch ue re rJ eanne E Zack J am e s 10 导致细菌耐甲氧苄胺嘧啶。 本组 18 株复方新诺明 , . /T hom a se t a lE ffec t o f C h lo rh ex id ineS ilve r Su l2 耐药或中敏者均检出复方新诺明耐药相关基因; 2 2fad iazineIm p regna ted C en t ra l V eno u s C a th e te r s 株复方新诺明均敏感者没检出复方新诺明耐药相 in an In ten sive C a re U n it w ith a L ow B loo d S t ream Infec t io n R a te af te r Im p lem en ta t io n o f an 关基因。 复方新诺明耐药表型与基因型相符。 : 2[ .E duca t io na l P ro g ram A B efo reA f te r T r ia l J 复方新诺明耐药应引起足够的关注。因为近20() , 2007, 8 4: 4452454. S u rg ica l I nf ec t ions( ) 年来, 磺胺与消毒剂 氯己定等广泛被用作伤口收稿日期: 2008202213