HPLC法测定祛痹舒肩丸中阿魏酸的含量_1612

HPLC法测定祛痹舒肩丸中阿魏酸的含量_1612 HPLC法测定祛痹舒肩丸中阿魏酸的含量 作者：申强 陈燕忠 吕竹芬 庄义修 【摘要】 目的：建立以高效液相色谱法测定祛痹舒肩丸中阿魏酸含量 的方法。方法：色谱柱为C18柱（4.0 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙睛-0.085%磷酸溶液（17?83），检测波长为323 nm，流速为1.0 mL/min,柱温为室温。结果：阿魏酸在（0.001996～0.07984）mg/mL范围内浓度与峰面积线性关系良好（r=0.9997,n=7），平均加样回收率为101.2%，RSD为2.9%（n=6）。结论：本方法简便、灵敏、准确，可用 于祛痹舒肩丸的质量控制。 【关键词】 高效液相色谱法 祛痹舒肩丸 阿魏酸 Abstract Objective:To develop a HPLC method for determination of ferulic acid in Qubi Shujian Pills.Methods:The analysis was carried out on a Diamonsil C18 column (4.0 mm×250 mm，5 μm) with a mobile phase acetonitrile-0.085% phosphoric acid (17?83). The flow rate was 1.0 mL/min at the room temperature and the UV detection wavelength was 323 nm.Results:The calibration curve was linear at the range of（0.001996～0.07984）mg/mL for the ferulic acid (r=0.9997,n=7).The average recovery rate was 101.2% and RSD was 2.9% (n=6).Conclusion: The method was rapid, sensitive and accurate, and could be used for the quality control of this preparation. Key words HPLC;Qubi Shujian Pills;Ferulic acid 祛痹舒肩丸是由桂枝、羌活、黄芪、三七、当归等十四味中药组成 的中药复方制剂，临床主要用于治疗肩关节性周围炎，以治疗风寒痹为 主［１］。本品原质量标准中无阿魏酸的含量测定方法，不利于制剂的 质量控制。本文参照《中国药典》［２］，建立了HPLC法测定祛痹舒肩丸中的阿魏酸的含量。本法操作简便，灵敏度高，重现性好，结果准 确可靠，可作为该药的质量控制标准。 1 仪器与试药 Dionex P680高效液相色谱仪，Dionex UVD170U可变波长检测器，Chromeleon色谱工作站，Sartorius BS224S电子分析天平，UV-1101紫外可见分光光度计，KQ-300VDE型双频数控超声波清洗器。阿魏酸对 照品（中国药品生物制品检定所，批号：110773-200611，供含量测定用），祛痹舒肩丸（汕头市麒麟药业有限公司，批号：890906，9911011，20060602，20060610），乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其 它试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱为Dikma Diamonsil C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），Phenomenex C18保护柱（4.0 mm×2.0 mm）。流动相为乙睛-0.085%磷酸溶液（17?83），流速为1.0 mL/min，检测波长为323 nm，柱温为室温，进样量为20 μL，理论塔板数按阿魏酸峰计算应不低于3 000。 2.2 溶液的制备 2.2.1 对照品溶液的制备：精密称取减压干燥过夜(室温下)的阿魏酸对照品9.98 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇 匀，即得0.3992 mg/mL对照品溶液。 2.2.2 供试品溶液的制备：取祛痹舒肩丸2 g，研细，精密称取 粉末1 g，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸-甲醇（1?20）溶液20 mL，称定重量，超声处理10 min，放冷，再称定重量，用盐酸-甲醇（1?20）溶液补足减失的重量，摇匀，用0. 45 μm的微孔滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液。 2.2.3 阴性对照液的制备：按制剂处方组成除去当归后，根据样 品制备工艺制备阴性对照，按供试品溶液制备方法制成不含当归的阴性 对照溶液。 以上3种溶液按上述色谱条件进样，测定。结果供试品色谱图中与 对照品色谱图中相应位置上有一相同保留时间的色谱峰，阿魏酸峰与其 他组分峰分离度良好，阴性对照无干扰。结果见图1～图3。 2.3 标准曲线及线性关系考察 上述色谱条件下，精密吸取上述对照品溶液0.05 mL，0.1 mL，0.2 mL，0.4 mL，0.5 mL，1.0 mL，2.0 mL，分别置10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，混匀，取上述系列浓度对照品溶液，分别进样20 μL。以阿魏酸对照品峰面积积分值Y（mAU/min）对对照品溶液浓度X (mg/mL)进行线性回归，得回归方程：Y=1720.8X+0.3417，相关系数为r=0.9997 (n=7)。可见阿魏酸在0.001996 mg/mL～0.07984 mg/mL范围内线性关系良好。 2.4 精密度试验 分别吸取同一对照品溶液，连续进样6次，每次20 μL。所测得阿魏酸峰面积积分值的RSD为0.68%(n=6)，表明仪器精密度良好。 2.5 重复性试验 取同批丸剂样品（批号：890906），按2.2.2项下平行操作制备成6份供试品溶液后按样品测定项下方法测定，平均含量为2.014 mg/g，RSD为0.74%(n=6),表明本方法重复性良好。 2.6 稳定性试验 取同一供试品溶液（批号：890906），分别于制备后0 h，2 h，4 h，6 h，8 h，12 h重复进样，测得阿魏酸峰面积积分值的RSD为3.72%（n=5），表明供试品溶液12 h内稳定。 2.7 加样回收率试验 取上述已知含量的样品（批号：890906），共6份，精密称定，每份精密加入一定量的对照品，按2.2.2项下处理并测定。外标法定量， 结果见表1。表1 回收率测定结果 2.8. 样品含量测定 取不同批号的祛痹舒肩丸，按2.2.2项下制备，分别取对照品溶液 与供试品溶液各以20 μL进样，按上述色谱条件测定，外标法定量， 结果分别为1.07 mg/g，1.18 mg/g，1.15 mg/g。 3 讨论 3.1 流动相的选择 参考文献［２～5］对流动相进行了选择，比较了不同组成和不同 比例的流动相，最终选择乙睛-0.085%磷酸溶液（17?83）为流动相，使待测成份分离效果好，且峰形较佳。 3.2 波长的选择 采用UV-1101紫外可见分光光度计，以甲醇为溶媒测定阿魏酸，在 250 nm～400 nm波长绘制吸收曲线，结果在323 nm 处有最大吸收，且在(323?2) nm范围内较平坦。同时阿魏酸的紫外吸收光谱显示，以流 动相为溶剂及以甲醇为溶剂时，在323 nm处有最大吸收，因此选择 323 nm作为检测波长。 3.3 提取方法的选择 阿魏酸化学性质极不稳定，需避光保存并低温冷藏。本文对采用不 同溶剂和不同超声处理时间的提取方法进行了比较［３～5］，考察了乙醇、甲醇、盐酸-乙醇（1?20）溶液、盐酸-甲醇（1?20）溶液4种提取溶剂，分别超声10 min、40 min、60 min，结果以盐酸-甲醇（1?20）超声10 min提取效果最好。选用超声提取法，操作简便，提 取率高，并可有效地避免了高热对阿魏酸稳定性的影响。 用HPLC法测定祛痹舒肩丸中阿魏酸的含量，经方法学研究表明此 方法具有样品预处理简单、回收率好、重现性好、稳定性好及专属性强 等优点，作为祛痹舒肩丸质量标准检测方法，能够更有效地控制该制剂 的质量。 【参考文献】 ［１］ 国家药典委员会.国家药品监督管理局国家标准WS3-314(Z-046)-99(Z)［Ｓ］. 新药转正标准中药第23册,1999:752. ［２］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典［Ｓ］.一部．北京:化学 工业出版社,2005：89. ［３］ 罗先英.HPLC法测定调经止痛片中阿魏酸的含量［Ｊ］.西北药学杂志,2007,22(2):63～64． ［４］ 朱 艳,杨松松.HPLC法测定大风丸中阿魏酸的含量［Ｊ］.辽宁中医药大学学报,2007,9(3):187． ［５］ 冯 筠,唐德才.HPLC法测定肤痒片中阿魏酸含量［Ｊ］.云南中医学院学报,2007,30(1):13～14． 声明：版权归原作者所有，如果侵犯了你的版权，请第一时间和我联 系，我将立刻做出处理！！！