阿司匹林对血小板凝集和对血栓的影响

阿司匹林对血小板凝集和对血栓的影响阿司匹林对血小板凝集和对血栓的影响【研究背景】近年来，心脑血管疾病的患病率和死亡率持续升高，已成为人类死亡病因的头号杀手。自上世纪70年代，阿司匹林抗血小板作用被发现以来，大量循证医学证明阿司匹林对于血管事件的一级预防(冠心病中高危人群)和二级预防(冠心病、卒中,短暂性脑缺血发作、外周血管病)均具有明显的疗效和极高的性价比，阿司匹林在心脑血管系统疾病的预防中具有重要作用。阿司匹林(Aspirin)诞生于1899年3月6日，是一种历史悠久的解热镇痛药。目前为止，阿司匹林已应用百年，成为医药史上三大经典药物之...

阿司匹林对血小板凝集和对血栓的影响【研究背景】近年来，心脑血管疾病的患病率和死亡率持续升高，已成为人类死亡病因的头号杀手。自上世纪70年代，阿司匹林抗血小板作用被发现以来，大量循证医学证明阿司匹林对于血管事件的一级预防(冠心病中高危人群)和二级预防(冠心病、卒中,短暂性脑缺血发作、外周血管病)均具有明显的疗效和极高的性价比，阿司匹林在心脑血管系统疾病的预防中具有重要作用。阿司匹林(Aspirin)诞生于1899年3月6日，是一种历史悠久的解热镇痛药。目前为止，阿司匹林已应用百年，成为医药史上三大经典药物之一，至今仍是世界上应用最广泛的解热、镇痛和抗炎药，也是作为比较和评价其他药物的标准制剂。近来发现具有抗血栓的作用，能抑制血小板的释放反应，抑制血小板的聚集，这与TXA 生成的减少有关。临床用于预防和治疗心脑血管疾病。近年来，防止心脑血管疾病形势严峻，阿司匹林的临床应用价值也越发明显。在活体的心脏和血管内，血液发生凝固或血液中某些有形成分凝集形成固体质块的过程，称为血栓形成，所形成的固体质块称为血栓。当心血管内皮细胞损伤后，内皮下胶原组织暴露，在炎症细胞产生的趋化、粘附及细胞因子作用下，血小板粘附在破裂处，粘附后血小板活化，释放血栓素A2(TXA2)、二磷酸腺昔(ADP)、凝血酶等，使血小板板聚集，并和凝血瀑布终产物纤维蛋白交联，最终导致血栓形成。在血栓形成过程中血小板起关键作用，TXA2是活化血小板的重要因素，阿司匹林(Aspirin，Asp)是环氧化酶(COX)抑制剂，主要通过减少TXA2的合成发挥抗血小板作用，从而发挥其抗血栓作用。阿司匹林减少TXA2的合成过程是一个涉及多种酶的级联反应。阿司匹林通过它的乙酸基与含有600个氨基酸的酶活性中心发生不可逆结合(530位的丝氨酸残基),使血小板的环氧化酶(即PG合成酶)乙酰化，从而抑制了环内过氧化物(前列腺素类化合物)的形成，其中第一步就是抑制花生四烯酸转化为前列腺素H2(PGH2)。PGH2是不稳定的中间产物(它至少可产生5种具有不同生物活性的前列腺素类物质其中包括TXA2和前列环素(PGI2)。【实验目的】研究阿司匹林抗血栓作用及对血小板凝集的抑制作用，从而探讨其抗血栓机制。【材料与方法】 40只健康雄性成年大鼠，Asp结晶，花生四烯酸(arachidonie acid，AA)～2,戊巴比妥钠，血球计数板，ELISA试剂盒等实验方法: 1、Asp对血栓形成的影响:大鼠20只，随机分成对照、Asp二组，每组10只。Asp以10 ,1,1,1mg?kg?d连续灌胃给药7天，对照组等体积灌胃。第7天灌胃后以 AA 75mg?kg、 ,15mL?kg静脉注射，立即观察小鼠的呼吸，活动状态并记录15分钟内小鼠死亡数。 2、Asp对AA 激活的血小板聚集的影响:大鼠20只，随机分四组，对照一组、Asp三组。 ,1均以2,戊巴比妥钠30 mg?kg腹腔注射麻醉动物，自颈动脉取血，血与2(7, EDTA 9: ,11比例混合抗凝，抗凝后迅速离心9分钟(900 r?min)得到富含血小板血浆(platelet ricb ,1plasma，PRP)。再离心10分钟(3 000 r?min)得到血小板团块。用含1,BSA、1.4 ,1mmol?LEDTA的PBS洗涤血小板3次，最后悬浮于PBS中，计数并调整血小板数为1 8,1×10 Pt?mL。在已吸取过PRP的抗凝血中，加入与PRP等体积的生理盐水以恢复血液的原体积，然后再加入1/10体积的6,右旋糖酐，于37? 垂直静置40分钟以沉淀红细胞成分。取上层白细胞，加入1mL双蒸水溶血30秒，使混杂的红细胞破膜，再加入2倍PBS ,11 mL，混匀，使白细胞恢复等渗状态，离心10分钟(800 r?min)，然后用PBS洗三次， 6,1最后悬浮于Hank's溶液中，将白细胞计数至4×10cell?mL。行玫瑰花结实验，取血小 ,1μL，然后加入终浓度为1mmol?L的AA，于37?振荡10分钟，加板悬液及PBS各50 ,1,1,1入不同浓度的药物(120μmol?L、60μmol?L、30μmol?L)，37?振荡30分钟，随后加人100μL白细胞悬液，并立即于4? 振荡、混匀30分钟，取出后滴人少许到血球计数板上随机计数100个白细胞。其周围粘附有2个或2个以上血小板者为玫瑰花结阳性。每个样本计数3次，取平均值，并计算玫瑰花结形成的百分率为血小板与白细胞的粘附率，抑制率按下式计算: 溶媒对照粘附百分率,给药粘附百分率抑制率(,),×100, 溶媒对照粘附百分率并对结果采用t检验处理。 3、ELISA法定量测定大鼠血清、血浆或其它相关液体中血栓素A2(TXA2)含量。 ELISA试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中血栓素A2(TXA2)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入血栓素A2(TXA2)、生物素化的抗血栓素A2(TXA2)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物MB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的血栓素A2(TXA2)呈正相关。(可用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，具体计算样品浓度) 【预期结果】 Asp对血栓形成的影响:对照组的小鼠死亡率要明显高于Asp组。 Asp对AA 激活的血小板聚集的影响:对照组AA 激活的血小板粘附率明显高于Asp组， ELISA实验中对照组的颜色比Asp组深【结论】阿司匹林有抗血小板凝集和抗血栓作用。

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