右归丸对脾肾两虚证大鼠甲状腺激素及环核苷酸水平的影响

右归丸对脾肾两虚证大鼠甲状腺激素及环核苷酸水平的影响 右归丸对脾肾两虚证大鼠甲状腺激素及环 核苷酸水平的影响         &nb sp;          作者:陈津岩～王立峰～赵慧～李志强～陈芝喜 【摘要】  【目的】通过观察甲状腺激素和环核苷酸水平的变化～探讨右归丸对实验性脾肾两虚证大鼠的防治作用～并从微观角度阐释脾肾之间的联系。【方法】选用SD雄性大鼠～随机分为正常对照组、模型组、右归丸组。前期采用大黄液灌胃(剂量为4 g/只)复制脾虚模型～后期采用氢化可的松肌肉注射(剂量为25 mg〃kg-1〃d-1)复制肾虚模型～分别给予蒸馏水、右归丸(剂量为5 8 g〃kg-1〃d-1)灌胃。观察动物的一般状态并测定血浆环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)及血清三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、反三碘甲状腺原氨酸(rT3)、促甲状腺素(TSH)的含量。【结果】模型组大鼠血清T3、T4、rT3含量在脾虚和脾肾两虚时均显著降低(P<0 01)～血浆cAMP含量及cAMP/cGMP比值在脾虚和脾肾两虚阶段呈上升趋势(均P<0 01)～cGMP含量在脾虚时无显著变化(P>0 05)～至脾肾两虚时则出现降低(P<0 05)。而右归丸组可提高两个阶段T3、T4、rT3含量(P<0 05或P<0 01)～前期脾虚时对 环核苷酸无显著影响(P>0 05)～后期可调节cAMP、cGMP含量及其比值(均P<0 01)。【结论】右归丸能够综合调整甲状腺轴激素含量和cAMP/cGMP比值从而防治脾肾两虚证。 【关键词】  右归丸/药理学;脾肾两虚/中药疗法;甲状腺激素;环核苷酸;疾病模型～动物;大鼠 脾肾两虚证在临床上较为常见～但实验研究中往往侧重研究单一脏器～涉及脾肾两脏损伤的则很少。本实验根据脾肾相关理论复制脾肾两虚模型,通过观察模型组从脾虚发展为脾肾两虚时大鼠血浆环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)～血清三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、反三碘甲状腺原氨酸(rT3)、促甲状腺素(TSH)含量的变化～探讨脾肾相关的微观基础～并观察补肾方剂右归丸对脾肾两虚证的影响。现报道如下。 1材料和方法 1 1动物清洁级SD大鼠～雄性～体质量(200〒20)g～由广州中医药大学实验动物中心提供～动物许可证号为粤监证字2007A024～于广州中医药大学实验动物中心SPF级动物 实验室饲养。 1 2药物右归丸为北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂产品～批号:7013033;氢化可的松注射液由天津金耀氨基酸有限公司生产～批号:200705252。 1 3试剂T3、T4、rT3、TSH放射免疫 检测 工程第三方检测合同工程防雷检测合同植筋拉拔检测方案传感器技术课后答案检测机构通用要求培训 试剂盒由北京科美东雅生物技术有限公司提供～批号: 20070525;cAMP、cGMP试剂盒由上海中医药大学提供～批号:20071009。 1 4仪器SN 695B型智能放免γ测量仪由上海原子核研究所日环仪器一厂生产。 1 5实验方法在适应性喂养2 d后～将36只大鼠随机分为3组～正常对照组11只～模型组13只～右归丸组12只。造模分2个阶段完成:第1阶段采用大黄液灌胃复制脾虚模型[1]～第2阶段在脾虚基础上采用氧化可的松肌注继续复制肾虚模型[2]。 第1阶段(14 d):正常对照组用等容积蒸馏水灌胃～每天2次～每次2 mL;模型组上午以2 kg/L大黄液2 mL灌 胃～下午以2 mL蒸馏水灌胃;右归丸组上午同模型组～下午灌服右归丸水溶液2 mL～给药剂量为5 8 g〃kg-1〃d-1。 第2阶段(11 d):正常对照组每天肌肉注射生理盐水1 mL/只～同时灌服蒸馏水2 mL/只;模型组肌肉注射氢化可的松25 mg〃kg-1〃d-1～并灌服蒸馏水2 mL/只;右归丸组肌肉注射氢化可的松25 mg〃kg-1〃d-1～并灌服右归丸水溶液5 8 g〃kg-1〃d-1。 造模灌药期间～每天观察动物的一般状态(包括饮食、毛发、精神、活动等)。第14天眼眶取血～-40 ?保存待测;第25天再次眼眶取血～并处死大鼠。采用放射免疫分析法(RIA)～观察各组大鼠各时间点血清T3、T4、rT3、TSH及血浆cAMP、cGMP含量的变化～所有样品一次完成实验～严格按试剂盒 说明书 房屋状态说明书下载罗氏说明书下载焊机说明书下载罗氏说明书下载GGD说明书下载 要求进行操作。 1 6统计学方法实验数据采用SPSS 13 0统计软件进行分析处理。 2结果 2 1实验动物数量分析实验过程中因灌胃操作失误 及造模所用药物损伤等原因引起正常对照组死亡1只～模型组死亡3只～右归丸组死亡4只。共损失8只～最终进入实验结果分析第1阶段为30只～第2阶段为28只。 2 2一般状况正常对照组动物 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 现为:毛发顺滑～体质量日渐增加～双目有神～反应、活动灵活敏捷～叫声响亮～正常进食饮水。模型组大鼠于第4天出现便溏～以后逐渐加重;第14~25天时症状更加明显～体质量减轻～毛发枯燥松弛～肢冷～身体瘦削～喜蜷缩扎堆～目光无神～反应迟钝～少动～眯眼或闭眼～行动迟缓～叫声低而无力～饲食和饮水量减少。右归丸组动物的症状较模型组有所改善。 2 3体温变化动物造模前～各组动物体温无显著差异。造模后模型组大鼠体温逐渐下降～与正常对照组比较差异有显著性意义(P 2 4各组不同时间点血清甲状腺激素含量变化比较脾虚及脾肾两虚模型组大鼠血清T3、T4、rT3含量均比正常对照组降低～差异有显著性意义(P0 05)～结果见表2、表3。 2 5各组血浆环核苷酸含量变化比较脾虚模型组cAMP含量和cAMP/cGMP比值均较正常对照组显著升高(P 3讨论 本实验 1复制大鼠脾肾两虚证模型～前期采用大黄灌胃～苦寒泻下损及脾阳～致使脾脏运化失职;后期采用氢化可的松肌肉注射～导致肾脏虚损～同时前期受损脾阳亦未恢复～最终出现脾肾两虚、元气虚损的症状。在本实验中～模型组大鼠前期出现便溏～体质量增长缓慢～后期毛发枯燥松弛,肢冷～身体瘦削,喜蜷缩扎堆～符合临床脾肾两虚、元气虚损的体征。 甲状腺通过分泌甲状腺激素来影响和调节几乎所有细胞的生长发育和能量代谢活动。本实验结果显示～不论是脾虚还是脾肾两虚模型组T3、T4、rT3含量均显著下降～与以往的研究报道[3-4]相符合。可能是由于脾失运化～精微物质合成不足;同时肾失温煦～推动脏腑正常生理活动的功能减弱～致使甲状腺轴功能减退～激素的合成减少所致。而甲状腺激素水平的降低进而影响了机体生长发育和能量代谢～随着时间的延长～体温逐渐降低。在脾虚时～模型组体温下降～而到脾肾两虚时～体温明显降低。右归丸能使下降的T3、T4及rT3水平升高～表明右归丸对脾肾两虚证大鼠有一定的保护作用～能使受损的甲状腺轴得到恢复～维持甲状腺激素含量。右归丸能使体温略有升高～但与模型组比较 无显著性差异～可能与右归丸用量～或与动物数量较少有关。 cAMP、cGMP作为机体的第二信使物质～是由受体、环化酶以及偶联于两者间的G蛋白组成的多种活性蛋白的传递系统。当作为“第一信使”激素的配体并与相应受体结合后～诱发受体分子构象改变～G蛋白把受体与环化酶偶联在一起～并控制该酶的活性～进而影响“第二信使”的生成。“第二信使”作为细胞新的信号～激活相应的蛋白激素～再通过蛋白质磷酸化等一系列酶促反应～调控细胞的活动[5]。在甲状腺激素行使功能时需要cAMP和cGMP信使体系调控细胞的活动。cAMP和cGMP信使体系在体液调节中～由cAMP引起的生物效应与cGMP的效应相反。本实验结果表明血浆cAMP含量及cAMP/cGMP比值在脾虚和脾肾两虚阶段都呈上升趋势(P 对脾虚和脾肾两虚比较发现～甲状腺激素在这两期均有明显变化～并且体温差距加大～环核苷酸中cGMP由变化不明显到有显著差异～这些提示我们脾虚和脾肾两虚之间可能有着共同的物质基础。而甲状腺激素和环核苷酸可能是其中之一。机体由脾虚到脾肾两虚的病理变化可能是通过影响这些共同的物质基础来达到的。右归丸温补肾阳～以助脾之运化～可以通过改善这些潜在的物质基础～达到调节脾肾虚损的功能。 由此可见～脾肾两脏在多方面存在着相关性～而作为甲状腺激素与环核苷酸信使体系可能是其中的物质基础之一。右归丸是通过综合调整甲状腺轴激素含量和cAMP/cGMP比值来防治脾肾两虚证的～从而为临床该方治疗脾肾两虚证提供了实验基础。 【参考文献】   [1]张伟荣～杨蓁 中医实验病理学[M] .上海:上海科学普及出版社～1995:144. [2] 陈小野.实用中医证候动物模型[M].北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社～1993:100. [3] 陈芝喜～刘小斌～周名璐～等. 健脾补肾药对脾虚大鼠环核苷酸及甲状腺激素水平的影响[J]. 放射免疫学杂志～2003～16(5):278. [4] 周联～王 培训 焊锡培训资料ppt免费下载焊接培训教程 ppt 下载特设培训下载班长管理培训下载培训时间表下载 ～李杰芬～等.肾虚与脾虚动物甲状腺轴功能的比较[J].广州中医药大学学报～1996～13(2):31. [5] 陈敏～余江平～黄敏. 环核苷酸的生理作用及临 床应用[J]. 中国药房～2007～18(11):872. [6] 陈津岩～李志强～赵慧～等. 强肌健力饮对肾阳虚证大鼠环核苷酸水平的调节作用[J]. 辽宁中医杂志～2008～35(11):1761.