血管活性肠肽对肺组织CTP:磷酸胆碱二胞苷酰转移酶活性的影响
血管活性肠肽对肺组织CTP:磷酸胆碱二胞
苷酰转移酶活性的影响
察v对该酶影响的量.效关系与时.效关手以厦蛋白激酶c抑制荆H-7
和钙调蛋白阻断剂w.7预处理后酶活性的变化=蛄果:?浓度为3x10real,L的v可引起微粒
体CTPI磷酸胆碱
二胞苷酰转移酶的活性增强,井随着v浓度增加,酶活性增加(P<001).?用
3×10..mol?L’.VIP作用8h,酶的
活性开姑显着增强(P<001),随着作用时间延长,酶活性避渐增加.?H’7和w.7可显着抑制
3×10,reel,L的
v对CTP:磷醢胆碱二胞苷酰转移酶活性的增强作用.站论:肺内神经肽v可促进成年大最肺
组织微粒体中CTP.,
磷醢胆碱二胞苷酰转移酶活性,其细胞内信号转导连轻与蛋白激酶c和钙调蛋白有关.
[关键词】血管活?陆脐肽;肺;CTP:磷醢胆碱二胞苷酰转移酶活性
[中国分类号】R332.2[文献标识码】A【文章编号】1000-5625(2002)(12-0099..03
Effectsofvasoactlveintestinalpepfideontheenzymeactivityof
CTP:phosphorylcholinecytidylyltransferasefi’omtheratlung
GUANCha-xiang,ZHOUFu-wen,LU0Zi—qia”g,etal,
(口?rr矾c阿:1,X/a~ya&hodCe-z~South睁tch田4100”/8,c)
Abstract:0bjot~tiveToinvestigatetheeffectofvasoaetiveintestinalpepfide(VIP)orltheIT1ie10s0
CTP:phcsoho~lcholinecyfidylyltransferaseactivityofculturedlungexplantsanditsmechanisms.MethodsThe
CDP-[M-C]cholinecontentreflectingthemic~semalCTPIphosphoryleholinecytidylyltransfeactivityof
culturedlungexplantsWaSmeasuredthliquidsnintillafion.Results?VincreasedthemicCTP:
phcsphorylcholinee)~idylyltransferaseactivityofculturedlungexplantsinadose-dependencelnflJ1/lerandina
time.dependencefashion;?
Theeffeetof3×10”.mol?LVIPonthe~crosomalCTP:phosphoryleholinecyti—
dylyltmnsferaseactivityofculturedlungexpimatsWaSinhibitedbyH-7,aproteinkinaseC(PKC)inhibitorand
W,aealmodulinantagonistrespectively.Conclusion”vq_Pinthelungmaybe0neofthekeyregulatorsin一
~lvedinthesynthesisofohosphatidylcholhnemediatedbyPKCandealnmdulin.
Keywor~:vasoacfiveintestinalpeptide;CTPIphosohorylehollneidylyhransferase;lung
[BullnlUlanMedUniv,2002,27(2):0099433]
肺
表
关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf
面活性物质(pulmortarysurfnetant,Ps)是维
持正常呼吸功能的重要物质,PS的缺乏或异常可引
起新生儿呼吸窘迫综合征(NRDs)或成人呼吸窘迫
综合征(ARDS)而危及生命.PS是由肺泡?型细胞
台成和分泌的脂蛋白复合物,由脂质,蛋白质和糖基
组成,其中磷脂酰胆碱(phcsphatidylcholine,Pc)是其
主要组分.在成人呼吸窘迫综合征发生中活性氧损
害PS台成的机制与?型上皮细胞内Pc合成的限速
酶一cI’P:磷酸胆碱二胞苷酰转移酶活性降低有
关.血管活性肠肽(?P)是肺内含量颇为丰富的
:?”作者:蒋蕈耋鐾j嘉署牟溉套蓥婆击轰}嘉!研究.:家
?湖南医科大学学报,2OO2,27(2)
神经肽,具有扩张平滑肌,增强支气管上皮细胞抗氧
化性损伤等多种作用’.作为效应广泛的神经肽,
VIP可能参与Ps的合成调控,而国内外尚未见相关
报道.为证实该设想,本研究观察了VIP对成年大
鼠肺组织微粒体膜CTP:磷酸胆碱二胞苷酰转移酶
活性的影响,并探讨其机制,以进一步了解肺内神经
肽VIP的生物学意义.
1
材料
关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料
与方法
1.1材料Wistar大鼠由中南大学湘雅医学院实验
动物学部提供,雌雄不拘,体重(223?36)g.DMEM
培养基(Giboe),VIP,w7,H.7均为Sigma公司产品;
c磷酸胆碱为NENTM公司产品,其它均为国产分析
纯试剂.
1.2方法
1.2.1无血清成年大鼠肺组织培养氨基甲酸
乙酯(1g?kg)腹腔注射麻醉大鼠,75%酒精消毒
皮肤,开胸暴露心肺,肺动脉插管,用生理盐水冲洗
肺血,分离双肺,剪成约1II】T小块.预冷DMEM
洗3次,取加一30小块肺组织置于直径为30rllJll
培养皿中,加入不含血清的DI~IEM1m】(每m】含青
霉素100u,链霉素100g?m】),5%C02,37?培养6
h后按实验设计分别加入各处理因素.不同浓度
(10,,3×10,,10,3×10,mol?L)vIP培养16h
和3×10,mol?L..vIP培养2h,4h,8h,及16h后,
收集肺组织;于加入3x10,mol?LvIP前30min
分别加入钙调蛋白抑制剂7(10,mol?L)和
PKC抑制剂H7(10mol?L)以探讨vIP的作用
机制.
122肺组织细胞膜的CTP:磷酸胆碱二胞苷酰转
移酶活性的测定(1)分离提纯微粒体:对照组及
各处理组加人BufferA(50n眯唑,015MKCI.2
札?EDTA,pH7.4).按4m】?g湿肺组织匀浆1000
g和20000g分别4~C离心10min去除未破碎细胞
和线粒体.取上清100000g4~C离心60min分离微
粒体;加BufferB(50nm咪唑,0.15MKC1,2mkl
EDTA,pH70)人微粒体,测蛋白质浓度,使各组酶
浓度一致,均为0.8rm】.(2)C一磷酸胆碱掺人
量的测定:加加微粒体蛋白人反应液(16mlVl
c一磷酸胆碱,3.0rCTP,120mMM,50mkl咪
唑,2.0mlVlEDTA,38mlVlKCI,pH70)37反应25
min,反应终止液(10%三氯乙酸,150mlVl磷酸胆碱)
终止反应.6%活性碳吸附反应产物CDP-C胆碱,
1000g离心5rain,并用微孔滤膜(045Il?1)过滤收集
活性碳,用水反复洗涤3次后加入1提取液(乙
醇:氢氧化铵:水为190:11:1l8)反复萃取4次,液闪
计数测定CDP-”C胆碱的产量.CTP:磷酸胆碱二胞
苷酰转移酶(CT)活性用每毫克蛋白质nmol-rain
表示.
13统计学分析实验数据以?s表示,采用方差
分析.若F>0.05,组问比较则用q检验,P<0.05
示差异有显着性意义.
2结果
2.1VIP对CTP:磷酸胆碱二胞苷酰转移酶活性影
响的量效关系用浓度为l0,,3×10,mol?L的
V口作用l6h,在浓度为3x10m01-L时即可引起
crP:磷酸胆碱二胞苷酰转移酶的活性增强,并随着
VIP浓度增加,酶活性增加(r=0.97l4,P<001).
2.2vIP对CTP:磷酸胆碱二胞苷酰转移酶活性影
响的时效关系用3×10mol?LVIP作用2l6
h,于作用8h时,酶的活性开始显着增强(P<
0.01);随着作用时问延长,酶活性逐渐增加.但作
用时间过短(<8h),VIP对酶活性的影响与对照组
相比,差异无显着意义(P>0.05,图1).
o481216
Time(h)
圈1VIP对cn:磷酸胆碱二胞苷酰转移酶恬性影响的时
教关系
F.1TheIdep目’d肌I缸0n0fsliH山effect0fva90奸d
inle~tlmlpeptiae(~P)OI3cm踟tc1P:.hm?
曲ne一咖?(cr)哼
w_7和H.7对VIP预处理后crPl磷酸胆碱二胞苷酰转移醇括
Hg.2E口ectofw.7H-7mcrPlrIc}Idmeqdybn-嚣e性的影响(n=10)?与@@组比较,P<0_01
(cr)activity(n=9rP>0.o5饵叫,Hg3Thel伸.geffectofVIP(3x10一’mol?L’)mtIIemic瑚口_lBl
c:I呷IIkll0I.眦dy黜(cr)由wagp
~lishedW_7mdH.7印ecy(n=10).?(0-101
回@
4讨论
Ps合成的调控可通过离体肺,肺组织块培养及
肺泡?型上皮细胞培养三个水平来研究本实验通
过探索所建立的肺组织块培养作为研究Ps合成调
控的平台,具有实验条件易于控制,模拟性好的优
点,且测定cIP:磷酸胆碱二胞苷酰转移酶活性即在
离体肺组织培养的基础上进行.
Ps的主要成分PC是由胆碱在胆碱激酶和磷酸
胆碱胞苷酰转移酶作用下生成CDP-胆碱,然后与二
酰基甘油生成PC,而CTP:磷酸胆碱二胞苷酰转移
酶活性将直接关系到PC的合成速率,是Pc合成的
限速醇本室的前期工作
证明
住所证明下载场所使用证明下载诊断证明下载住所证明下载爱问住所证明下载爱问
肺内神经肽内皮
素1在生理浓度时能与肺泡II型上皮细胞的ETA
受体结合上调Ps的合成与分泌.研究表明,广泛
存在于人和动物呼吸系统内的v具有显着的抗
炎,抗损伤,扩张平滑肌,抑制嗜酸性粒细胞的释放
与黏附等作用.在表皮生长因子或其它应激条件
下,肺泡巨噬细胞,支气管上皮细胞等分泌的VIP明
显增多[9],而本研究结果显示,VIP能增强CTP;磷
酸胆碱二胞苷酰转移酶活性,表现出明显的量效关
系与时.效关系,从而促进Ps的主要成分Pc的合
成,提示肺内微环境中的神经肽VIP对Ps合成有重
要的调节作用.
钙调蛋白和PKC是细胞内信号转导的重要分
子为进一步探讨v口促CTP:磷酸胆碱二胞苷酰
转移酶活性的作用机制,本研究采用w.7和H.7分
别阻断钙调蛋白和PI,均显示抑制VIP对该酶的
上调作用,提示细胞内ca2.钙调蛋白以及PKC的激
活是vIP促Ps合成的细胞内信号转导的重要环节.
探讨VIP对Ps的作用将有助于进一步阐明肺内微
环境自稳态的调控网络,为呼吸窘迫综合征等临床
疾病的防治提供理论基础.
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(本文编辑陈扬宝)