毛细管电泳多次进样法快速测定尿肌酐

毛细管电泳多次进样法快速测定尿肌酐 V o l. 16 N o. 2 第 16 卷第 2 期 色谱 CH IN E SE JOU RN A L O F CH ROM A TO GRA PH Y M a rch 1998 1998 年 3 月 Ξ 毛细管电泳多次进样法快速测定尿肌酐 程明刚梁统周克元凌光鑫 ( ) 广东医学院生化教研室 湛江 524023 36cm ×50Λm i. d 涂层柱, 011mm o lL pH 2. 5 采用毛细管电泳多次进样技术快速测定了尿肌酐。采用 ƒ提 要 的磷酸缓冲液, 在 200处检测。连续进样 5 个样品总分析时间为 12, 比单次进样节省 20左右。日内、 nm m in m in 日间变异系数均小于 710% , 用吡啶作内标, 在肌酐浓度为 5, 80ƒ范围内, 肌酐浓度与肌酐同吡啶的峰高 m gL ( ( ) ) 比值的线性关系很好 r = 0. 999 6。测定 12 个样品同生化分析仪测定的结果相关性好 r = 0. 977 3, 且分析时 30。间节省了约 m in 毛细管电泳法, 肌酐, 尿, 多次进样技术关键词分类号 658ƒ5O Q (纯试剂。内标吡啶 1溶于 20ƒƒ2. mm o lL mm o lL pH 1 前言 ) 5 的 磷 酸 缓 冲 液, 所 有 试 剂 均 用 三 蒸 水 配 制 并 经 0145的膜过滤。Λm 血清、尿肌酐浓度在临床上已作为评价肾功能 212 色谱条件的有用指标, 且在随意尿中评价如凝血和纤溶系统 运 行 电 压 16, 200紫 外 检 测, 压 力 进 样1 kV nm () ( 标志物 纤维蛋白肽、肿瘤标志物 假尿嘧啶核A 3415?正极进样负极检测, 样品室温及毛细管 , k P as3 2) 以及违禁药物筛查等均需肌酐参照。1886 年苷柱温为 25?, 运行缓冲液为 011的磷ƒ2. 5 m o lL pH 4 ′建立了肌酐测定的苦味酸法已沿用至今, 但 J affe 酸缓冲液。该法特异性差, 许多内源性物质如蛋白质、尿酸、葡 213 尿样测定 5 6 取新鲜尿 20用三蒸水稀释 25 倍。 从中取出ΛL 萄糖等会产生干扰; 酶法及反相色谱法测定肌 20加等体积的内标吡啶, 离心后进行 分析;酐虽特异性及灵敏度高, 但前者需要高纯度的酶, 后ΛL C E 者分析时间长、消耗大。 同 时 取 出 100加 等 体 积 的 水, 用 美 国 康 宁 公 司ΛL ( ) 毛细 管 电 泳 , 作 cap illa ry e lec t rop ho re sisC E ( 505 型 全 自 动 生 化 分 析 仪 本 院 附 属 医 院 检 验 科, 为一种新兴的分析技术, 在临床检验中的应用日益 ) ′氏反应法测定。J effe 引起重视, 这不仅因为它高效、分析时间短、需样量 214 标准曲线小、消耗低、全自动化, 而且还因为它具有通用性, 可 7 分离多种多样的化合物, 如血清ƒ尿中的蛋白质、 用倍比稀释法配制 10, 160ƒ的肌酐标准 m gL 无机离子、氨基酸、药物及其代谢产物等。 本文探讨 品, 取出 20加等体积的内标分析。ΛL 了 检 测 尿 肌 酐 的 条 件 并 建 立 了 多 次 进 样 的 方 C E 215 多次进样技术法, 大大节省了分析时间。 用 3 个操作程序进样, : 常规冲洗毛细管柱进 A 样, 4运 行 1停 止, : 无 冲 洗 程 序 进 样, 4kV m in B kV 运行 1停止, : 无冲洗进样, 16运行 5。 5 m in CkV m in 次进样方法: 程序 进样样品 1?程序 进样样品A B 2 实验部分 2?程序 进样样品 3?程序 进样样品 4?程序 B B C 211 仪器与试剂 进样样品 5。 整个过程编好后均可自动进行。TM 3000 美国2型毛细管电泳仪, 配 B io R ad B io fo cu s 有二极管阵列检测器。 用 2积分软件处 5. 0 B io R ad 理数据。 36×50丙烯酰胺涂层柱由中科院大 cm Λm 连化学物理研究所提供, 安装在 2公司的柱 B io R ad 3 结果 组装卡内。 311 色谱结果 肌酐标准品购自 公司, 其它为国产分析S igm a 单次进样肌酐、吡啶, 迁移时间分别约为 4118 图 1 5 个样品 5 次进样分析图(). 5 个不同浓度尿标准品的图谱, 15 个不同浓度尿样图谱, 1 同一尿样连续进样 5 次的图谱abc . 1 F igM ult iple in jec t ion ana ly s is of f ive sam ple s obta in ed f rom a. f ive stan dards w ith d if f eren t con cen tra t ion , b. f ive d if f eren t ur in e s, c. the sam e ur in e 峰 1, 5 为吡啶, 峰 6, 10 为相应的肌酐, 峰 1 和 6 代 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 第一次进样, 峰 2 和 7 代表第二次进样, 其余类推。 ( ) 25 , 6210 , 1 6 1P eak s stand fo r p y r id ine th e in te rna l standa rdp eak s stand fo r c rea t in inep eak s and stand fo r th e f ir st in2 , 2 7 , .jec t io n p eak s and stand fo r th e seco nd in jec t io nand so o n 312 标准曲线 杂峰。 在本文条件下尿中存在的尿酸、尿素、肌酸等用 5 次进样法分析 5 个不同浓度的标准品, 在 5 , 用二极管阵列检测器作多波长扫不干扰测定。另外( ) , 80的范围内肌酐浓度 Y 与相应的肌酐同ƒm gL 描也证实了尿中的肌酐峰。 315 尿样测定 () 19. 4X + 内标的峰高比值 X 的线性关系为 Y =( )018 r = 0. 999 6。 采用本法测定了 10 个正常人尿样及 2 个标准313 重复性实验 肌酐样品, 同生化分析仪测定结果比较有好的相关同一尿样连续进样 5 次的图谱见图 12。 5ƒ cm g( )性: Y = 1101X + 2199 r = 01977 3。 ƒ的标准品连续进样 5 次, 其峰高比的变 , 40L m gL 异系数分别为 4159% , 5112% , 3119% 。 5 个不同尿 4 讨论样用 5 次进样法 3 天内共分析 5 次, 肌酐与吡啶峰 高比的变异系数见表 1。 毛细管电泳存在进样偏差, 尤以电迁移进样为() 表 1 5 个尿样的日间 = 3变异系数n 显著, 我们采用压力进样并用内标校正来克服。在实( ) Table 1 The be tween - day CV % of the peak he ight ( ra t io s of crea t in in e an d pyr id in e in f ive ur in e 践中 5 次进样时吡啶、肌酐的峰高虽有差异 这可能 是由于进样偏差及尿样内组成成分的不同所导致的 8 ) “堆积效应” 的差异, 但肌酐同吡啶的峰高比值的 峰高比值 P eak h e igh t ra t io 重复性很好。尿样 第 1 天 第 2 天 第 2 天 第 3 天 第 3 天( )CV % Sam p le 1 st 2nd 2nd 3 rd 3 rd () 从理论上讲, 连续进样技术的进样次数 N 有 day day day day day 一限值。假定单次进样分析图中仅有两个峰, 此时两2192 105 107 105 185 126 333231 ( ) 峰迁移时间的差值 t约为一定值。要确保多次进0 3155 3155 3122 3129 3145 4143 2 () 样时相邻峰的分离度 R , 则R 至少为 1, 此时N 仅S S 1103 1103 1109 1115 0196 6180 3 3121 3127 3116 3121 3102 2198 4 与相邻两峰的峰宽有关。根据 R 的表达式, 在 R 为S S 5 2141 2149 2148 2152 2127 4111 () 1 时两峰峰宽之和为 2 倍的迁移时间之差 2?t, 此 ( 约为进样的时间间隔 确切地讲应是进样后电泳时314 干扰实验 用单次进样法分析了正常人和 、恶性肿瘤、 D IC 间和压力进样时使前次进样的待分离组分被动移动大手术后病人原倍尿样, 在 9前出峰的物质除肌 m in ) 。根据相同条件下的距离在实际电泳时所需的时间酐外, 其它峰均较低, 且在稀释 50 倍后分析无别的 待分离组分的迁移时间同电压之间的正比关系, 很 2 期程明刚等: 毛细管电泳多次进样法快速测定尿肌酐?151? 容易通过降低电压来控制进样的时间间隔, 从而控致谢 感谢附院检验科生化室协助用生化分析仪测制进样次数 。 本文在程序 和 的运行电压降为定尿肌酐。 A B () 2时可连续进样 9 次仍不损失分离度 见图 2。kV 参 考 文 献 1 刘 莉, 宋善俊, 魏文宁等 1 临床血液杂志, 1996, 9: 5, 7 , , . 2 Geh rk e C W Kuo K C W aa lk e s T P e t a lC ance r , 1979, 39: 115021153R e s , , . 3 S im p so n D J a rv ie D R M oo re F M L e t a lC lin , 1993, 39: 6982699C h em ′2395. , 1886, 10: 391J effeM Z P h y sio l C h em 4 , , . ,Fo ssa t i P P renc ip e L F e rm o I e t a lC lin C h em 5 1983, 29: 149421496 图 2 9 次进样图 , , . ,P a ro n i R A rce llo n i C F e rm o I e t a lC lin C h em 6 . 2 F igChroma togram of n in e in jec t ion s 1990, 36: 8302836 本文采用 连续进样技术可大大缩短分析时 C E ( ) . , 1995, 41 4: 4952509L ande r s J PC lin C h em 7 (间 12 个样品总分析时间约为 30, 而生化分析仪 m in , Ø 226. , 1991, 559: 3V ith e r A Sebe rg HJ C h rom a to g r 8 ) 约 需 60, 方法可靠, 为临床肌酐测试提供了一m in () 种简便、低消耗 仅耗几微升的缓冲液、全自动的途 径。 Ra p id D e term ina t ion of Crea t in in e in Ur in e by Ca p illa ry E lec trophore s is in a M ult ip le In jec t ion M ode C h en g M in ggan g, L ian g T o n g, Zho u K eyu an an d L in g Gu an gx in (), , , 524023D ep a r tm en t of B ioch em is t ry G u ang d ong M ed ica l C ol leg eZ h anj iang A bstrac t T h e leve l o f u r ina ry c rea t in ine in c lin ic d iagno sis is o ne o f th e u sefu l index o f rena l func t io n , and is . , o f ten u sed a s a refe rence o f som e b io ch em ica l sub stance de te rm ined in random u r ineIn th is p ap e ra rap id () 2m u lt ip lein jec t io n cap illa ry e lec t rop ho re sis C E m e tho d fo r th e de te rm ina t io n o f u r ina ry c rea t in ine is repo r t2 ) (ed. A 36cm ×50Λm co a ted cap illa ry, a p ho sp ho r ic ac id buffe r 0. 1m o lL , pH 2. 5and U V 2de tec to r a t 200nm ƒ . , w ave leng th w e re u sed in th is m e tho dIn com p a r ing w ith sing le in jec t io n fo r f ive sam p le sth e ana ly sis t im e o f 20. , f ive succe ssive in jec t io n s can save m inB y u se o f p y r id ine a s in te rna l standa rdth e co r re la t io n be tw een th e ( r = co ncen t ra t io n s o f c rea t in ine and th e co r re spo nd ing p eak h e igh t ra t io s o f c rea t in ine and p y r id ine is goo d ) 01999 6, . 2and th e a ssay p rec isio n is accep tab leW e a lso com p a red th e C E m e tho d w ith th e b io ana ly se r () ( ) ′r = 0. 977 3, n = 12 , J effek ine t icand th e re su lt s show ed a sa t isfac to ry co r re la t io n and a sho r te r ana ly sis.t im e , , , Key words cap illa ry e lec t rop ho re sisc rea t in ineu r inem u lt ip le in jec t io n