左旋千金藤定碱对培养牛主动脉血管平滑肌细胞胞内游离Ca^2＋？…

左旋千金藤定碱对培养牛主动脉血管平滑肌细胞胞内游离Ca^2＋？… 左旋千金藤定碱对培养牛主动脉血管平滑 肌细胞胞内游离Ca^2，,… .358.中国药理学通报ChlePh洲口?口tcatBuaf'n1997Aug;13(4):358~61 j 左旋千金藤定碱对培养牛主动脉血管平滑肌左旋千金藤定碱对培养牛主动脉血管平滑肌 . 细胞胞内游离Ca.+的影响 塑堡 (南京医科大学药理学教研室,南京 中田田 书 关于书的成语关于读书的排比句社区图书漂流公约怎么写关于读书的小报汉书pdf 分类号R282.71cR972 ?委目的自研究左旋千金藤定碱(]-stepholidin~,SPD)对 血管平滑肌的作用.方击{采用Fura一2和AR-CM-MIC阳 离子测定系统测定培养牛主动脉血管平滑肌细胞内游离 钙.蛄果:SPD1,100岬0l?L不影响静息[已'+].,但可 剂量依赣地抑制高K引起的[增高,其I沩39?6 (95可信限23.4,67.1)umol?L,,但其作用弱于尼群 地平;SPD卜100m.1?L-t对去甲肾上腺索,血管紧张紊 1,S-HT,ATP引起的[已!增高也有明显的抑制作用; 高浓度SPD对无外钙时去甲肾上腺索引起的lea抖增高 也有一定的抑制作用.蛄袍:左旋千金藤定碱对培养血管 平滑肌细胞电压依帻性钙通道和受体调控性钙通道均有 抑制作用}其对电压依赖性钙通道的抑制作用弱于尼群地 平. 关键调左旋千金藤定碱{堡{血管平滑肌}细胞内钙 左旋千金藤定碱(1-stepholidine,SPD)是从云 南防己科植物河各地不容(S~hanmintermedia LO)中分离出来的生物碱,属四氢原小檗碱同类 物(tetrahydroprotoborborine~,THPB),且是其中作 用较强的一种.SPD除具有多种中枢药理作用 外",近年的研究表明它还具有抑制心肌收缩力, 保护缺血心肌.,抗心律失常.,抗高血压"'等多 种心血管药理活性目前对其心血管药理活性的 作用机制尚无定论,有研究提示可能与膜ca转 运有关.我室研究表明SPD对心肌细胞电压依赖 性钙通道和受体调控性钙通道均具有一定的抑制 作用"'.为了进一步阐明SPD的心血管作用机 制,本文观察了SPD在不同条件下对培养牛主动 脉血管平滑肌单个细胞内游离Ca(ECa"]一)的 影响,并与尼群地平(Nitrendipine,Nit)作了比较, 以对SPD的抗高血压作用机制进行初步探讨 1材料和 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 1,1药物SPD由中国药科大学赠送,纯度> 1997—05—04收稿' 作者简舟:李新天.女.28岁.硕士,主要研究方向为心血管药理 王幼#.女.58岁.教授.从事心血管药理基础研究 98,用少量0.1tool?L硫酸溶解.用蒸馏水配 制成1mmol?L_.,低温避光保存备用.临用前用 NaOH1.0tool?L一-调节pH至5.0并稀释至所需 浓度;尼群地平购自南京制药厂,纯度>98;Fu— ra一2/AM,胰蛋白酶,血管紧张素i(Ang?),iono- mysin,EOTA,ATP和RPM1—1640培养基均购自 Sigma{5-羟色胺(5一HT),瑞士进口分装;去甲肾上 腺紊(NE)注射剂贝目自天津和平制药厂;酚妥拉明 注射剂,瑞士CibaFura一2/AM用DMSO配成1 mmol?L后,分装并于一20~C保存备用.其余试 剂均为分析纯,所有的试剂和溶液都用去离子三 蒸水配制 1.2仪器AR-CM-MtC阳离子测定系统和 DM3000软件(SPEX公司,美国) 1.3血管平滑肌细胞培养及负载按文献"用 胰蛋白酶法,无菌取出新生1d乳牛(江苏省南京 卫岗血清厂)的胸主动脉,用1.25g?L胰蛋白 酶消化,分离,纯化,用含200g?L-【,J,牛血清的 RPM1—1640培养基调节成1×10.个?L的细胞 悬液,接种于100ml培养瓶内,送入含0.05c 的孵箱中于37C培养,3d换一次液,约7d左右, 细胞贴壁融合生长成一单层.此时仍用1.25g? L胰蛋白酶消化液消化传代,并用含100g?L 小牛血清的RPM1—1640培养基培养.测ECa 前最后1次传代后,将细胞接种于孔底铺有盖玻 片的24孔培养板内细胞贴壁后,用含5g?L 小牛血清的RPMI一1640培养基同步化约56,72 h.实验取3,4代细胞.实验前弃培养基,加入 Fura一2/AM终浓度为3txmol?L的负载液,于 37~C温孵d0man,用Hanks液冲洗2遍,最后置于 室温Hanks液(pH7.2,7.d)中备用. 1.4细胞内游离c的测定采用AR—CM—M1C 阳离子系统和DM3000软件,激发光波长为340 和380ilm,发射光波长为505Tlm,时间增量为2 S将负载好的细胞放在特制的,内有平衡盐溶液 (37c,pH7.2,7.d)的浴槽中,于倒置显微镜 )L,C R尺 中国药理学递幢^愀Pha~macto9~cat"1997Aug;13(d)?359? 下,每次选取1个平滑肌细胞,在避光条件下,连 续 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 单个平滑肌细胞在给药前后的荧光变化, 得到Fm/Fa.o的比值.计算[ca]1前应减去自身 荧光.[c]1的 计算公式 六西格玛计算公式下载结构力学静力计算公式下载重复性计算公式下载六西格玛计算公式下载年假计算公式 为:[ca]1=一?(R — R)/(R—Rm)?(Sbl/S)nmoI?L,.Kd= 224nmol?L,.R,和R,通过加入钙离子载体 ionomycin和钙蝥合剂EGTA获得.给出上述相应 参数,计算出[ca]j值. 测定SPD对高K,NE,AngI,5-HT,ATP等 激动剂引起的[ca]j增高的作用时,预先加入 SPD在37?条件下预孵4,5min,各样品再分别 加入上述不同的激动剂,而对照组只加入激动剂, 浴液随离子浓度的变化加减NaCI的浓度,使之始 终保持等渗.SPD溶媒和实验剂量的SPD对340 Tim和380Elm处的荧光比值无影响. 1.5统计分析数据均用;士s表示,组间比较 用f检验. 2结果 2.1激动剂静息[ca]I的影响当细胞外 Ca"([ca].)浓度为2.0mmol?L时{牛主动 脉血管平滑肌细胞静息[ca]1为101士19.4 nmol?L_.;当细胞外ca浓度为0mmo]?L加 EGTA0.05mmo]?L时,细胞静息[ca"]为5l 士19.0nmol?L一.SPD1,100~m'lol?L不影响 细胞静息[ca]1.在胞外ca为2.0mmo]?L 时,KC160mmo[?L,,NE10mo1.L,,AngI 100nmol?L_.,5-HT21.L和ATP30umol ? L使[ca"].分别升高了443,293,525, 247和346.在外ca为零加EGTA0.05 mmol?L时,NE10岬oJ?L使[ca]升高了 224(见图1). 2.2对KCI去极化引起的[ca]升高的影响 细胞浴液中单加入KCI60mmo]?L_',[ca]1升 高了443%.分别预先加入SPD1,10,30,100 mo1?L-.,再加入同剂量KC1,则使升高的内钙分 别降低了15%,34%,48%,6O%,SPD表现了一 定的剂量依赖性,其Icso为39.6(95%可信限 23.d,67.1)mo1.L-..而同样条件下,Nit3 pmol?L则使升高的内钙降低了72%(P< 0.01,vsSPD10jztool?L剂量组,见图2). 2.3对NE引起的[ca"]I升高的影响在 [ca].为2.0mmol?L时,NE10pmol?L使 [ca]I平均升高了293%(NE,);分别预先加入 口?trcIEa$cn~t 800f攀 二 , { d SPD/~mol?L- 围2SP]D(1~I@DpJ~al-L一')和NIt(1lilmol?L一')对KCI (iommol-L一引向的培井血警平滑^细胞[斗 升高的抑制作用(;土810) 与KCI相比.一P<001J与尼群地平(Nil)相比.P< 0.01 SPD1,10,30,100umol?L,,再加入同剂量NE, 则使升高的[ca].分别降低了I1%,20%, 48,5d%;在[ca].为0mmol?L+EGTA 0.05mmol?L时,NE10mo卜L使[ca]平 均升高了224%(NEz);分别预先加入SPD10,30, 100岬o1?L-.,再加入同剂量NE,则使升高的 [ca]1分别降低了l6%,2d%,38%(见表1). 2.4对AngI引起的[c-"]j升高的影响在 [ca].为2.0mmol?L时,AngI(angiotensin I)100nmol?L使[ca]平均升高了525%; 分别预先加入SPD1,10,30,100mo1.L_,再加 入同剂量AngI,则使升高的[ca]1分别降低了 23,34,45%,6d%(见表2). ?360?.中国药理学通拉口^nesePharl"~acologicaiBulLetiu1997Aug;la(4) NEt397?24?1285?232'2?18?0' NE:165士l9.7154士13.2147士21.4 255士19.2' 138士14.8 237士16.4. 122士19.6. NEt为有外钙,NE=为无外钙}与对照组相比.'P<O.0S,一P<O.01 衰2SPD(L~l00pmol?L一)对血管紧张素1(AngI100nmol-L一.).5-羟色胺 (5?HT21amol?L一)和ATP(80.umol?L一') 引恕的培养血管平滑肌细胞[c-H]l(nml?L一)升高的抑糖作用(;士a~lO) 与对朋组对比,P<0.05.一P<0.01 2.5对s—HT引起的[ca一]I升高的影响在 [ca抖].为2.0mrnol?L一'时,5HT2m01?L 使[-ca平均升高了247;分别预先加入SPD 1,10,30,100gu'nol?L-.,再加入同剂量5:HT,则 使升高的[-ca分别降低了9,17%,36, 45(见表2). 2.6对ATP引起的[ca].升高的影响在 [-ca1为2.0mngol?L时,ATP30pmol?L一, 使[-ca平均升高了346;分别预先加入SPD 1t10,30,1001.1mol?L再加入同剂量ATP,则使 升高的[ca]j分别降低了11,23,39, 45(见表2). 3讨论 我室曾发现SPD有轻度升高心肌细胞静息 钙的作用.,但在血管平滑肌细胞,SPD不影响静 息[Ca]I值.造成这种组织作用差异性的确切原 因尚不清楚,本实验测定的主动脉血管平滑肌细 胞静息[Ca]值与文献.报道的静息[ca].值 基本一致. 众所周知,细胞外高K状态可引起细胞膜去 极化并开放电压依赖性钙通道,促进胞外Ca内 流,这种胞内Ca升高很少或没有内质网Ca的 参与;有外Ca情况下,去甲肾上腺通过a.受 体,一方面促进外Ca"内流,一方面促进内ca+ 释放.无外Ca"情况下,去甲肾上腺素激活n.受 体只促进胞内释放";有外ca情况下,Ang I,5-HT和ATP分别通过AT,5-HT和ATP受 体,促进胞外Ca内流和胞内Ca释放CL[~]33. 本实验结果表明,SPD对高K去极化引起的 [-ca].增高呈剂量依赖性抑制,这说明SPD对 电压依赖性钙通道确有抑制作用,但对跨膜ca 内流的抑制作用明显弱于Nit.SPD对NE,Ang?, 5-HT,ATP引起的[Ca升高的抑制,说明SPD 对多种受体调控性钙通道也有一定的抑制作用, 上述几种受体激动剂升高[-ca]既与外Ca+内 流有关.也与内钙释放有关,受实验方法的限制, 本文只观察了SPD对平滑肌稳定相的作用.在外 Ca为零时,高浓度SPD对去甲肾上腺索引起的 [Ca]升高有一定抑制作用,这提示SPD对细 胞内Ca释放可能有轻度的抑制,至少在抑制通 过%受体引起的胞内[Ca]】升高方面是这样 的.SPD是否抑制血管平滑肌细胞内Ca释放及 阻滞受体调控性钙通道的确切作用机制尚需进一 步的实验证明. 参考文献 Tan8XC?|IsuB.Phaxmacologieactions0f onthecentralne[ou~system.撺 2ZhouJ,Xu~tiiB,LJDX.Efl~crsoftetrahydrolberberineoffis. chemicandreperfusedmyoeardiuminra.Actar加c?. 1993;L4:13O,3 3ZhaoDHtoGD.ShengBH.WangFC.TILeexperimental ~tiarrhythmi~effe啦ofIs~tepholidlne.^n哪f. I9884358 4沈德莉.叠国章,贺畦芳左旋千叠荣立定对血压和a,肾 上腺索受体激动剂KCI厦CaC1:I起主动脉收鳍的影响.中 国药理.199I}12:514,8 5李新天?王幼林-王叠唏,榜思军.四氢原小檗碱类药物对培 养大鼠单十心肌细胞内游离Ca的影响.药学.1995; 30,56,72 6Chmky—campbellJ,CampbellG,R0R.Thesmithmu*cle ?l_incultureP/Igs胁,197989160 7GrynkiewiczG.P~nleM.?RYAn0wgenerationof0: indicatorswithgreatlyimprovedfluorese~ceproperties.J cm,1995;2603440,5O 8SugiyamaT.~c~hizumiM.TakakuF,UmbeHTheeleradon ofcytoplasmiccalciumionsinvascularsm?mmusclecellsin 所彳f伽寄,氢 中国药理学通报ChinesePhm'maco/ogicalBslIelin1997Aug;l3(4):361,3?361? ,, ,7j肝素的平喘作用 明亮张艳李卫平王瑜徐叔云 —一瘴医-药理学蓑研宣.合肥230032) 中国田书分娄号R562.25fR974.3 ?耍目的:探讨肝紊的平嘴作用.方法:采用豚鼠整体动 物引喘法和兔改良肺滥流法观察肝紊的平喘作用;采用 Gf蝴法观察肝素对骣鼠血清一氧化氨(N0)含量的影响; 采用二甲苯诱发小鼠耳肿胀法以及大鼠松节油气囊肉芽 肿法观察肝素对炎症的影响;采用小鼠断尾法和豚鼠玻管 法观察肝素对出凝血时间的影响.结果:肝紊气雾给药, szo.83,1041.66U-k5_.可使豚鼠引喘潜伏期延长{ 521).83U?kg可使兔肺溢流量减少{1041.66U-kg..可 使睬鼠血清NO含量增加.但等剂量的肝紊对动物的急, 慢性炎症及出凝血时间无明显影响.结论:小剂量肝素气 雾给药有明显的气道扩张及平喘作用;此剂量肝素的应用 可盛免出血颊向等不良反应的发生;其平喘作用可能与抗 199701—3l收祷,1997—03—02修回 作者豌舟:明亮.女,9岁,副教授 77;, 7q,. g 炎作用无直接关系pNO古量升高与其平喘作用有何联系. 尚待研究. 关蕾调肝素}哮喘}一氧化氨 肝素作为疗效可靠的抗凝药物在临床已应用 多年.近年来,随着基础和临床研究的进一步深 入,发现了许多肝素非抗凝方面的药理作用,如抗 炎,抗过敏,免疫调节,抗病毒以及抗肿瘤等".动 物实验及l瞄床应用资料表明肝素能扩张气道,治 疗哮喘.,本文从不同角度进一步探讨肝素的平 喘作用. l材料 1.1药品及试剂肝素注射液,上海生化化学制 药厂出品,用时以生理盐水配制;二甲苯,蚌埠化 学试荆厂产品;松节油,江西资溪制药厂产品;磷 SHR-M咖u姗enoffreeca]~p.rlnionsinsingleHyingCellsby j埘mk|o-flu?酏nom0ty+?hm胁,^p如(T帼… 1986;141:940,5 9BeanBP.Twokindsofc|kiumchannd日incanineatrialeelb. Dift啪no嚣inkindler.~vityandpmac蝴-JPlq~- .1985;e':1,30 10XuJL,Oi.Jal,tYY.ChenKMe/,CharacteroftheCaei'ttFyin— duced~ctivatJonof一ad~ertoccpto~inrataorl~.P/~rm#- ?.1994}10:191,4 11&dotTJ.ThereseJR,JersB"VasuinrsmoothmUSCle eelica)~iumfluxesregulationbyangiotensinIandl[po{)roteJ{ls. H咿蛔?荫,1993}Sl:l95,203 l2s'哪舢时MJ.n1ukw,Moctroi吐JD,Numph~yPPAStu一 _岫onthemechanism.f5-HT.r础ptor—induecedsmoothmuscle ?n?'_删lind0Bsa~eflolttsvein.J^M.1992I105: 603,8 13VonDcrWeidPY,s时eh丘kavVN,OmlloFet.Effectsof ^TP叽culturedsmooth?ele啤?啪rAtaorta曲?JP~ae- m时.1993;100:638,45 Effectsofstepholidineoncytosolicfreecalciumincultured bovineaorticsmoothmusclecells L1Xin—Tian,WANGYou—Ling (ofr州细,Nan9jin9Medical,:rs蚴,Naajirtg210029) ABSTRACI"AIM:Tostudytheeffectsofstepholi— dine(SPD)oilintracellularCa抖.mculturcdVaSCUtar smoothmusclecells(vsMC).METH0DS:Thecy— tceolicfreecalcium(ECa1I)inculturedbovineaor ticVSMCwereexaminedusin【gFura一2/AMandAR CM—MlCcationmeasurementsystem.RESUI腮. SPD(1,l00pmol?L)hadaoeffecesoilthere ingECa]l'butinhibitedtheelevationofECa]J inducedbyKCAdose—dependantty,the1C5ovalueof sPDbeing396(95confideilcelimits23.4, 67.1)pmol?L-.,ltseffectswereweakert}Ianthose ofNit;sPD(1,l0Ogmol?L_.)Wasalsoshowato inbibRtheelevationofECa]linducedbyNE,Ang 1.5一HTandATPintheprescenceofextraceUutar Ca+.Inthea~nceofextraoellular(1丑0.SPD3O ,100mol?L一'alsoshowedSomeblockingeffects onNE-inducedelevationofrca]I.CONCLU— sl0NS:SPDmighthavetheinhibitoryeffects0a bothVocand— RoCbovineaorticsmoothmuscle cells.butitseffects0aVoCwereweakerthanth .fNit. KEYw0RDSsteptlolidinetFura一2;V~ISCU[ar smoothmusclel_mtracellutarcalcium