反相高效液相色谱法测定尿样中维生素C、B 1 和B 2 的浓度

反相高效液相色谱法测定尿样中维生素C、B 1 和B 2 的浓度 DOC格式论文,方便您的复制修改删减 反相高效液相色谱法测定尿样中维生素 C、B 1 和B 2 的浓度 (作者:___________单位: ___________邮编: ___________) 作者,李映章 张志宇 梁晟楠 【关键词】 色谱法 水溶性维生素与人体的生长发育和健康有着密切关系,在人体的生命活动中具有十分重要的作用,它们在人体内的含量是衡量一个人的健康指标。目前VitC,VitB 1 和VitB 2 传统测定方法中,VitC常用2,4-二硝基苯肼比色法和2,6-二氯靛酚钠盐滴定,这两个方法灵敏度较低,特异性差,目前一般科研项目都不采用这个滴定法;Vit B 1 和Vit B 2 可用荧光法,但该法前期处理操作繁冗,费时费力,其处理方法和过程增加了影响检测精确度欠佳的人为因素。本文数据采用液相色谱法分离检测。 1 实验部分 1.1 仪器 SY5000LIQUID CHROMATOGRAPII,BEIFN,具UV/VIS检测器,色谱柱:Lichrosphcr C18,4.6×250,5μm,TL9900 DOC格式论文,方便您的复制修改删减 色谱数据工作站。 1.2 试剂 本实验所用水为石英亚沸蒸馏水,以0.45μm水性微孔滤膜过滤。所用试剂均为 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 纯,AR,,甲醇为一级色谱纯,标样维生素C、B 1 、B 2 贮备液以0.01mol/L草酸配制,在4?冰箱中保存。VitC临用新配。流动相A:0.05ml/L KH 2 PO4缓冲液,pH6.00,;流动相B:甲醇。均经0.45μm水性微孔滤膜过滤,超声波脱气后使用。整个操作应避光,且操作过程要迅速,以防维生素被氧化。 1.3 样品处理 检测学生起床后将昨晚尿排空,空腹以200ml水送服VitC500mg,VitB 1 5mg和VitB 2 5mg,然后收集服药后4h内排出的尿于1000ml广口棕色瓶中,并加4%的草酸防护,尿液经0.45μm微孔过滤器过滤 ,4, ,超声波脱气后即可上色谱柱分离检测。 1.4 色谱仪工作条件 色谱检测的流动相由磷酸二氢钾A和甲醇B组成,其比例为90?10和65?35。流速1.0ml/min,柱温:室温,波长:266nm,柱前压:168,240ATM。 1.5 标准曲线制作 配制一系列不同浓度的混合液,经检测得出的数据作出如下3种维生素的标准曲线,如图1示,。 DOC格式论文,方便您的复制修改删减 1.6 色谱检测 分时间段采样,每采一批样有30个左右尿样。样品处理后,按标准样品检测的条件,以外标法检测VitC、VitB 1 和VitB 2 ,经TL9900色谱数据工作站处理检测出的数据和图形。 2 检测结果 经检测,得出样品中所含3种维生素的量,通过分析可得出如下结果,图2为一个样品的VitC、VitB 1 和VitB 2 3种维生素的色谱分析图,: 色谱法检测得此样品中VitC、VitB 1 和VitB 2 的峰高分别为1805mV、40mV和386mV,从标准曲线计算出其4h内排出尿样中的三种维生素的量分别为2.58mg、0.44mg和0.42mg。从五个斑151个尿样检测结果来看,VitC缺乏的占检测总数的15.23%,不足的占13.90%,正常的占70.87%;VitB 1 缺乏的占1.99%,不足的占3.31%,正常的占94.70%;VitB 2 不足的占16.56%,正常的占52.31%,良好的占31.13%,正常以上的占83.44%, ,1, 。 3 讨论与 总结 初级经济法重点总结下载党员个人总结TXt高中句型全总结.doc高中句型全总结.doc理论力学知识点总结pdf 3.1 检测波长的选择 待检测的3种维生素中,VitC在261nm,VitB 1 在246nm,VitB 2 在260nm波长处有最大的吸收 ,2,3, ,本次实验曾分别选用以上3种波长检测这三种维生素混合液,以上波长都不是这3种维生素混合液的最大吸收波长,经试验, DOC格式论文,方便您的复制修改删减 最后确定266nm波长为三种待检测维生素的最佳检测波长。 3.2 回收率 测得人体尿样的3种维生素的含量,再加入已知浓度的标准品,混合后按1.6项操作,测其含量,得出其平均回收率的范围是90.12%,99.85%,变异系数在1.98%,6.56%之间,说明此种方法检测人体尿样中的维生素C、B 1 和B 2 3种水溶性维生素的含量是可靠的。 3.3 流动相确定 流动相由磷酸二氢钾缓冲液和甲醇组成,本实验曾以不同比例的流动相和波长对3种维生素C、B 1 、B 2 进行反复分离检测。通过实验,最终摸索出检峰形好,保留时间短的流动相组成比例。在磷酸二氢甲缓冲液?甲醇=90?10情况下,VitC保留时间在2.280,2.300min之内,VitB 1 在5.250,5.400min之内,VitB 2 在20min之后。此种情况分析一个的混合样至少需要25min,含平衡时间,。 在流动相比例65?35的情况下,VitB 1 保留时间9.120,9.310min。中VitC和VitB 1 出峰不好,拖尾严重。本实验曾试行以梯度洗脱法检测,可将3种维生素分开,但检测时间长,至少在25min以上,且出现拖尾情况。考虑到本实验要检测的样品数目多,需以尽快的速度检测,故采取分步检测法:在流动相比例90?10和65?35情况下分别检测VitC、VitB 1 和VitB 2 ,两次检测合计不用20min,且它们分离得好,波型都是VV波型。 DOC格式论文,方便您的复制修改删减 3.4 标准样品溶剂的选择 在VitC、VitB 1 和VitB 2 的标准溶液配制中,本实验曾采用盐酸、偏磷酸和草酸作溶剂。从实验情况来看,草酸是以上3种维生素较好的溶剂,其获得检测数据误差小,检测波型好,这可能是草酸对VitC、VitB 1 和VitB 2 具有更好的稳定作用。 3.5 流速 流速对检测精确度影响不大,但对检测保留时间影响较大。如流速1.0ml/1min,柱前压稍大一些,在200,240ATM之间,但仪器仍然可承受;如果流速变小,如0.8ml/min,虽然柱前压随之变小,约168atm,但保留时间却延迟5,10min,这对要检测大量样品是不可取的。故本实验采用1.0ml/min流速。 3.6 待检样品处理的注意事项 由于维生素类物质稳定性不好,样品在检测之前,加入适当的保护剂,力求低温保存,防强光照,争取在最短时间内进行检测,以防维生素被氧化。这些都是取得较高检测精确度的重要性举措。 3.7 总结 液相色谱法检测快捷,特异性好,灵敏度高;加上仪器具有色谱数据工作站软件,对数据和图形处理极为方便。故该方法是检测维生素物质的理想方法。 参考文献 DOC格式论文,方便您的复制修改删减 1 于守祥,刘志诚.营养与食品卫生监督检测方法指南.北京:人民卫生出版社,1980,9. 2 潘建国,王开发.高效液相色谱法同步测定花粉中的水溶性维生素.上海:同济大学出版社,2001,581-583. 3 成志强,孙成均.反相高效色谱法同时测定食品和多维片中8种水溶性维生素.分析化学,2001,,9,:1068-1071. 4 陈永明,刘放南.反相高效液相色谱法测定血中维生素C浓度.肠外与肠内营养,1998,,3,:163-164.