·165·
·临床实验诊断研究.
精浆中瘦素浓度与生殖内分泌激素的
相关性及其对精子功能的影响
张纪云
【摘要】 目的探讨精浆中瘦素(1ep)浓度与生殖内分泌激素睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黄
体生成素(LH)和胰岛素样生长因子1(IGF—I)浓度之间的相关性,以及对精子密度、运动能力及有关
生殖功能指标的影响。方法随机选择126例不育症患者和30名具有正常生育能力的健康男性对
照者,分别应用放射免疫分析(RIA)技术检测其精浆中的lep、T、FSH和LH浓度,应用免疫放射分析
(IRMA)技术榆测其精浆中的IGF—I浓度。根据精子数量的多少将不育症组分为A组(精子数≥
20×109几,即精子数量正常组)、B组(精子数<20X109/L,即少精子症组)和c组(无精子症组);根
据精液分析中10个高倍视野(HPF)出现WBC的多少,分为WBC精液组(精液中WBC≥1×109/L)
和非WBC精液组(精液中WBC<1X109/L);根据精子活力和活动率情况,将不育症A组分为精子活
力正常组(a+b≥50%)和不良组(a+b<50%)(a:快速前向运动精子数,b:慢速或呆滞前向运动精
子数),精子活动率正常组(活动率>160%)和下降组(活动率<60%);根据健康对照组检测结果,将
不育症A和B组分为精子穿透力正常组(穿透力≥40nnn)和下降组(穿透力<加nun),精子顶体完
整率正常组(完整率≥80%)和下降组(完整率<80%),精子尾部肿胀率正常组(肿胀率I>60%)和下
降组(肿胀率<60%)。结果不育症组精浆中lep浓度为(2.77±0.so)¨s/L,明显高于健康对照组
的(1.14±o.31)蟮/L,差异有统计学意义(t=10.943,P<0.05);IGF-1和T浓度分别为(17.67±
8.09)彬L和(4.84±2.15)mol/L,明显低于健康对照组的(24.794-9.32)vg/L和
(6.304-2.53)nmol/L,差异有统计学意义(t=4.205、3.228,P均<0.01);FSH和LH浓度分别为
(32.61±9.14)U/L和(40.57±12.40)U/L,与健康对照组的(29.63±7.56)U/L和(37.25-I-9.19)
U/L比较,差异无统计学意义(t=1.655、1.378,P均>0.05)。不育症组精浆中lep浓度与IGF·1和T
浓度之间存在明显的负相关(,=一0.237、一0.316,P均<0.01),与FSH和LH浓度之间均无相关性
(r=0.104、0.112,P均>0.05);A、B、C3组的lep浓度有逐渐增高趋势(F=115.93,P<0.01)。不育
症组中的精子活力与活动率正常组、非WBC精液组,以及精子穿透力、尾部肿胀率和顶体完整率正
常组的l印含量均低于不正常(或下降)组。结论精浆中lep浓度与IGF一1、T之间存在一定的相关
性,其可能通过抑制雄激素分泌和影响精子获能等导致精子密度下降和抑制精子的活力及活动率。
【关键词】不育,男(雄)性;精子能动性;精液;瘦素;睾酮;卵泡刺激素
Thepertinencebetweentheconcentrationsofseminalleptinandgenitalendocrinehormonesandthe
effectofleptinonspermaticfunctionZHANG五-yttrLDepartmentofLaboratory,ShandongMedical
College,tinyi276002,China
【Abstract】0bjLctiveToexplorethepertinencebetweentheconcentrationsofseminalleptin(1ep)
andgenitalendocrinehormones,suchastestosterone(T),foUiclestimulatinghormone(FSH),luteotropic
hormone(LH)andinsulingrowthfactor-1(IGF一1),aswell聃theeffectofLeponspermconcentration,
motilityandgenitalfunctionindexes.Methods126cagesofinfertilityand30casesofnormalfertilitywere
randomlychosen.ThecontentsofLep,T,FSHandLHweredetectedbyradioimmunoassay(RIA)andthe
IGF-1contentweredetectedbyimmunoradiometricassay(IRMA).TheinfertilitygroupWasdividedinto
groupA(spermcount≥20X10’/L),groupB(spermcount<20×10’/L)andgroupCof
azoospermia.Accordingtothenumberofwhitebloodcell(WBC)in10higIlpowerfields(HPF),the
infertilitygroupwasfurtherdividedintogroupWBC(WBCcount一>lX109/L)andgroupNon-WBC(WBC
DOI:10.3760/cma.j.iB8lL1009-9158.2009.02.011
基金项目:山东省教育厅科研发展基金资助项目(L02K15)
作者单位:276002临沂,山东医学高等专科学校医学检验系
万方数据
生堡捡验匿堂盘志!Q鲤生2旦筮丝鲞筮呈翘垡垡望!!坐丛鲤:&!型塑!Q丝:Y些21,丛兰
count<1×109/1.).Accordingtothespermvitalityandtherateofmotility,groupAwassubdividedinto
thegroupofnormalspermaticvitality(a+b/>50%),thegroupofabnormalvitality(a+b<50%)(arefers
tothenumberofspermswithfastforwardmovement,andbreferstothenumberofspermswithslowor
sluggishforwardmovement),thegroupofnormalrateofspermaticmotility(therateI>60%)andthegroup
ofdecreasedrateofmotility(therate<60%).Accordingtotheexaminationresultsoftllenormalcontrast
group,groupAandgroupBwererespectivelydividedintothefollowinggroups:thegroupofnormalsperm
penetratingpower(≥40mm),tIlegroupofdecreasedpenetratingpower(<40mm),thegroupofnormal
intactacrosomerate(≥80%),thegroupofdecreasedintactacrosomerate(<80%),thegroupofnormal
terminalswellingrate(I>60%)andthegroupofdecreasedterminalswellingrate(<60%).ResultsThe
concentrationofLepintheinfertilitygroupwas(2.774-0.80)斗g/L,significantlyhigIlerthanthelevelof
Lep[(1.14±0.31)恤g/L]inthecontrastgroup(t=10.943,P<0.05).ThecontentsofIGF-1andTwere
(17.67±8.09)斗g/Land(4.844-2.15)nmol/Lrespectively,significantlylowerthanthelevelsofIGF—l
[(24.79±9.32)斗g/L]andT[(6.30±2.53)nmol/L]inthecontrastgroup(t=4.205,3.228,
P<0.01).ThereexistednosignificantdifferencesoftheconcentrationsofFSHandLHbetweenthetwo
groups(t=1.655,1.378,P>0.05).TheconcentrationsofFSHandLHwere(32.61±9.14)U/Land
(40.57±12.40)U/Lrespectivelyintheinfertilitygroupand(29.634-7.56)U/Land(37.254-9.19)U/L
respectivelyinthecontrastgroup.TheconcentrationsofLepandIGF-landTshowednegativeeorrelationin
theinfertilitygroup(r=一0.237,一0.316,P<0.01).’I’}leconcentrationofLephadnocorrelationtothe
FSHandLHconcentration(r=0.104,0.112,P>0.05).TheconcentrationofLepshowedagradual
increasewithingroupA,groupBandgroupC(F=115.93,P<0.01).Theleptincontentsintheabove
mentionednormalsubgroupswerefoundtobelowerthantheabnormalgroups.ConclusionsThereexists
pertinencebetweentheLepconcentrationandtheconcentrationsofTGF-1,T,FSHandLH.Lepmay
decreasethespermdensityandinhibitspermvitalityandthemotilityratethroulgIlinhibitingandrogen
secretionandspermcapacitation.
【Keywords】Infertility,male;Spermmotility;Semen;Lepfin;Testosterone;Follicle
stimulatinghormone
瘦素(1ep)受体mRNA可在睾丸组织中高度表
达,而且lep受体主要分布在中枢神经系统脉络丛,
可作用于弓状核以控制食欲和生殖功能⋯。精液
由精子和精浆组成,精浆是输送精子的必需介质,并
为精子提供能量和营养物质。精浆中含有的许多化
学成分是保证精子生存与活动的物质基础。目前,
国内鲜见有关精浆中lep浓度与生殖内分泌激素睾
酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)和胰
岛素样生长因子1(IGF一1)浓度的相关性研究,以及
对精子质量和数量影响的报道。在排除了人体肥胖
等因素对lep的影响后,我们对不育症患者精浆中
lep浓度进行了临床试验研究,现将结果
报告
软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载
如下。
对象与方法
一、对象
1.不育症组:选取婚后1—15年、夫妻性生活
正常、未采取避孕措施、身体健康、排除女方因素
(经妇科检查、输卵管通畅试验、B超、内分泌测定
等)、妻子未孕的男性不育症患者126例,年龄25—
4l岁,平均年龄(304-4)岁。(1)根据不育症患者
精子数量的多少,将其分为3组:A组:精子数≥
20×109/L,即精子数量正常组,85例;B组:精子
数<20×109/L,即少精子症组,30例;C组:无精子
症组,11例。(2)根据不育症组精液分析中lO个高
倍视野(HPF)出现WBC的多少,将其分为2组:
WBC精液组(精液中WBC≥1×109/L)和非WBC
精液组(精液中WBC
50%)和不良组(a+b<50%),
其中a为快速前向运动精子数,b为慢速或呆滞前
向运动精子数;精子活动率正常组(活动率≥60%)
和下降组(活动率<60%)¨J。根据健康对照组检
测结果,将结果的面±2s作为各检测项目的正常临
界值,将不育症A和B组分为精子穿透力正常组
(穿透力I>40mm)和下降组(穿透力<40mm),精
子顶体完整率正常组(完整率t>80%)和下降组(完
整率<80%),精子尾部肿胀率正常组(肿胀率≥
60%)和下降组(肿胀率<60%)。
2.健康对照组:选取具有正常生育能力的健康
男性对照者30名,精液常规分析各项指标均在正常
范围内,精液中WBC均<1×109/L。年龄25—
40岁,平均年龄(30±4)岁。
所有受试者均排除泌尿、生殖、造血系统及内分
泌系统疾病,以及患过其他慢性疾病、隐睾症、性功
能低下和接受过放疗或化疗等情况者。所有受试者
均准确测量身高、体重,并计算体重指数(BMI),
万方数据
生堡建验匡堂盘查呈塑生兰县筮丝鲞筮!翅£堕墨』丛丛笪:堕型翌至塑:丛丝:盟生兰
BMI均<25kg/m2。
二、方法
1.标本采集:所有受试者均禁欲2—7d,采用
手淫法或电动采精器将1次排出的全部精液盛于清
洁容器中,置37℃水浴中液化后备查。
2.检测方法:待精液完全液化后,按WHO【21的
标准
excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载
,应用北京WIIY-9000伟力彩色精子质量分析
(CASA)系统,定量分析精液中的精子密度、活力、
活动率,以及精子运动速度和运动轨迹等特征。然
后应用新鲜鸡蛋清代替宫颈黏液,利用毛细管法进
行精子穿透力试验;低渗肿胀液法进行精子尾部肿
胀试验;瑞一姬复合染色后油镜下观察顶体完整率
等∞】。另取部分精液以2264×g离心10min,分离
精浆保存于一20℃待行lep、IGF—l、T、FSH和LH检
测。精浆中lep、T、FSH和LH含量测定均采用放射
免疫分析(RIA)方法,lep试剂盒购自北京原子能研
究院同位素研究所,T、FSH和LH试剂盒购白天津
九鼎医学生物公司;IGF一1测定采用免疫放射分析
(IRMA)方法,试剂盒购自比利时BIOCODE公司,
按说明书进行操作;测量仪器为西安262厂生产的
FJ-2008P全自动1计数仪,自动拟合曲线和打印结
果。lep、IGF一1、T、FSH和LH测定的精密度CV分别
为3.3%~4.9%,3.4%~4.6%,5.4%一7.4%,
2.2%一2.5%和2.0%~2.4%。
三、统计学分析
采用SPSSforWindows11.0统计软件包进行统
计学分析。首先对检测数据进行正态性检验,对于
符合正态性分布的数据采用元±s表示。健康对照
组与不育症组间lep、IGF一1、T、FSH和LH均值比较
采用t检验。不育症各组间均值比较采用单因素方
差分析,两两比较采用g检验。P<0.05为差异有
统计学意义。
结 果
1.1ep浓度与各生殖内分泌激素测定结果:不育
症组精浆lep浓度为(2.77±0.80)灿g/L,明显高于
健康对照组的(1.14±0.31)¨g/L,差异有统计学意
义,结果见表1。A、B、C3组的lep浓度有逐渐增高
趋势,具体结果见表2。不育症组精浆中lep浓度与
IGF一1和T浓度之间存在明显的负相关(r=一0.237、
-0.316,P均<0.01),与FSH和LH浓度之间均无
相关性(r=0.104、0.112,P均>0.05)。
2.不育症组不同组别精浆lep与IGF一1测定结
果:结果见表3。精子活力正常组lep浓度低于不良
组(£=8.863,P<0.01),IGF一1浓度高于不良组(t=
3.958,P<0.01);活动率正常组lep浓度低于下降
组(t=6.205,P<0.01),IGF-1浓度高于下降组(t=
3.474,P<0.01);精子穿透力正常组lep浓度低于
下降组(t=9.801,P<0.01),IGF一1浓度高于下降
组(t=4.107,P<0.01);顶体完整率正常组IGF.1
浓度高于下降组(t=2.785,P<0.01);尾部肿胀率
正常组lep浓度低于下降组(t=5.895,P<0.01),
IGF一1浓度高于下降组(t=2.454,P<0.05)。
讨 论
随着对肥胖研究的深入以及分子生物学技术的
发展,肥胖相关基因D6成功克隆,其编码的蛋白产
物lep随即被发现。lep源自希腊语,意为消瘦,是
表1健康对照组与不育症组精浆lep、IGF—l、T、FSH和LH测定结果比较(露4-5)
注:A组为精子数量正常组;B组为少精子症组;c组为无精子症组;与A组比较,‘P<0.05
万方数据
表3不育症组不同组别精浆中lep与IGF—l
浓度测定结果(斗g/L,元±s)
由脂肪细胞合成和分泌的一种蛋白激素,相对分子
质量为16000,由167个氨基酸组成。已知lep是
脂肪组织和中枢神经系统间网络联系的外周信号,
通过影响摄食行为和调整自主神经系统活动,参与
保持机体脂肪量恒定的自稳态调节机制”J。与此
同时,其还是传递给生殖系统的一个代谢信号。D6
基因发生突变的小鼠(ob/ob小鼠),无论雌、雄性,
常伴有永久性下丘脑.垂体一性腺轴发育不良。
Camina等∞1研究发现,人类精液中含有lep,并
且以不结合蛋白质的游离形式存在。El—Hefnawy
等【_”应用PT.PCR法在不同年龄组小鼠的睾丸中均
发现有lep受体(ob—R)的信使RNA,应用免疫组织
化学染色,显示小鼠睾丸中ob—R的分布存在年龄和
阶段的依赖性,证明小鼠睾丸在干细胞发生过程中
存在lep受体的表达。lep通过神经肽Y(NPY)间
接作用于性腺,刺激促性腺激素释放激素(GnRH)
的分泌,GnRH则刺激腺垂体促性腺激素细胞分泌
FSH和LH哺J。在成年男性,FSH可促使支持细胞
分泌雄素结合蛋白(ABP),ABP能与睾酮结合,使
生精小管内维持高浓度的睾酮,以促进精子的发生。
LH则能促进间充质细胞增殖并分化为睾丸间质细
胞;促进睾丸间质细胞合成和分泌睾酮;同时,LH也
刺激间质细胞合成某些蛋白质,这些蛋白质对甾体
合成的维持可能是必须的。
胰岛素样生长因子(IGF)系统是一类多功能细
胞增殖调控因子,因其化学结构与胰岛素原类似而
得名。IGF分子主要存在于血液中,大部分由肝脏
合成,局部组织细胞如骨髓、脑及多种肿瘤细胞都能
产生和分泌IGF。IGF是一类强力细胞分裂素,参
与许多类型细胞生殖增长一J。睾丸组织中的IGF一1
及其结合蛋白(IGFBPs)对睾丸功能具有重要的调
节作用。免疫学研究发现,在睾丸支持细胞(Sertoli
细胞)和间质细胞(Leydig细胞)上存在IGF一1受体,
IGF-1可能刺激增强睾丸Leydig细胞甾体生成和
Sertoli细胞转铁蛋白的生成。一些体外的研究发现
Leydig细胞和Sertoli细胞释放IGF.1和IGFBPs,并
且外源性的IGF一1能刺激睾丸雄激素的生成,而
IGF的生物活性则受IGFBPs的调节。这提示IGF
和IGFBPs可能以旁分泌和自分泌的方式参与对睾
丸功能的局部调节,可能通过促进雄激素分泌、精子
获能和顶体反应等,从而提高精子密度和活动率。
本研究结果显示,不育症组精浆中lep含量明
显高于健康对照组,差异有统计学意义;FSH和LH
含量亦高于健康对照组,但差异无统计学意义;
IGF一1和T含量明显低于健康对照组,差异有统计学
意义。不育症组精浆中lep含量与IGF一1和T含量
之间存在明显的负相关,与FSH和LH含量之间均
无相关性。由此可见,由于精浆中lep含量与IGF—l
和T含量存在的负相关性,以及不育症组精浆中
FSH和LH含量虽均高于健康对照组,但尚未达到
使睾丸内睾酮浓度增高的程度,最终导致精子产生
减少,并影响精子的质量。精浆中lep水平与精液
中精子的数量存在的密切关系可以说明,精浆lep
水平可能通过对IGF.1、T、FSH和LH等生殖激素的
影响,最终影响到精子的产生。但Steinman等[1叫通
过对生育者与不育症者血浆中lep观察发现,无精
子症者血浆lep浓度较正常生育者显著升高,这种
升高与促性腺激素无明显关系,提示l印可直接作
用于睾丸,影响精子的形成。
通过对精子的部分功能指标的检测发现,在不
育症组精子活力与活动率正常组、非WBC精液组,
以及精子穿透力、尾部肿胀率和顶体完整率正常组
lep含量均低于不正常(或下降)组,可见精浆中的
lep浓度与精子的密度、活力、活动率,以及精子穿透
力、尾部肿胀率和顶体完整率之间均存在一定的关
系,可能抑制雄激素分泌和影响精子获能,最终致使
精子密度下降和抑制精子的活力、活动率,但影响精
子的功能状态的确切机制目前尚不清楚。
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万方数据
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(收稿日期:2008-02-29)
(本文编辑:张媛)
.在国外发表的SCI
论文
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介绍.
膜免疫球蛋白聚集上调WEHI一231细胞Id3启动子的活性
南京大学临床医学院金陵医院的李晓军等在小鼠
WEHI-231B淋巴瘤细胞中发现,细胞表面膜免疫球蛋白
(mlg)聚集可导致WEHI-231细胞Id3启动子活性的上调
表达。
B淋巴细胞在未成熟阶段,因B淋巴细胞抗原受体
(BCR)受到自身抗原刺激而被清除,发生自身免疫耐受;而
成熟B淋巴细胞的BCR与外来抗原结合,却可启动针对外
来抗原的免疫正应答。但有关BCR信号转导引起B淋巴细
胞发生凋亡或活化反应的分子调节机制目前尚不甚明了。
小鼠未成熟B淋巴瘤细胞(WEHI-231细胞)的BCR聚集可
抑制细胞生长并导致细胞凋亡,该细胞已成为一种研究未成
熟B淋巴细胞自身耐受机制的肿瘤细胞模型。前期研究发
现,WEHI-231细胞的BCR聚集可在mRNA和蛋白质水平诱
导Id3的快速和持续表达;经逆转录病毒将Id3基因导入
WEHI-231细胞后,可抑制细胞生长,发挥类似BCR配基化
(1igation)的作用。该结果揭示了BCR信号启动细胞活化或
失活的一种新的可能的分子机制。
鉴于转录起始是真核基因表达调控的基本控制点,研究
人员在构建由m/d3基因启动子控制的荧光素酶报道基因重
DOI:IO.3760/ema.j.issn.1009-9158.2009.02.012
注:该文作者李晓军的电子信箱:lixiaojun62@yah∞cm∞
组载体的基础上,在转录水平观察抗IgM抗体刺激对
WEHI-231细胞Id3表达的影响。用PCR法从WEHI-231细
胞基因组DNA扩增mid3基因5’端含启动子序列的不同长
度的3种DNA片段,Id3—1981/+54(Id3/2k)、Id3—1012/
+54(Id3/lk)和Id3—200/+54(Id3/254),将其亚克隆至
荧光素酶(Luc)报道基因载体pGV-B2,构建由m/d3基因启
动子片段控制的Luc报道基因重组载体Id3/2k—Luc、Id3/lk.
Lue和Id3/254-Luc,用电穿孔术将其导入培养的WEHI-231
细胞。胞内Luc活性检测结果表明,3种Luc报道基因重组
载体转染细胞均表现较高的mid3启动子活性,与空载体转
染细胞相比,启动子活性分别升高24、36和54倍;Id3基础
启动子活性位于一254bp区域内;抗lgM抗体刺激细胞24h
后,Id3启动子活性较未刺激细胞增高幅度达2倍左右;但与
表达C1MOL的NIH3T3细胞共育24h后,Id3启动子活性未
见明显变化。上述结果提示,WEHI-231细胞mIg聚集(抗
IgM抗体刺激)诱导WEHI-231细胞Id3的上调表达与Id3
转录活性的升高有关。
李晓军的Engagementofmembraneinununoglobulin
enhancestheId3promoteractivityinWEHI-231Blymphoma
cells一文发表在ActaPhannacolSin,2005,26:486-491.该刊
2006年的影响因子为1.4。
本刊编辑部
万方数据