王鸿利 遗传性凝血因子和抗凝因子缺陷

nullnull上海交通大学附属瑞金医院 上海血液学研究所 王鸿利 王学锋 等遗传性凝血因子和抗凝因子缺 陷症的诊断与血友病A的基因治疗nullnull 研究背景 遗传性凝血因子缺陷症和抗凝因子缺陷症分别导致遗传性出血病和血栓病 患者往往自幼发病，持续终生，致残率高、危害性大、甚至导致死亡，并遗传至后代 替代治疗仍是目前唯一有效的治疗手段，基因治疗是根治本病的最佳选择nullnull 研究内容null研究对象nullqp研究对象nullnull家系资料实验表型基因诊断临床资料体外表达研究临床诊断 临床治疗研究 流程 快递问题件怎么处理流程河南自建厂房流程下载关于规范招聘需求审批流程制作流程表下载邮件下载流程设计 研究方法-临床诊断 研究方法-临床诊断出血病 以血友病A为例 出血为特征 大关节 肌肉 腰大肌 内脏 皮肤粘膜 皮肤淤斑 颅内出血null 研究方法-临床诊断血栓病 以抗凝血酶 缺陷症为例 浅静脉炎 深静脉血栓 内脏静脉血栓 肺栓塞研究方法-家系调查（FVIII)研究方法-家系调查（FVIII)研究方法-家系调查（FVII)研究方法-家系调查（FVII)null研究方法-家系调查（AT缺陷症)研究方法-筛选试验和表型诊断实验研究方法-筛选试验和表型诊断实验1. 凝血因子缺陷症筛选试验：①APTT↑，PT正常：因子VIII缺陷症 （血友病A）、因子IX缺陷症（血友病B）、因子XI缺陷症 因子XII缺陷症 ②APTT正常，PT↑：因子VII缺陷症 ③APTT↑，PT↑：因子X缺陷症、因子V缺陷症、凝血酶原缺陷症、纤维蛋白原（Fg）缺陷症 ④APTT正常，PT正常：因子XIII缺陷症研究方法-筛选试验和表型诊断实验研究方法-筛选试验和表型诊断实验2.vWD筛选试验：①BT ②APTT ③FVIII:C3. 抗凝因子缺陷筛选试验：①APCR ②proGlobal试验研究方法-筛选试验和表型诊断实验研究方法-筛选试验和表型诊断实验4. 凝血因子缺陷症表型诊断试验：Fg(clauss法) FII:Ag FII:C FV:Ag FV:C FVII:Ag FVII:C FVIII:Ag FVIII:C FIX:Ag FIX:C FX:Ag FX:C FXI:Ag FXI:C FXII:Ag FXII:C FXIII:Ag FXIII:C vWFR:cof vWF:Ag 多聚体 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 研究方法-筛选试验和表型诊断实验研究方法-筛选试验和表型诊断实验AT:A AT:Ag PC:A PC:Ag TPS:A FPS:A t-PA:A t-PA:Ag PAI:A PAI:Ag PLG:A PLG:Ag α2-AP:A α2-AP:Ag TAFI:A TAFI:Ag5. 抗凝因子缺陷症的表型诊断试验：null研究方法-分子（基因）诊断DNA/RNA抽提RFLPPCR扩增（RT-PCR、ASPCR）直接核酸测序DGGE检测流程 研究方法-分子（基因）诊断 研究方法-分子（基因）诊断研究方法-分子（基因）诊断研究方法-分子（基因）诊断null研究方法-分子（基因）诊断3.因子VIII缺陷症（血友病A）：基因位点检测：BclI、CA13、CA22的STR以及DXS52（ST14）阳性率49% 直接测序 阳性率100％ 研究方法-分子（基因）诊断 研究方法-分子（基因）诊断4.因子IX缺陷症（血友病B）：用长距离PCR（LD-PCR）测定 DXS102、 DXS1211、DXS1192、DXS8031、DXS8094 和DXS1227等6个位点的STR作基因分析，阳 性率达100% 研究方法-分子（基因）诊断 研究方法-分子（基因）诊断5.其他凝血因子缺陷症：无（异常）纤维蛋白原血症、凝血酶原缺陷症、因子V、VII、X、 XI、XII、 XIII缺陷症采用PCR扩增所有外显子及其侧翼序列，基因测序的方法进行基因诊断 采用限制性酶切分析（RFLP)或等位基因特异性PCR（ASPCR）对发现的基因突变进行验证 研究方法-分子（基因）诊断 研究方法-分子（基因）诊断6.抗凝因子缺陷症：AT缺陷症、PC缺陷症、 PS缺陷症采用PCR扩增所有外显子及其侧翼序列，基因测序的方法进行基因诊断 采用限制性酶切分析或ASPCR对发现的基因突变进行验证null转染真核细胞生物代谢标记活性与抗原检测免疫荧光染色Western印迹构建突变基因cDNA的表达载体研究方法-体外表达研究研究流程Hewitt J,et al.Severe FVII deficiency caused by a new point mutation combined with a previously undetected gene deletion. Br J Haematol. 2005;128(3):380-5.研究方法-体外表达研究研究方法-体外表达研究其他研究:根据突变位点的特殊性， 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 特异性的功能研究试验 例如针对在信号肽或糖基化位点发生的突变等，可采用体外无细胞蛋白翻译试验，研究突变导致缺陷症的详细分子发病机制nullPCR扩增外周血DNA抽提 （携带者）羊水DNA抽提 （胎儿）直接核酸测析间接联锁分析明确诊断内含子1,22倒位 研究方法-血友病携带者和产前诊断Lavery S.Preimplantation genetic diagnosis: new reproductive options for carriers of haemophilia. Haemophilia. 2004;10 :126-32研究流程null传统方法：采集羊水单细胞植入前诊断研究方法-携带者和产前诊断研究方法-血友病携带者和产前诊断研究方法-血友病携带者和产前诊断传统方法血友病A FⅧ内含子22倒位（INV22）、DXS52、BclⅠ、内含子13 （CA13）和内含子22（CA22）等5个基因位点进行检测 血友病B 应用DXS102、DXS1211、DXS1192、DXS8031、DXS8094和DXS1227等6个位点的STR作基因分析 null体外受精胚胎发育6-8细胞1~2个单卵裂球细胞FVIII/IX基因分析正常胚胎植入宫内活检取单个细胞单细胞PCR技术植入前遗传学诊断 （preimplantation genetic diagnosis，PGD）研究方法nullnull凝血因子性质null 抗凝因子性质null 凝血/抗凝因子机制null国内外研究现状null国内外研究现状null国内外研究现状(PGD)null国际报道45种相关基因突变null国内首次报道38种相关基因突变null突变基因的体外表达研究null时瑞杰null血友病A的基因治疗血友病A基因治疗的目的和意义血友病A基因治疗的目的和意义null血友病A的基因治疗血友病A的基因治疗nullnullnull靶细胞的选择靶细胞的选择生理情况下FVIII在肝细胞和肝窦状核细胞中表达，可以作为基因治疗靶细胞的有： 内皮细胞 N1H3T3细胞 纤维母细胞 CHO细胞 骨髓基质细胞 COS-7细胞 造血干细胞 L-02细胞 巨核细胞，等。 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull