用流式细胞仪测定母血中胎儿红细胞含量的新方法

用流式细胞仪测定母血中胎儿红细胞含量的新方法 用流式细胞仪测定母血中胎儿红细胞含量 的新方法 记免疫分析与临床2001年l2月第8卷第4期 性和高灵敏度. 4免提荧光法 采用双标记免疫荧光法,可检测唾液腺炎患者 唾液腺组织中IL—l0,IL—l2和IFN一的 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 达 水平,而大部分IL—l0表达阳性的单个核细胞, CD4也阳性,又称双阳性免疫荧光标记法采用 免疫双染色法可检测类风湿性关节炎和骨关节炎 患者的滑膜细胞培养液中IL—l0的水平,结果表 明类风湿性关节炎患者II一10水平为358— 5501pg/mL,骨关节炎患者Il一l0水平为310— 3390pg/mL.这表明IL—l0是由l滑膜里层单核细 胞和聚集的淋巴细胞(T细胞)产生的 5ELISA一点技术 这项技术简称为ELI—SPOT,用ELI—SPOT 25l 能检测单个细胞水平IL—l0的产生,对研究IL— l0在细胞间进行信息传递的作用,具有重要的意 义.操作步骤:将单细胞悬液加到包被抗IL—l0 抗体的反应孔中,经诱导产生IL—l0,后者与生物 素化的第二抗体产生结合反应,当加入碱性磷酸酶 标记的链亲和素和显色剂后,显色反应在覆盖的琼 脂胶中进行,最后用倒置显微镜计数蓝色斑点.本 法操作简单,可以使细胞处于与体内的状态非常相 近的条件.ELI—SPOT法还可用来跟踪疾病产 生,调整治疗 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 等.如用于重症肌无力患者外周 血T细胞分泌IL—l0(和IFN—)的研究;用于检 测多发性硬化患者外周单个细胞IL—l0分泌水 平. (胨泮藻编委审张增武编辑) 用流式细胞仪测定母血中胎儿红细胞含量的新方法 周春喜 (解放军总医院雕璺宴验锺试中..北京100853) 本文介绍一种快速而准确地测量母血中胎儿 红细胞含量的方法.它通过流式细胞仪检测母血 中胎儿红细胞胞内的血红蛋白(HbF)和红细胞表 面i抗原,可以特异地识别母血中胎儿红细胞.这 对预防新生儿溶血症和优生优育具有重要意义. 材料与方法 l样品处理方法 室温保存 (1)静脉采血lmL,用EDTA抗凝, 备用. (2)用血球计数仪计数并计算抗凝血中红细 胞的浓度. (3)用冲洗液将抗凝血稀释成浓度为25x 109个/mL的红细胞悬液. (4)取一带盖尖底离fl,管,加入10/~I红细胞 悬液及100~-L封闭液,混匀.加入100VI同定液, 混匀,室温温育30rain. 收稿日期:2001—05—18;修回B期:2OOl—o8—10 (5)再加2.5mL冲洗液,将离心管颠倒几次 洗细胞.1000g离心3min,弃上清,将剩下的细胞 混匀.加100/~L破膜液,混匀,室温温育3min. (6)加2.5mL冲洗液,将离心管颠倒几次洗 细胞.1000g离心3min,弃上清,用25mL冲洗液 再洗细胞一次.离心弃上清,加lmL冲洗液,混 匀. 2黄光染色方法 (1)每份样品取2支流式细胞仪样品管,分别 标记为l和2. (2)在l号管中依次加入100/~L细胞悬液, 10/~L异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗HbF,10/~L 藻红蛋白(PE)标记的抗i抗原和10/~LDNA染液 (LDS751),混匀. (3)在2号管中依次加入100~.L细胞悬液, 10~.LFITC标记的IgGl,10vLPE标记的IgM和 10t,LLDS751,混匀. (4)将两管于4t避光温育30rain.用2.5mL 冲洗液洗1次. ? 252 (5)离心弃上清,加300I,冲洗液,混匀细胞, 用流式细胞仪检涣l. 3流式细胞仪检测方法 (1)将流式细胞仪的FSC,SSC,FIF12及 FL3等5个参数的采集器都设为对数放大器,采集 5万个细胞…. (2)在Fsc/ssc二维散点图上,设定红细胞 所在的区域为R1.在FL3/ssc图上.设定DNA 阴性的区域为R2.将既在R1区域又在R2区域 内的细胞在FL1/FL2图上显示出来.通过阴性对 照管(即2号管)设定四象限的分界点,软件自动求 出HbF和i抗原双阳性细胞即胎儿红细胞在母【fll 红细胞中所占的百分比.根据母血中红细胞的浓 度,进而可求出母血中胎儿红细胞的浓度,并计算 胎母出血量. 小结与讨论 在妊娠过程中,胎血可能会进入母体血循环, 这就是所谓的"胎母出血".如果母亲与眙儿的血 型不符,进入母体的胎儿红细胞会使母体产生相应 的抗体,而这些抗体又会进入胎儿体内破坏其红细 胞,导致新生儿溶血症.一旦发现胎儿红细胞进入 母体,可以采用免疫预防手段.如向母体注射抗一 Rh多克隆抗体.中和胎儿红细胞.但这要求知道 母血中胎儿红细胞的准确数量.因此,快速准确定 期地测定母血中胎儿红细胞的含量,对于预防新生 儿溶血症具有重要的意义. 随着胎儿的发育,胎儿红细胞表面的i抗原逐 渐消失,出生后红细胞表面即不存在i抗原.红细 胞内的HbF也在出生后逐渐转变为成人血红蛋 白成人体内的F细胞虽然也含有HbF,但其中 断含的HbF比胎儿红细胞内所含的HbF少得多, 且其表面无i抗原】. 本文夼绍的检测母血中胎儿红细胞的新方法 &CfinMed.D即】ber2001.Vol8.No4 有以下优点: (1)与经典的KleihauerBetke方法.相比, 本方法用流式细胞仪测定母血中胎儿红细胞的含 量,在客观性,敏感性和准确性方面都要好得多, 而且操作简单省时. (2)本方法采用胞内HbF和表面i抗原两个 指标双重限定胎儿红细胞,可排除母体F细胞,提 高了,特异性,也比检测Rh或D抗原的方法.有 更广泛的适用性,后者只适用于母胎Rh或D抗原 不相符的情况. 总之,本方法能特异地识别母血中胎儿红细 胞,对预防新生儿溶血症的发生有着重要的临床价 值,有利于优生优育,值得推广应用. 参考文献: [1】周春喜,粱学颖,李楠等流式细胞仪进行干细胞绝对计数的 疗法…标记免疫分析与临床,2001.8(1):60—6l 【2]NavenotJM,MullerJY,BlznchardDExpl~eSslonofblood groupiantig~andfetalhemoglobininpa?锄n.ctLL工Tl ht~moglobinuria[JTransfusion,1097,37:291—297 [3】Kleihaue~P,BraunH,BetkeKDemonstrationoffetal hemoglobininerythmcytesofblc~dr[1llKlin Woch~schr,1957.35:637—638 :4]JohnmnPR,TaitRC,AustinEB,etnowc~ometryindi- aErI.si?andgoflargefeton~temalhemo~hage[J】J ClinPatho1,1995,48:10051008 【5]Lloyd—EvansP,K~lpe[BM,B~e/owI,et.Useof&di- mctLy..?ugatedmoncdonalanti—D(BRAD3】forquantifica- tionoffetomate~[hemorrhagebyflowcytometry[J]Trans~ slim1996.36:432437 [6】CorsettiJP,CoxC.LeafyJF.eta__Compamonofqutmthatrye acid——e[uti~t~hniqueandfloweYtometryfordeto-tingfeto~- tema]hemo~hage[J]AnnC[inLabSei,1997,17;197—206. [7]Naver~tJM,MerghoubT,DucroeqR,et.Anmethodfor quantitativedeterminati~offdhemoglobin—cc~tainingred bloodcellsbyffowc…try:application?skkcelld1一 [j】C~ometry,1998,32:186190 (陈泮藻编委审安石生编辑)