桔皮提取物对斜纹夜蛾与甜菜夜蛾幼虫的生物活性作用

浙江大李李推(农业与生命科学版) Journal of Zhejiang University (Agric. 31(1):76^ 81，2005 邑Life Sci.) 文章编号:1008-9209(2005)01-0076-06 桔皮提取物对斜纹夜蛾与甜菜夜蛾幼虫的生物活性作用 邹向菲，施祖华，施英利 (浙江大学应用昆虫学研究所，浙江 杭州 310029) 摘 要:室内测定了温州蜜桔桔皮乙醇提取物对料纹夜蛾和甜莱夜蛾幼虫的生物活性.结果 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明料纹 夜峨和甜菜夜峨幼虫取食桔皮提取物后食物消耗量、体重增长量下降，幼虫死亡率增加.提取物浓度越 高，这些作用效果越明显.在相同浓度下，甜菜夜峨幼虫的死亡率比针纹夜蛾的高;甜莱夜蛾的生长抑 制中浓度和非选择性拒食中浓度均比斜纹夜峨的低;但在选择性试验中，甜莱夜蛾的拒食中浓度则比针 纹夜峨的高.这些结果表明，桔皮提取物对甜菜夜峨幼虫的生物活性总体上比对料纹夜蛾的更好. 关 键 词:柑桔; 中图分类号:S436. 桔皮提取物;料纹夜蛾;甜菜夜峨;拒食;生长抑制;杀虫活性 341 文献标识码:A ZOU Xiang-fei，SHI Zu-hua，SHI Ying-li (Institute of Applied Entomology, Zhejiang University, Hangzhou 310029, China) Bioactivities of orange peel extracts against the larvae of Spodoptera litura Fab. and Spodoptera exigua Hilb. Journal of Zhejiang University (Agric.aLife Sci.)，2005,31(1):76-81 Abstract:The effects of peel ethanol extracts from Citrus unshiu on the larvae of Spodoptera litura Fab. and Spodoptera exigua Hub. were preliminarily investigated in laboratory by measuring an- tifeedant index, body weight gains and mortality of the larvae after their feeding on the cabbage leaves coated with the extract. The results indicated that the cabbage leaf consumption and body weight gains were both reduced，and the larval mortality was increased after the larvae had fed on the leaves coated with the extract. The higher the concentration, the more obvious the effect on the pests was. The lar- val mortality of S. exigua was higher than that of S. litura at the same extract concentration. Both the median inhibitory concentration (IC,o) and the median antifeedant concentration (AFC,o) in the non- choice test for S. exigua were lower than those for S. litura. However，the AFCso in the choice test was higher for S. exigua than for S. litura. The overall results indicated that the bioactivities of peel ethanol extract from Citrus unshiu against S. exigua are better than against S. litura. Key words:Citrus unshiu;orange peel extract;Spodoptera litura;Spodoptera exigua;antifeeding; growth inhibition; insecticidal activity 收稿日期:2004-01-06 作者简介:邹向菲(1979-)，女，山东威海人，硕士研究生，从事农业昆虫与害虫防治方面的研究. 通讯作者:施祖华，男，教授，博士生导师，从事害虫综合治理和寄生性天敌的研究。Tel: 0571-86971619; E-mail:zhshi @zju. edu. cn. 万方数据 第 1期 邹向菲，等:桔皮提取物对斜纹夜蛾与甜菜夜蛾幼虫的生物活性作用 利用植物次生物质调节害虫行为从而控制 作物虫害的研究，特别是从植物或植物产品中 提取和分离控制害虫的生物活性物质已成为害 虫防治的一个世界性的趋势Ci-s7.柑桔是芸香 科柑桔属(Citrus)植物，是我国栽培面积最大的 水果.关于柑桔皮的综合利用国内外已作了较 为系统的研究和开发，特别是近年来更有不少 关于桔皮在病虫害防治方面的报道〔卜，。〕.本文 就温州蜜桔桔皮乙醇提取物对斜纹夜蛾和甜菜 夜蛾幼虫的生物活性做了初步的研究. 1 材料与方法 对照叶碟继续饲养1d后再次测定取食面积， 记录死亡虫数.各处理重复10次. 非选择性试验(共6个处理)，将处理叶碟 或对照叶碟2枚分别放入小养虫罐中，每罐接 人5头饥饿4h的2龄幼虫，饲养和结果考查 方法同选择性试验.每个处理重复10次. 选择性和非选择性试验的拒食率根据以下 公式进行计算[ill.计算拒食中浓度(AFC,,) 时，参照陈立等的方法[[121，将5个浓度下测得 的拒食率转化成机率值，浓度转化为对数，计算 回归方程，根据回归方程求AFC,,- 对照 处理 选择性拒食率= 1.1 试验材料 供试昆虫 取食量 对照 取食量 取食量 处理 取食量 x 100 1. 1. 1 从校内甘蓝菜地采回斜 纹夜蛾和甜菜夜蛾卵块或初孵幼虫，以甘蓝叶 片作为食料，置于温度(25士2)℃、相对湿度为 (75士10)00、每天光照14h的人工气候箱内饲 养至2龄幼虫供试. 1.1.2 桔皮提取物 将新鲜温州蜜桔的桔 皮洗净、凉干，于40℃烘箱内烘干至脆，然后用 电动粉碎机粉碎成(必G1 mm)粉末，用密封瓶 装储 .提取时，称取25 g粉碎物于圆底烧瓶 内，加95%乙醇至高出样品1-2 cm，连续振荡 浸提24 h后，过滤.滤液抽真空浓缩至体积约 为30 mL，然后倒人9 cm培养皿中，让溶剂自 然挥发后，用50%丙酮溶液稀释定容至浓度为 500 g/L，冷藏备用. 1.2 生测方法 1.2.1 拒食活性 采用叶碟浸渍法进行选 择性和非选择性试验 .用 50%丙酮将提取物 配制成500, 250, 125, 62. 5, 31. 25 g/L 5个浓 度.将新鲜甘蓝叶碟(必1. 5 cm)放人提取物溶 液中浸渍10 s(处理叶碟)，或放人50%丙酮溶 液中浸渍 10 s(对照叶碟)，取出晾干，用于 试验 . 选择性试验(共5个处理)，将处理叶碟和 对照叶碟各 2枚交叉放在滤纸保湿的培养皿 中，每皿接人5头已饥饿4h的2龄幼虫，然后 置培养箱于温度(25士2) 0C、相对湿度为(75士 10)0o、每天光照14h下饲养.24 h后测定取 食面积，记录死亡虫数，并更换新的处理叶碟和 非选择性拒食率= 对照 取食量 处理 取食量 对照取食量 X 1000,0 1.2.2 对生长发育的抑制作用 参照张国 洲等用饲喂称重法测定.3].将甘蓝叶碟(必1.5 cm)分别浸于不同浓度的提取物药液中10 s, 待叶碟自然晾干后放人培养罐中(保湿)，每罐 接人饥饿了4h的2龄试虫5头，重复10次， 每处理共 50头幼虫，对照用在50%丙酮溶液 中浸渍过10 s的叶碟饲养.各处理和对照连 续饲喂3d后均换用新鲜叶碟继续饲养3 d. 在接虫前、接虫饲养后每隔24 h对试虫进行称 重，连续称6d.根据徐红星等方法求生长抑制 率)〕，并参照求AFC,。的方法计算生长抑制中 浓度(IC"). 生长抑制率= 对照组幼虫 体重增加量 处理组幼虫 体重增加量 对照组幼虫体重增加量 x 100% 1.2.3 胃毒作用 采用饲喂法测定，方法参 照1.2.1.试验设5次重复，每次重复10头虫， 分别于饲喂处理叶蝶或对照叶蝶2d,3d后， 换用新鲜叶碟再饲喂3d后记录死亡幼虫数， 计算死亡率. L3 数据 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 用STATISTICA软件中ANOVA方法对 试验数据进行方差分析，数据之间的差异用邓 肯氏新复极差法进行比较.直线回归的参数采 用麦夸特最小二乘法估计，其相关系数用t值 万方数据 78 浙 江 大 李 李 摧(农业与生命科学版) 第 31卷 检验 . 2 结果与分析 2.1 桔皮提取物对斜纹夜蛾和甜菜夜蛾幼虫 的拒食活性 桔皮提取物对2种夜蛾2龄幼虫的拒食活 性测定结果见表1和表2.由表中数据可知，桔 皮提取物对斜纹夜蛾和甜菜夜蛾的2龄幼虫均 表现出一定的拒食活性.桔皮提取物对斜纹夜 蛾的选择性拒食活性大于甜菜夜蛾，其第1日 和第2日的拒食中浓度，斜纹夜蛾的均比甜菜 夜蛾的低(表2)，但提取物对斜纹夜蛾的非选 择性拒食活性则小于甜菜夜蛾，其第1日和第 2日的拒食中浓度，斜纹夜蛾的均比甜菜夜蛾 的高(表2).但2种夜蛾的拒食中浓度的950o 置信区间存在明显的重叠现象，表明这种差异 从统计学角度看并不显著. 表1 桔皮提取物对斜纹夜蛾和甜菜夜蛾2龄幼虫选择性和非选择性拒食率 Table 1 Antifeeding index of orange peel extracts against the 2nd instar larvae of Spodoptera litura and Spodoptera ezigua in choice and non-choice tests 选择性拒食率/% 非选择性拒食率/% 浓度/ (g"L一1) 斜纹夜蛾 甜菜夜蛾 斜纹夜蛾 甜菜夜蛾 第 1日 73. 5 a 54. 3 ab 26.6 b 47. 6 ab 第2日 67. 3 a 56. 5 a 第 1日 第 2日 第 1日 第 2日 第 1日 第 2日 ? ? ? ? ?? ?? ?? ?? ?? ? … ?? ?? ?? ?? ?? ? ? ?? ?﹂ ???????????? ? ? ? ? ? ? ?? ? ? ? ? ?? ?? ? … ? ? ? ? ? ? ? ?? ? ? ?? ?﹂ ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? ? ? ???， … ?? ， ? ?? ? ? ?? ?? ?? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? ?? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? ， ? ?? ?? ? ? ? ? ?? 500 250 125 62. 5 5a 5a 65. 5 a 53. 7 ab 59. 6 ab 49. 0 ab 79. 3 a 63. 1 a6 59. 8 ab 48. 1 be 31.25 44.1ab 41.7 a 19.8c 25.8b 36.3b 20.8c 47.8 a 29.2c 注:表中数据为10次重复的平均值. 表2 桔皮提取物对斜纹夜蛾和甜菜夜蛾2龄幼虫选择性和非选择性拒食率的回归方程及AFC,, Table 2 Regression equations and AFCso of log concentration-dependent antifeeding index probit of the orange peel extracts against the 2 second instar larvae of Spodoptera litura and Spodoptera exigua in choice and non-choice tests 测定方法 试虫种类 处理时间 回归方程 相关系数r AFCso/ (g*L-1) 95%置信限/ (g*L一I) 斜纹夜蛾 y=0. 6845x+3.5220 0. 6320* 选择性 y= 9625* 77. 2- 269. 7 39. 7- 207. 7 甜菜夜蛾 y二 y - 9167 * * 3630* 8992*‘ 135. 8^ 383. 1 170. 3- 1142. 0 ?? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? ?? ?? ? ?? ?? ?? ??? ??? ? ? ?? ? ? ? ? 斜纹夜蛾 非选择性 y二 y - 甜菜夜蛾 第1日 第2日 第 1日 第 2日 第1日 第 2日 第1日 第 2日 y=o. y导1 5069x+4.0074 9626x+2.7301 7918x十2. 9061 5247x+3.9795 0331x+2.6464 2526x+4.5310 0059x+3.0517 0. 9898* * 0. 4682 * * 0. 9740 144. 3 90.8 228. 1 441.0 88.1 189. 8 71.9 86. 5 41. 9- 185.0 13. 9^ -275. 1 11. 6- 446. 1 55.8- 134. l 注:n为参与回归的数据对数，方程中x为提取物浓度的对数值，y为拒食率的机率值.*为r在P=O. 05水平显著，二*为r 在P=0. 0l水平显著. 2.2 桔皮提取物对斜纹夜蛾和甜菜夜蛾幼虫 的生长抑制作用 用不同浓度药液浸渍过的叶碟连续饲喂2 龄幼虫3d，然后更换新鲜叶碟继续饲喂3d，各 处理幼虫体重见表3和表4，对2种夜蛾2龄幼 虫的生长抑制曲线方程见表5.可以看出，1-3 d内随着药液浓度的增加，幼虫体重增加均呈下 降趋势，幼虫取食处理叶蝶的天数越多，这种趋 势越明显.连续取食处理叶碟2d或3d后，斜 纹夜蛾除浓度为31.25 g/L处理外，各浓度下幼 虫的体重与对照均存在显著差异，甜菜夜蛾在浓 度为250 g/L以上时幼虫的体重与对照也存在 万方数据 第 1期 邹向菲，等:桔皮提取物对斜纹夜蛾与甜菜夜蛾幼虫的生物活性作用 79 显著差异.但换新鲜叶碟饲养后，这种体重上的 差异可随时间逐渐缩小，如甜菜夜蛾幼虫在浓度 500 g/L时，第4日体重只有对照的12.86%, 但第6日其体重就达对照的34.30 o34-30%，表明体重 上的差异在缩小.从前3 d IC,,(表5)看，桔皮 提取物对甜菜夜蛾2龄幼虫的生长抑制作用比 对斜纹夜蛾更为明显，但从95%的置信区间看， 2种夜蛾间的差异并不显著. 表3 斜纹夜蛾2龄幼虫取食桔皮提取物后的体重 Table 3 Body weight of the second instar larvae of Spodoptera Zitura after larvae fed on the orange peel extracts 浓度/ (g"L-') 平均体重/(mg-larva-1) 试 前 第1日 115.6 b 122. 3 ab 110. 1 b 126. 2 ab 154. 0 a 154. 2 a 第2日 175.5 b 191. 4 b 178.2 b 206. 4 b 278. 3 a 296. 8 a 第3日 285. 8 b 349. 8 b 281. 2 b 356. 2 b 499. 1 a 585. 1 a 第4日 575. 2 b 第 5日 第 6日 695.5 b 544. 2 b 730. 1 b 788. 3 ab 1005. 5 a 1135. 6 b 1196.7 ab 1037. 1 b 1272. 6 ab 1336. 7 ab 1683. 3 a 1823. 6 b 1907. 0 b 1772. 8 b 2071 2061 4 ab 7 ab 2788. 1 a ? ? ? ? ? ? ? ?? ? ? ?? ?? ? ? ? ?? ? ? … ?? ? ? ? ? ? ? ? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? 500 250 125 62. 5 31.25 CK 注:表中数据为存活幼虫单头体重平均值((n=32 ^-50头)，同一列数据后英文字母相同，表示差异不显著(P>0. 05). 表 4 甜菜夜蛾 2龄幼虫取食桔皮提取物后的体重 Table 4 Body weight of the second instar larvae of Spodoptera ezigua after larvae fed on the orange peel extracts 浓度/ (g " L-1) 平均体重/(mg-larva-1) 试 前 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? ? … ?? ? ? ?? ? ? ? ? ?? ? ? ?? 500 250 125 42. 2 a 42. 6 a 第 1日 73. 3 b 第 5日 392. 6 c 620. 3 be 第 6日 979. o b 91. 95. 6 ab 62. 5 31. 25 85. 3 CK 105. 6 ab 125. 8 a 第 2日 83. 9 c 118. 9 be 147. 5 abc 137. 3 be 185. 6 ab 221. 4 a 第3日 103. 4 c 174. 8 be 272. 3 abc 227. 8 be 368.2 ab 460. 8 a 第 4日 117. 4 c 309. 9 be 517. 5 abc 530. 2 abc 667. 3 ab 913. 0 a 1067. 7 abc 1214. 2 abc 1379. 4 ab 1658. 4 a 1097. 7 b 2036. 3 ab 2240. 6 ab 2443. 7 ab 2854. 2 a 注:表中数据为存活幼虫单头体重平均值((n=10^,50头)，同一列数据后英文字母相同，表示差异不显著(PLO. 05). 表5 桔皮提取物对斜纹夜蛾和甜菜夜蛾2龄幼虫的生长抑制曲线和ICso Table 5 The growth inhibition curves and IC50 of the second instar larvae of Spodoptera litura and Spodoptera exigua after they fed on the orange peel extracts 试 虫 处理时间 生长抑制曲线 相关系数 r ICso/ (g-L-1) 95%置信限/ (g"L一1) 0. 6783" " 斜纹夜蛾 y=1. 0295x十2. 1364 y=0. 9180x+2. 8650 y=0. 6213x+3-6554 y=0. 5972x+3-5193 y=1. 6862x-}- 1. 5791 y=1. 5403x+2. 0935 0. 8456 0. 7176 604.6 211. 7 145. 9 甜菜夜蛾 第1日 第 2日 第 3日 第1 H 第 2日 第 3日 0. 7693 0. 9724 0. 9192" 301. 6 106. 9 77. 1 237.8-1537.5 128. 6 348. 4 76.1-280.0 126. 9 716. 9 83. 5-136. 7 51. 1 104. 1 ?? ，? ? ? ? ?? ?? ?? ? ? ? ?? ? ? ? ? ? ? ? 注:n为参与回归的数据对数，方程中z为提取物浓度的对数值，.Y为生长抑制率的机率值，**为r在P=0. 01水平显著. 2.3 桔皮提取物对斜纹夜蛾和甜菜夜蛾幼虫 的胃毒作用 桔皮提取物对斜纹夜蛾和甜菜夜蛾2龄幼 虫的胃毒作用测定结果见表6.用处理叶碟连 续饲喂3d再换用新鲜叶碟饲养至第 6日，斜 纹夜蛾和甜菜夜蛾幼虫的死亡率均随处理天数 的延长、处理浓度的增加而提高 .甜菜夜蛾幼 虫对桔皮提取物的敏感性比斜纹夜蛾更高.浓 万方数据 浙 江 大 李 李 报(农业与生命科学版) 第 31卷 度为500 g/L的处理，第3日的死亡率甜菜夜 蛾幼虫是对照的24. 5倍，而斜纹夜蛾幼虫只有 对照的3倍.斜纹夜蛾和甜菜夜蛾幼虫第6日 死亡率均显著大于第3日. 表6 斜纹夜蛾和甜菜夜蛾2龄幼虫取食桔皮提取物后的死亡率 Table 6 Larval mortality of Spodoptera litura and Spodoptera exigua after larvae fed on orange peel extracts 浓度/ (g " L-1) 斜纹夜蛾死亡率/00 甜菜夜蛾死亡率/% 第2日 10. 0 a 10. 0 a 4. 0 a 2. 0 a 第 3日 第6日 40. 0 a 30. 0 ab 18. 0 be 18. 0 be 第 2日 第3日 45. 0 a 26. 0 b 第 6日 ? ? ? ??? ? ?? ? ? ? ? ? ? ? 18. 18. 6 2. 17. 5 a 6. 0 ab 6. 0 a6 2. 0 6 8. 0 be 46. 10. 0 c 42. ? ? ? ? ? ? ? ? ????????????????????? ?????????????????????????????????????????????? ? ? ?? ? ? ? ? ? ? ?? ?? ? ? ? 31.25 0.0 a 0.06 8.0c 0.06 2.0c 26.0c CK 4.0 a 6.0 a 6.00c 2.0b 2.0c 24.0c 注:表中数据为5次重复的平均值. 3 讨 论 温州蜜桔桔皮乙醇提取物对斜纹夜蛾和甜 菜夜蛾幼虫具有控害活性.这种控害活性体现 在拒食、生长抑制和胃毒作用上.2种夜蛾在处 理叶片上的取食量减少，主要是由于这2种夜 蛾在取食了少量的桔皮提取物后，表现出食欲 减退，从而减少了取食量引起的.表明提取物中 存在某种或几种物质，它们使2种夜蛾对食物 的兴趣降低，或处理食物的速度减缓，或引起生 理上的不适.但其具体原因还需通过行为学的 直接观察和生理学的实验才能进一步确定.浓 度越高拒食作用越明显，用处理叶饲喂后幼虫 体重增加得越缓慢.在较高浓度下，提取物可使 2种夜蛾的幼虫死亡，2种夜蛾取食提取物后， 即使喂以新鲜未处理叶，幼虫死亡数仍比对照 明显增加.这些结果与唐古特瑞香提取物对斜 纹夜蛾的生物活性[4,12〕存在一些相似性.表明 提取物同时存在瞬时效应和滞后效应，这在害 虫的防治上都是应该受到重视的. 2种夜蛾虽然同科同属，但对桔皮提取物 的反应存在着差异，虽然这些差异在统计学上 并不显著.总体上提取物对甜菜夜蛾的作用比 对斜纹夜蛾的要强;喂饲处理叶时甜菜夜蛾的 体重增加更缓慢，幼虫死亡率更高;但选择性试 验中甜菜夜蛾的AFC,。比斜纹夜蛾的高.这可 能与 2种夜蛾的种的特性如行为学、生理学上 的差异有关. 柑桔是我国栽培面积最大的水果，桔皮资 源丰富.柑桔皮虽在制取香精油、加工甜渍品， 制作中药中得到了一些利用，但仍有大量桔皮 作为生活垃圾而被抛弃，这不仅造成资源的浪 费，而且也影响周围的生活环境.桔皮提取物具 有杀灭家畜和卫生害虫、驱避粮食仓储害虫特 J性F6-101，我们的试验结果表明对十字花科蔬菜 害虫除本文报道的斜纹夜蛾和甜菜夜蛾外，对 菜粉蝶、小菜蛾、蚜虫(另文报道)等也都有明显 的控害作用.因此，进一步研究其活性成分、作 用机理，在开发高效低毒低残留的新一代生物 农药以及提高农产品安全性方面具有理论价值 和应用前景. 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