分光光度法测定叶绿素a含量的方法探讨

科研与推广 乡夕光光度法测定叶崖乖素 含量的方法探讨 张 新 刘洪林 王素芬 摘 要 通 过对用 分 光光度法测定 叶绿 素 含 量 的两种方 法 的 比较 , 选 择 出一 种 准确 、 合 理 的分 析 方 法 。 针对该 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 方 法 关于 比色 时间 、 检测下 限及最大取 样量 的确定 问题进行 了探讨 。 关键词 叶绿 素 脱镁 叶 绿素 分 光 光度 法 , 检验 检测下 限 液 ③盐酸溶液 。 测试方法的选择 引 言 违 着现代经 济 的 高 速发展 和人 口 膨胀 , 湖 泊 、 水 库等水体的营养负荷 急剧 增加与积 累 , 使浮游藻类及 其它 水 生 生 物物质异 常繁殖 , 造成水体 的 富 营养 化 , 严重影响 了水环境质量 。 浮游藻类 中 的 叶绿素是衡量 水体富营养化的 重要指标 , 其主要组成成份为叶绿素 , 准确 测定 叶绿 素 的 含量 , 对评价 、 预测 水 体 富 营 养化状况具有重要意义 。 目 前 , 测定叶绿素 多 以 分 光光度 法 为 主 , 由 于 国 家 尚 未颁 布标 准分析方法 , 而 各行业之问 的测试方法又略有差 异 , 因 而影响 了 方法 的研究进程 。 本文以水利 部颁发 的行业 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 阳 方法 和《湖泊 富 营养化调查 规范 编程规范下载gsp规范下载钢格栅规范下载警徽规范下载建设厅规范下载 方法 为 代表 , 对用分光光度 法测定 叶绿 素 含量 的分析方法 进行 了 研究 , 在选用方法 亚 的基础上 , 对测试过程 中 的 重要 参数进行 了 修 正 , 保证 了 测试结果 的 准确性 , 运用于水 利 系统的水环境监测 中 , 效果 良好 。 实验原理和材料 实验原 理 分光光度法测定 叶绿素 含量 的原理是 , 以 有机 溶剂直接提取浮游生物浓缩样 中 的 叶绿素 , 测定其吸 光度 , 根据 叶绿 素 在特定 波长 的 吸 收 , 用 公式 计算 其含量 实验材料 仪器 ①过滤装置 过滤 器 、 微孔 滤膜 直径 , 孔径 、 真空泵 ②台式 医用离心机 最 大转速 遭。。。 ③研钵 ①分光光度计及相应 比 色皿 。 试剂 ①碳酸镁悬浮液 ②丙酮溶 方 法 、 皿 实验步骤 的 比较 前处理方法的 比较 两种方法 的 前处理步骤大致相 同 , 具体如下 ①浓缩 用直径 的微孔滤膜过滤浓缩混均 的 适量水样 , 过滤前加人 碳酸镁悬 浮液 , 水样抽完后 继续抽 一 , 以 减少滤膜上 的 水份 。 ②提取 将 载有 浓缩样 的 滤膜 剪 碎放入研钵 中 , 加人 丙酮溶液 , 研磨 一 , 滤膜研碎后倒 人有螺帽的离心管 中 , 再用少许 丙酮溶液 冲洗研 钵 一 次 , 一并倒人离心管 中 , 使总体积不超过 , 盖上管塞 , 充分振摇后置于 的暗处浸泡 一 备 用 。 ③离 心 将 离 心 管 放人 离 心 机 中 , 以 的速度离心 后 , 把上清液移人 比色管中 。 加入少量 环丙酮溶液于原提取的 离心管 中 , 再次悬 浮沉淀物并离心合并上清液 , 此操作重 复 一 次 , 直 至沉淀物不含色素为止 , 最后将上清液定容至 。 ‘ 测定与计算方法的 比较 方法 工 取上清液于 或 的 比色皿 中 , 以 丙 酮 溶 液 作 参 比 , 读 取 波 长 , 和 处 的 吸光度 , 选 择 比 色皿 的 光 程 长 度 或稀 释 度 , 使 “ 大于 , 小于 。 , 根据 叶绿素 在特定 波长 的 吸收 , 用 以下公式计算 叶绿素 的浓度 。 一 土 · 式 中 为叶绿 素 的 浓 度 八 为提 取 液 的 定 容 体积 , 为 过 滤水 样 的 体 积 为 比 色皿 光 程 长度 为从 各 波 长 的 吸 光 度 减 去 处 吸 光度 的校 正 过 的提取 液 吸 光度 方法 正 取上清液于 或 的 比 色皿 中 读 取 、 俪 处 吸光度 , 选择 比色皿的光程长度或取 样体积 , 使 、 在 一 之 间 , 然后 向 比 色皿 中 加 人 一 滴 的 盐 酸 在 一 内 再 次 测 定 、 处 吸 光 度 , 根 据 酸 化前 后 扣 除 了 、 山东水利 年第 期 吸光度 的 石 处吸光度之差 用 以 下公式计算 叶绿 素 。 的 浓度 了 。 一 。关 潮川黔卿脱脚氏比比比队比仁刁爪曰,口产。︸门刁夕户。自八曰一一比比伙以亡,曰,︺ 卜汁门﹃门,臼分曰宁台曰厂曰门臼认比比让认︸﹃︺︸﹃ 式 中甲 、 、’ 、 汪 意 义 同前 八卜 、 八。 一 酸 化 前 后 较 正 过 的 处提取 液 的 吸 光度 断 是吸 光度 校 正 系数 。 比 测 实验 匕钡吐实验结果 分别 用方 一 法 和方法 对 个样 品 进行测 定 , 测 试结果 见表 。 表 两 种方 法 测 定 叶绿素 、浓 度值对 比表 单位 在 分光光度分析 方法 中 吸 光度 值 的 稳定性直接 影响 着测 试结 果 的准确性 。 根据方法 的 测 定方法 利 用 以 比 色皿分别测定 的 个样 品 酸 化后 不 同 时 间 处 的吸光度值 , 对酸化后样 品 的稳定性进 行研究 , 测定结果 见表 。 表 酸化后样 品 波长 处吸 光 度 随时 间 变化 的测定 值 表 时间 了 川‘ 【 川 飞川 ,、胜 样品 号 方 法 方 法 口 门 艺 」 样品 · 样品 【 。 · , 样品 川 况口 样品 ‘ · 样品 了 · 样 · 样品 · 样品 日 」 口 分 门 们 ‘卜 艺 「 ‘飞 、 忿 魂 实验结果 的检验一 检验 采 取 成对 观测 值 下 两 个 均值 的 比较 — 检验法 对表 的 实验结果进 行数学统计检验 。 首先建立 假设 , 卜 一 双测检验 , 统计计算结果见表 。 由表 可 知 一 。 给定 。 , 由 表查得 。。 , 一 , 一 , 故 原假设不 成立 , 方法 和 方法 存在 显著性差异 。 检验说明方法 和方法 之间存在 系统误差 。 衰 统计检脸计算结果表 差 的 和 差 的 平 方和 差均值 差 的 标 准偏差 差 均值 的 标 准偏 差 自由度 值 弓 结 果 分 析 事 实 上 浮游 藻类 中 不仅存 在具有 光合活 性 的 叶 绿素 , 而 且存在没有光合活性 的脱镁 叶绿素 。 脱镁叶 绿 素 在接 近 叶绿素 的波长 上亦有 吸收 , 因此方法 测定 的 是表观叶绿素 的浓度 叶绿素 与脱镁 叶 绿 素 之 和 , 由 表 可 知方法 工 的 测试结果普遍偏 高 方法 把 叶绿 素 与脱 镁 叶绿 素 的 混合 物 用 盐酸酸化 , 其 中 的 叶绿素 引 起镁原子损失 降解 为脱镁 叶绿 素 , 而纯脱镁 叶绿素 则 不发生变 化 , 根据酸化前的 纯叶绿素 与酸化后 的脱镁 叶绿素 包括原有 的脱镁叶绿素 和叶绿素 降解 的脱镁叶 绿 素 妇 吸收峰之 比 , 对表观叶绿素 的浓度作脱镁 叶 绿素 。 的 校 正 , 从而得 出 纯叶绿素 的含量 。 根据 以 上分析 比测 实验 中 采用方法 测定 的 叶 绿 素 浓度值偏高 的 原因是 由 于脱镁叶绿素 的干扰 作用 。 因 此 为 了 保证测试结果的准确可靠 , 在测定水 体 叶 绿素 含量时必须去除脱镁 叶绿素 的 干扰 , 换 言 之 方 ‘ 法 皿 更 能 准确 反 映水 体 叶绿 素 的 真 实 含 量 所 以 选择方法 用于实 际监测工作 。 方法 测定参数探讨 酸 化后 比 色时 间 的确 定 由 表 可 知 , 个 样 品 酸 化 后 , 在 一 内 处吸光度值不稳定 , 月 呈 上升趋势 。 一 内 处 吸 光 度 值 平 均 增 加 了 凌 一 内增 加或减 少的 百 分 比 的均值 为 门 一 与 一 二飞 内 平 均 变 化 幅 度 相 同 说 明 在 后 吸光度值趋于稳定 。 方法 规定 , 酸化后提取液 、 处的 吸光 度值应在 一 内 测定 , 但实验结果表 明 , 在其规 定时 间 内测 得 的 吸光度值极不稳定 , 从而影 响 了 测试 结 果 的 准确 性 。 因 此 笔者 认 为 , 酸 化 后 提取 液 应 在 后 比 色测定 , 而不是在 一 内 测定 。 检测 下 限 的 确 定 方法 亚 没有 规定分析方法的最低检测 浓度 而我 们 在 实 际 工 作 中 常 常 会用 到 最 低 检 测 浓 度 笔 者 认 为 以 。 , 作 为该方法的 检测 下 限较 为合适 , 理 由 如下 在分光光度 分析方法 中 , 通常 以 扣 除空 白后 吸光 度值 为 时对应 的样 品 浓度值作 为 分析方法 的检 测下限 。 在测 定叶绿 素 的浓度 的 过程 中 , 当取样量 为 、 选用 、 比 色皿测定吸光度值时 , 假设 。 一 。 一 , 代人公 式 进行计算 , 口 一 十绿素 的浓度 为 。。 当 取样量 为 · 一 、 选用 比色皿 测定 吸光度值时 , 假设 八 卜一 一 , 代 人 公式 进 行计算 叶绿素 的 浓度亦为 〔「 由 此确 定 的检测 下 限 与《地 表 水 质 量 标 准 》 一 中 规定 的 湖 泊 水 库 评 价参 数 叶 绿 素 。 的 类水 质 标准 值 是一致 的 、 最 大取样量 的 确 定 方法 皿 规定 , 通 过 调 整取样体积 和 比 色皿 光程 使 样 品 提 取 液 酸 化 前 处 的 吸 光 度 测 定 值 在 一 。 之 间 。 但对于 只有微量 的 叶绿素 的清洁水 样 , 笔者建 议 当 取样体积取至 升 , 选择 的 比 色 皿时 , 提取液酸化前 处 的吸 光度 值仍小于 时 , 则不再增加取样体积 , 按吸光度实测值计算 即 可 。 作 者单位 山 东省 水 文 水 资源 勘 测 局 口济宁水 文 水 资源勘测 局