免疫斑点试验ppt课件

免疫斑点试验ppt课件免疫酶斑点试验Dot-ELISA*实验目的2.了解免疫酶斑点技术的用途。1.了解免疫酶斑点技术的基本原理及方法；*免疫斑点酶技术的原理硝酸纤维素膜和醋酸纤维素膜均具有很强的静电吸附力,在中性条件下即可有效地吸附蛋白质等生物大分子。将免疫物质吸附于纤维素膜后，可利用纤维素膜作为固相进行抗原抗体反应。底物经酶反应后形成有色沉淀，使固相膜染色。*包被未知抗原NC酶标抗体底物直接法Dot-ELISA*包被抗原NC待检抗体酶标抗体底物间接法Dot-ELISA*免疫酶斑点技术的特点1）特异性强，假阳性较少；2）敏感性高，NC膜...

免疫酶斑点试验Dot-ELISA*实验目的2.了解免疫酶斑点技术的用途。1.了解免疫酶斑点技术的基本原理及方法；*免疫斑点酶技术的原理硝酸纤维素膜和醋酸纤维素膜均具有很强的静电吸附力,在中性条件下即可有效地吸附蛋白质等生物大分子。将免疫物质吸附于纤维素膜后，可利用纤维素膜作为固相进行抗原抗体反应。底物经酶反应后形成有色沉淀，使固相膜染色。*包被未知抗原NC酶标抗体底物直接法Dot-ELISA*包被抗原NC待检抗体酶标抗体底物间接法Dot-ELISA*免疫酶斑点技术的特点1）特异性强，假阳性较少；2）敏感性高，NC膜对蛋白质的吸附性能优于聚苯乙烯，检出抗原的敏感性较常规ELISA法高6～8倍；3）试剂用量少，比ELISA法至少节约10倍；4）检测结果可长期保存，便于复查。*1.小组为单位实验方法及注意事项2.膜片、抗原、洗涤液、吸水纸在实验台上3.酶标抗体放置在冰箱，使用前取出4.底物临用前配置5.震荡器全班一台,调整好频率后不要乱动*方法(直接法)1.取硝酸纤维素膜片,用笔做好标记方便加样;2.将稀释的抗原液2-5μl加于相应格内,室温自然干燥!3.将膜片放入封闭液中震荡封闭15分钟;4.用洗涤液震荡洗涤3次,每次1分钟,吸干;5.将膜片放入稀释好的酶标抗体液体中，震荡15分钟,吸干;6.将膜片放入洗涤液中,震荡涤洗3次×1分钟,吸干;7.将膜片放入底物液中,震荡15分钟左右观察。明显棕色斑点者为阳性*实验结果*免疫酶斑点技术的应用1.微量抗原的检查;2.抗体分泌细胞、细胞因子产生细胞的筛选;3.自身抗体的检查。*

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