1.ABO血型鉴定操作规程

编号：ZYWJ—SXK—版修：B/0修订时间：作业文件第1页共页ABO血型鉴定操作规程1.目的:定性鉴定患者ABO血型2.适用范围:适用于献血员筛查、临床检测和血液制品检测3.方法及原理:根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。A型红细胞膜上含有A抗原，B型红细胞膜上含有B抗原，AB型红细胞膜上含有A、B抗原，抗A、抗B试剂是分别针对A抗原和B抗原的特异性抗体。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。可用已知的抗A、抗B试剂血清鉴定红细胞上有无对应的A抗原/B抗原（正定型），采用已知A型红细胞和B行红细胞来测定血清中有无相应的抗-A或/和抗-B抗体（反定型），必须从正定型和反定型两项试验来确定样本的ABO血型。4.试剂与设备4.1试剂抗-A、抗-B定型试剂（单克隆抗体）；0.9%生理盐水；2%—5%A、B和O型试剂红细胞悬液4.2试剂组成试剂1：抗A分型试剂（蓝色），效价1：128，2℃-8℃避光保存，室温放置不宜过久。试剂2：抗B分型试剂（黄色），效价1：128，2℃-8℃避光保存，室温放置不宜过久。试剂3：5％A、B及O型红细胞盐水悬液，自制。配制方法：分别采取已知A、B、O三种血型的红细胞，经盐水洗涤3次，以压积红细胞配成不同浓度的红细胞悬液。红细胞悬液的配制 悬液浓度（％） 压积红细胞（滴） 盐水（滴） 251020 1111 2ml（40）0.8ml（16）0.4ml（8）0.2ml（4）为了防止红细胞悬液敏感性不一致，可随机采取3个或以上的健康成人血液，按A、B、O型分别混合后，按上法制备。4.3设备透明光洁试管、显微镜、血清学专用水平离心机5.样本采集与处理:5.1标本种类：新抽取的抗凝血或手指末梢血和血清。5.2标本要求：5.2.1抗凝剂：如用抗凝血，多主张用EDTAK2（㎎/dL）抗凝。5.2.2手指血作血型检测时，最少样品量为100ul，如手指有冻疮，则主张采耳垂血。5.3标本储存：2小时内完成实验，室温放置下不超过8小时，4℃-8℃，保存不超过48小时。5.4.标本运输：室温运输5.5.标本拒收标准：细菌污染、溶血标本不能作测定。6.操作步骤:6.1取洁净小试管（内径10mm×60mm）2支，分别标上A、B字样，用滴管分别向A管滴加抗A分型试剂1滴。向B管滴加抗B分型试剂1滴。向A、B管各滴加待检血样的5％红细胞悬液各1滴，混合。6.2另取洁净小试管（内径10mm×60mm）3支，分别标明A、B和O细胞。用滴管分别加入受检者血清1滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％红细胞悬液1滴，混合。6.3摇匀后以1000转/分的速度离心1分钟判定结果。7.结果判断:7.1先以肉眼观察上清液是否有无溶血现象，然后轻轻摇动试管，使沉于管底的细胞扣悬浮，检查有无凝集块，观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。7.2溶血或凝集都判定为阳性结果7.3凝集强度判断标准：4＋＝红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。3＋＝红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。2＋＝红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。1＋＝肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。±=镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。MF＝混合凝集外观是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍呈分散分布。－表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。7.5按下表报告受检者红细胞ABO血型ABO血型正反定型结果 分型血清＋受检者红细胞 受检者 受检者血清＋试剂红细胞 抗－A＋——＋ 抗－B—＋—＋ 抗－A＋B＋＋—＋ 血型ABOAB A细胞—＋＋— B细胞＋—＋— O细胞————注+为凝集；-为不凝集8.干扰因素:8.1冷凝集和自身凝集现象8.2血浆成分异常8.3抗体减弱或丢失8.4抗原减弱或变异8.5亚型9.超出范围结果处理:9.1红细胞自凝：冷凝集系增高是最为常见原因。应用37℃-40℃的生理盐水洗涤红细胞可去除红细胞表面附着的导致红细胞凝集的冷集素。9.2正反定型结果不一致原因9.2.1分型血清效价太低、亲和力不强。如抗—A血清效价不高，可将A亚型误定为O型，AB型误定为B型。9.2.2红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体比例则不适当，使反应不明显，误判为阴性反应。9.2.3受检者红细胞上抗原位点过少（如亚型）或抗原性减弱（见于白血病或恶性肿瘤）以及类B或cisAB等。9.2.4受检者血清中蛋白紊乱（高球蛋白血症），或实验时温度过高，常引起红细胞呈缗钱状排列。9.2.5受检者血清中缺乏应有的抗—A和抗—B抗体，如丙种球蛋白缺乏症。9.2.6各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集，部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体。9.2.7由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。9.2.9血清中有意外抗体，如自身抗—I，常引起干扰。9.2.9老年人血清中抗体水平大幅度下降。9.3正反定型结果不一致的解决方法：9.3.1另从受检者采取1份新鲜血液标本，这样可以纠正因污染或搞错样本造成的不符合。9.3.2将红细胞洗涤数次，配成2％盐水细胞悬液，用抗—A、抗—B、抗—AI，抗—A＋B及抗—H做试验可以得到其它有用的信息。9.3.3对受检红细胞作直接抗球蛋白试验，如结果呈阳性，表示红细胞已被抗体致敏。9.3.4用A1、A2、B、O红细胞从自身红细胞检查受检血清。如果怀疑是抗—I，用O型（或ABO相合的）脐血红细胞检查。9.3.5如果试验结果未见凝集，应将细胞及血清试验至少在室温和4℃放置30min，用显微镜检查核实。9.3.6如疑为A抗原或B抗原减弱，则可将受检红细胞与抗A或抗—B血清作吸收及放散试验以及受检者唾液作A、B、H血型物质测定。后者只对90％HAB分泌型的人有用。9.3.7如试验结果红细胞呈缗钱状排列，加等渗盐水1滴，混合。往往可使缗钱现象消失。应注意不应先加盐水1滴于受检者血清中而后和红细胞作试验，以免使血清中抗体被稀释。9.3.8如受检者为A型血而疑为有类B抗原时，可用下列方法进行鉴别：9.3.8.1观察细胞与抗—A及抗B的凝集强度，与抗A的反应要比抗—B的反应强。这种区别用玻片法作试验更为明显。9.3.8.2用受检者红细胞与自身血清作试验，血清中的抗—B不凝集自身红细胞上的类B抗原。9.3.8.3检查唾液中是否有A、B物质，如果是分泌型，可检出A物质而无B物质。9.3.8.4核对患者的诊断，类B抗原的形成与结肠癌、直肠癌、革兰阴件杆菌感染有关。10.质量控制: 10.1每更换一批号抗血清试剂，均要滴定抗体效价。 10.2分型血清质量性能符合要求，用毕后，应放置冰箱保存，以免细菌污染，分型血清应保存在2～6℃，对长期数月不用的试剂，可保存于-20℃。10.3IgM抗A或抗B血凝效价≥1210，亲和力≤15秒，冷凝集素效价＜1：4，必须具有检出A2、A2B的能力。 10.4 试剂一旦发现浑浊不得使用。10.5红细胞悬液配制要准确，抗原抗体比例要适当。 10.6试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。10.7操作方法应按规定，一般应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清.10.8按理IgM抗—A和抗—B与相应红细胞的反应温度以4℃为最强，但为了防止冷凝集现象干扰，一般仍在室温（20℃-24℃）内进行试验，37℃可使反应减弱.10.9离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性结果。10.10观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别。10.11判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。11.医学解释:11.1血型鉴定是实施输血治疗的首要步骤。进行交叉配血前必须准确检测受血者和供血者的血型。 11.2进行组织器官移植时，供、受器官者的ABO系统血型必须相同。 11.3母、子ABO系统血型不合可以造成ABO系统新生儿溶血病。11.4ABO血型在人群中的分布，可作遗传学的研究。12.最常见的误差来源:12.1标本采集错误12.2标本信息登记错误12.3红细胞和血清比例不当12.4离心过度或不足12.5阳性反应产生溶血现象或弱凝集未能识别12.6漏加试剂12.7结果记录或者判断错误12.8其他原因导致的血型鉴定困难13.方法评价:13.1试管法定型反应快、时间短，特别是紧急输血时可在抗原抗体反应1分钟后离心观察结果；通过离心增强凝集，可发现亚型和较弱的抗原抗体反应，结果准确可靠。 13.2微柱凝胶法定型使用安全，操作简单，结果稳定可靠，灵敏度高，重复性好，但费用昂贵，需要特殊的仪器设备。14.相关文件:《全国临床检验操作规程（第三版）》ABO血型鉴定试剂盒说明书PAGE1