血液标本采集及处理
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目的：血清(ELISA或化学发光法检测蛋白表达检测)；血浆(游离核酸的检测)；有核细胞(循环肿瘤细胞的检测)。适用范围：肿瘤病人血液标本采集及处理。责任人：操作流程：1.仪器设备：高速低温离心机、－80℃冰箱。1.材料与试剂：试剂：10×红细胞裂解液（CatNO:420301；试剂公司：Biolegend）胎牛血清（100ml；试剂公司：天津康源生物技术有限公司）DMEM(500ml；试剂公司:ThermoCatNO:SH30033.01B)DMSO(100ml；试剂公司:材料：4ml血清真空采血管(黄盖无抗凝剂)4ml血浆真空采血管(紫盖含抗凝剂)移液器、50ml离心管、1ml冻存管、吸头等1.样本采集：3.1分离血清3.1.1血清管(黄盖无抗凝剂)，标本于4℃，3300rpm离心10分钟。3.1.2吸取血清分装于1.5ml冻存管内，每管300µl，分装4管，若血清量较多，则将剩余血清全部加入最后一个冻存管中。3.1.3贴条形码标签，-80℃储存。3.2分离血浆3.2.1血浆管(紫盖含抗凝剂)，标本于4℃，3300rpm离心10分钟。3.2.2吸取血浆分装于1.0ml冻存管内，每管300µl，分装4管，若血浆量较多，则将剩余血清全部加入最后一个冻存管中。3.2.3贴条形码标签，-80℃储存。3.2.4采血管扣紧管盖，放存旁边，准备下一步分离有核细胞的操作。3.3分离有核细胞按每4ml全血需要配制40ml用量稀释红细胞裂解液。3.3.1取50ml离心管,加36ml去离子水，加4ml红细胞裂解液混匀。3.3.2用移液器将分离血浆后剩余血液转移至装有裂解液离心管中，轻轻颠倒混匀，室温静置10min（观察裂解效果适当延长裂解时间，液体呈现透明状为宜）。3.3.3于4℃，800g离心5min，吸去上清，加入4mlDMEM轻轻吹打混匀沉淀。3.3.4于4℃，800g离心5min，吸去上清。3.3.5将4ml细胞冻存液（400µlDMSO＋3600µl胎牛血清；血液和冻存液体积比为1:1）加入离心管里，轻轻吹打混匀，按1ml分装到4个冻存管里。3.3.6贴条形码标签，放入细胞程序降温盒-80℃冰箱过夜，第二天转入液氮罐保存。注：细胞冻存液应当新鲜配制，胎牛血清：DMSO=9:1
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