诊断学 免疫学检查

第八章临床常用免疫学检查陈　晓　东概述(P411)免疫学（immunology）是研究机体自我识别和对抗原性异物排斥反应的一门科学。临床免疫学检查常用于感染性疾病、自身免疫性疾病、变态反应性疾病、免疫缺陷病、肿瘤等疾病的诊断与疗效监测。抗原与抗体特异性体液免疫　　　　　　　絮状沉淀　沉淀反应　环状沉淀　　　　　　免疫浊度　补体结合　　凝集试验　三大标记技术三大血清反应传统的免疫标记技术同位素；(125I3H)RIAIRMA　　　　　荧光抗体技术(ANA)荧光标记　时间分辩荧光技术　　　　　荧光偏振免疫(TDX)酶标记（ELISA)其他标记技术　　其他标记技术发光物标记　电化学发光　　金标记技术　　　硒标记技术　　　　免疫印迹技术标记第一节　免疫球蛋白（Ig）的检测Ig的产生、结构与功能Ig通常是指具有抗体活性和(或)抗体样结构的球蛋白，由浆细胞产生，有特异性识别抗原的功能，但必须与抗原结合形成免疫复合物后才能启动效应功能。包括：IgG、A、M、D、E一、IgG参考值：7.0-16.6g/L,占70-80％特点：长效、能透过胎盘，抗菌、抗病毒测定方法：单向免疫扩散（手工）速率散射比浊（仪器）意义：感染、肝病、SLE、－多克隆↑免疫增殖、多发性骨髓瘤－单克隆↑减低：免疫缺陷、重链病、轻链病、肾病、免疫抑制剂…等二、IgA参考值：0.7-3.5g/L，存在于各种分泌物中特点：分泌型(SIgA）:粘膜抵抗力血清型：单体方法：同上意义：↑粘膜抵抗力、IgA单克隆（monoclonal）　　　　感染、多克隆增高↓反复呼吸道感染非IgA单克隆，如SLE、免疫缺陷等三、IgM参考值：0.5-2.6g/L,占5-10％特点：五聚体，大分子如天然凝集素抗A、抗B意义：早期抗体，出现早，消失快。感染初期、巨球蛋白血症　　　　降低情况同上类似　　　　方法同上。四、IgD、IgEIgD:含量低、作用不很明确IgE：含量最少，0.1-0.9mg/L变态反应如过敏、寄生虫病有关　　　　过敏、哮喘、嗜酸性细胞增多症　　　　降低情况与上类似　　　　ELISA法测定　　五、血清M蛋白测定检测方法：血清蛋白电泳、免疫电泳主要疾病及M蛋白：　多发性骨髓瘤：IgG、IgA、IgE少见IgD　巨球蛋白血症：大量IgM　重链病：Ig重链　轻链病：Ig轻链M蛋白血症　　　　　　　　　　　　　　M：Monoclonal第二节　补体的测定补体是一组具有酶原活性的糖蛋白一、总补体活性“CH50”测定溶血素（抗体）致敏绵羊红细胞　补体溶血总补体活性＝(1/血清量)×稀释倍数正常参考值：50-100ｋu/L总补体活性CH50测定CH50的临床意义补体传统途径的活化程度增高：急性感染、组织损伤、恶性肿瘤降低：免疫复合性疾病（肾炎)、SLE、肝病，重症营养不良二、C3与C4测定C3含量最高，传统、旁路途径都需C3激活　　(是激活的关键)含量:C3:0.8-1.5g/LC4:0.44-0.66g/L方法：单向免疫扩散法（SRID)同Ig测定速率散射免疫比浊法补体测定的意义：↑：炎症、肿瘤↓：肾炎、自身免疫病第三节　细胞免疫的测定　一、T细胞亚群的测定1.E花环（RFC)原理：T细胞表面具SRBC受体正常58-72％左右2.淋巴细胞转化试验（LCT)原理：淋TPHA淋母细胞正常：同上意义：T细胞数量↓免疫缺陷、肿瘤、免疫病3．淋巴细胞分化抗原测定T细胞：CD3-总T标志CD4-TH标志CD8-Ts标志B细胞：CD19、CD20、CD22等　　　　细胞的荧光免疫标记技术　　　　流式细胞仪的应用四、细胞因子测定1.白介素2（IL-2)或IL-2R2.肿瘤坏死因子（TNF)3.干扰素（IFN)ELISA法，科研，非特异各组分检测意义不同。第四节肿瘤标志物检测（P418）肿瘤标志物（tumormarker)是指在肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞本身合成、释放或者是由机体对肿瘤细胞反应而产生的一类物质。这类物质可反映细胞恶变各阶段表型及基因特征性。肿瘤标志物检测的意义是：肿瘤普查、辅助诊断、观察疗效和判断预后。一、蛋白质类1.AFP（甲胎蛋白）：胎儿早期肝脏合成的糖蛋白，对诊断肝细胞癌有重要临床意义。[方法]：RIA；ELISA；化学发光[参考值]：<25μg/L[临床意义]：特异--原发性肝细胞癌显著增高，诊断阈值>300μg/L2.CEA（癌胚抗原）：[方法]：RIA；ELISA；化学发光[参考值]：<5μg/L[临床意义]：非特异性--部分恶性肿瘤，特别是消化道肿瘤患者中可升高，对肠癌复发、转移有重要意义。3.组织多肽抗原（略）4.PSA（前列腺特异抗原）－－存在于前列腺管道的上皮细胞中，在前列腺癌时血清水平明显升高，敏感性、特异性高。游离PSA的检测及其PSA/fPSA比值5.鳞状上皮癌抗原（SCC)参考值：血清<1.5μg/L临床意义：鳞状上皮癌，肺、宫颈癌二、糖类抗原肿瘤标志物1.CA199－－胰腺癌和消化道癌时，患者血清CA199水平可明显升高.2.CA125（癌抗原125）－－为一种糖蛋白性肿瘤相关抗原，存在于卵巢肿瘤的上皮细胞内，对诊断卵巢癌有较大临床价值。3.CA153（癌抗原153）－－对乳腺癌有重要的辅助诊断作用肿瘤标志物的临床应用筛查：高危人群诊断、良/恶鉴别：辅助指标疗效观察：外科—手术切除/残瘤/姑息保守—药效、放疗效果4预后：病员分群,标志物:5随访……第五节　自身抗体检测（P423）--自身免疫病是指免疫系统对自身成分的免疫耐受性减低或破坏，产生自身抗体损伤含有相应自身抗原的组织器官而造成的疾病。　一、类风湿因子（RF）是变性IgG刺激机体产生的一种自身抗体方法：胶乳凝集法；RIA；ELISA临床意义：类风湿性疾病时，RF↑，70-90％其他自身免疫性疾病，RF亦可↑二、抗核抗体检测1.ANA:　是一种泛指抗各种细胞核成分的自身抗体，是血清中存在的一类和自身组织细胞的细胞核发生反应的自身抗体的总称。无器官和种属特异性临床意义：阳性多见于未治疗的SLE，阳性率达80％一100％，亦可见于其他自身免疫性疾病。2.抗ds-DNA抗体：　靶抗原是细胞核中DNA的双螺旋结构方法：免疫荧光法、放射免疫法[临床意义]　SLE的高特异性试验，但敏感性较低，活动期SLE阳性率70％-90％　3.可提取性抗原抗体谱（ENA）可提取性核抗原多肽抗体谱－包括抗Sm、核糖体、ScL70、Jo－1、SSB、SSA和RNP等的抗体。[方法]免疫印迹[临床意义]（见P424表4-8-2）抗Sm抗体：SLE的特异性标志之一，抗dsDNA和抗Sm抗体同时检测，可提高SLE诊断率。抗SSA、SSB抗体－－干燥综合征抗RNP抗体--混合性结缔组织病　第六节　感染的免疫学检查　　　　　（P434）　一、细菌感染免疫　１．抗“O”抗体测定抗溶血性链球菌(感染）抗体溶血法胶乳法：<500u速率散射法意义：风湿、风湿性关节炎、风湿性心脏病、肾炎时↑同时测血沉２．肥达氏反应：原理：是利用伤寒和副伤寒沙门菌菌液为抗原，检测病人血清中有无相应抗体的一种凝集试验。伤寒第三周后阳性率达80%，初期阴性方法：直接凝集法　　H<1:160鞭毛抗原记忆反应O<1:80甲<1:80乙<1:80副伤寒丙<1:80二、病毒感染的免疫学检测（一）TORCH弓型虫、风疹、巨细胞病毒、单纯泡疹（三）性传播疾病的免疫学检测（STD)　　　支原体、衣原体　（金标法）　　　　梅毒　初筛RPR、确诊T-PHA　　　HIV初筛ELISA、蛋白印迹试验　（一）梅毒感染检测1.筛选试验：RPR－快速血浆反应素试验2.确诊试验：TPHA－梅毒螺旋体血凝试验（二）HIV感染检测1.筛选试验：ELISA法测HIV抗体2.确诊试验：蛋白印迹试验或RT-PCR测HIV-RNA第九章（P452）　第四节肝炎血清标志物测定一、甲型肝炎IgM抗体（ELISA法测定）：现实感染，诊断意义IgG抗体（ELISA法）：流行病学意义二、乙型肝炎1.最常用的检测项目（两对半-见表4-5-4）方法：ELISA、放射免疫法（RIA），发光免疫法2.乙肝DNA定量PCR检测：病毒复制的指标正常：PCR(-)或<10-3Copy/ml拉米夫定(贺普丁）、干扰素治疗效果主要指标。乙肝常见的检验标志物分析+--抗HBc-IgM+--+++抗HBc+---+-抗HBe+----+HBeAg+----抗HBs+--+++HBsAg双抗现感免疫正常二阳小三阳大三阳状态项目三、丙肝病毒标志物RNA病毒含量低1.RNA-RT-PCR（方法学评价－优）2.抗HCV-IgM近期感染指标3.抗HCV-IgG感染史其它戊肝与甲肝类似丁肝为缺陷病毒，需有HBV的存在方能复制和传播