常用的内切酶的识别序列

常用的内切酶的识别序列在分子克隆实验中，限制性内切酶是必不可少的工具酶。无论是构建克隆载体还是表达载体，要根据载体选择合适的内切酶(当然，使用T载就不必考虑了)。先将引物设计好，然后添加酶切识别序列到引物5端(英语怎么说？)。常用的内切酶比如BamHI、EcoRI、Hindlll、Ndel、Xhol等可能你都已经记住了它们的识别序列，不过为了保险起见，还是得查证一下。下面，我就总结了一些常用的内切酶的识别序列，仅供各位参考。下面这些内切酶都属于ll型内切酶。先介绍一下什么是ll型内切酶吧。TheTypellrestrictionsyst...

在分子克隆实验中，限制性内切酶是必不可少的工具酶。无论是构建克隆载体还是表达载体，要根据载体选择合适的内切酶(当然，使用T载就不必考虑了)。先将引物设计好，然后添加酶切识别序列到引物5端(英语怎么说？)。常用的内切酶比如BamHI、EcoRI、Hindlll、Ndel、Xhol等可能你都已经记住了它们的识别序列，不过为了保险起见，还是得查证一下。下面，我就总结了一些常用的内切酶的识别序列，仅供各位参考。下面这些内切酶都属于ll型内切酶。先介绍一下什么是ll型内切酶吧。TheTypellrestrictionsystemstypicallycontainindividualrestrictionenzymesandmodificationenzymesencodedbyseparategenes.TheTypeIIrestrictionenzymestypicallyrecognizespecificDNAsequencesandcleaveatconstantpositionsatorclosetothatsequencetoproduce5-phosphatesand3-hydroxyls.UsuallytheyrequireMg2+ionsasacofactor,althoughsomehavemoreexoticrequirements.Themethyltransferasesusuallyrecognizethesamesequencealthoughsomearemorepromiscuous.ThreetypesofDNAmethyltransferaseshavebeenfoundaspartofTypeIIR-MsystemsformingeitherC5-methylcytosine,N4-methylcytosineorN6-methyladenine.Apal（类型：TypeIIrestrictionenzyme)识别序列:5GGGCC93'BamHI（类型：TypeIIrestrictionenzyme)识别序列：5'G9ATCC3'Bglll（类型：TypeIIrestrictionenzyme)识别序列:5'APATCT3'EcoRI（类型：TypeIIrestrictionenzyme)识别序列：5'GAAATTC3'Hindlll（类型：TypeIIrestrictionenzyme)识别序列:5'AAAGCTT3'Kpnl（类型：TypeIIrestrictionenzyme)识别序列:5'GGTAC93'Ncol（类型：TypeIIrestrictionenzyme)识别序列：5'CACATGG3'Ndel（类型：TypeIIrestrictionenzyme)识别序列:5'CAATATG3'Nhel（类型：TypeIIrestrictionenzyme)识别序列：5'G9TAGC3'Notl（类型：TypeIIrestrictionenzyme)识别序列：5'GCPGCCGC3'Sacl（类型：TypeIIrestrictionenzyme)识别序列：5'GAGCT93'Sall（类型：TypeIIrestrictionenzyme)识别序列：5'GATCGAC3'Sphl（类型：TypeIIrestrictionenzyme)识别序列：5'GCATG93'Xbal（类型：TypeIIrestrictionenzyme)识别序列:5'T9TAGA3'Xhol（类型：TypeIIrestrictionenzyme)识别序列：5'CATCGAG3'当然，上面总结的这些肯定不全，要查找更多内切酶的识别序列，你还可以选择下面几种方法：查你所使用的内切酶的公司的目录或者网站；NEB网站上提供的识别序列图表下载用软件如：PrimerPremier5.0或Bioedit等，这些软件均提供了内切酶识别序列的信息；推荐到NEB的REBASE数据库去查(网址：HYPERLINK"http://rebase.neb.com/rebase/rebase.html"http://rebase.neb.com/rebase/rebase.html)当你设计好引物，添加上了内切酶识别序列，下一步或许是添加保护碱基了，可以参考：NEB公司网站提供的保护碱基参考表下载NEB公司网站上关于设计PCR引物保护碱基的参考双酶切buffer的选择（MBI、罗氏、NEB、Promega、Takara）这里再给大家推荐一种新的不需要连接反应的分子克隆方法，优点包括：设计引物不必考虑选择什么酶切位点；不必考虑保护碱基的问题；不必每次都选择合适的酶来酶切质粒制备载体；而且不需要DNA连接酶；假阳性几率低（因为没有连接反应这一步，载体自连的问题没有了）。另外，还有一个经济问题：如果一次性制备一批载体（小提一次质粒约80gL），并将之线性化（可双酶切亦可单酶切）然后每次做分子克隆实验时用一点，大约可以做约40次转化，管上一年没问题，呵呵。

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