最新微生物知识概况及污染菌库建立精品课件

微生物知识概况(gàikuàng)及污染菌库的建立第一页，共92页。主要(zhǔyào)内容微生物知识概况什么是微生物？微生物学与人类的关系微生物的特点污染菌库的建立收集→分离(fēnlí)纯化→保藏→鉴定→数据处理与应用2/92第二页，共92页。内容(nèiróng)一：微生物知识概况一、什么是微生物？微生物的定义微生物的种类微生物的形态微生物的特点二、微生物学(wēishēnɡwùxué)与人类的关系3/9214第三页，共92页。一、什么(shénme)是微生物？1、微生物的定义一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称。它们都是一些体积微小，结构(jiégòu)简单的低等生物。微生物个体微小结构简单进化地位低等微米级、纳米级单细胞、简单的多细胞、非细胞原核类、低等真核类、非细胞类4/92第四页，共92页。2、微生物的种类(zhǒnglèi)按其结构、化学组成及分化程度(chéngdù)可分为:★原核类:仅有原始核质，无核仁或核膜，细胞器很不完善。★真核类:细胞核的分化程度(chéngdù)较高，有核膜、核仁和染色体，细胞器完整。★非细胞类:体积微小，能通过除菌过滤器。5/92第五页，共92页。2、微生物的种类(zhǒnglèi)微生物原核生物真核生物非细胞微生物细菌、放线菌、蓝细菌酵母、霉菌、蕈菌病毒亚病毒（类病毒、拟病毒、阮病毒）支原体、衣原体、立克次氏体6/92第六页，共92页。3、微生物的形态(xíngtài)3.1微生物的菌落(jūnluò)形态7/9214第七页，共92页。四大(sìdà)类微生物菌落比较表类别细菌放线菌酵母菌霉菌培养基牛肉膏高氏一号马铃薯马铃薯菌落形状小点状，多为圆形，个别呈根状，辐射状圆形辐射状多为原形疏松的绒毛状、絮状、蜘蛛网状，有的无固定大小大小一般较小较小比细菌大而厚大颜色多样（乳白、灰白、灰、红、荧光等）正反面颜色相同多样（灰白、白、红、粉红、蓝、紫、橙等）正反面颜色不同多为乳白色多样（白，灰蓝、绿黑、粉红等）正反面一般颜色不同表面状态光滑或粗糙，湿润或干燥，较粘初期似细菌菌落，晚期为粉状干燥表面湿润粘稠绒毛状，粉状，棉絮状，蜘蛛网状，菌丝疏松生长速度一般较快慢较快快与基质结合程度不牢牢固，不易挑取不牢较牢生长范围有限有限有限多为无限气味往往有臭味有泥腥味常有酒香味往往有霉味*/92第八页，共92页。把细胞个体形态与菌落(jūnluò)特征一块比较：四大(sìdà)类微生物的比较*9/92第九页，共92页。3.2微生物的显微(xiǎnwēi)形态类别形态举例细菌球菌直径为0.8-1.2μm，呈球形、类球形。双球菌、链球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌等。杆菌一般长2-5μm，宽0.5-1.0μm。各种杆菌的长短宽窄不一。炭疽杆菌、结核杆菌、大肠杆菌等。螺形菌菌体呈弯曲状，弧菌有数个弯曲，呈香蕉状，螺菌有数个弯曲。弧菌和螺菌。真菌酵母菌大小比细菌大得多，为葡萄球菌的数倍至几十倍，小的肉眼看不见，大的如木耳、蘑菇、灵芝。酿酒酵母菌、路德类酵母菌等。霉菌青霉菌、曲霉菌等。常见(chánɡjiàn)微生物显微结构比较表*/92第十页，共92页。葡萄球菌(pútáoqiújūn)酵母菌(芽痕)棒状杆菌(gǎnjūn)大肠杆菌(dàchánɡɡǎnjūn)弧状菌链球菌11/92第十一页，共92页。青霉菌(méjūn)犁头(lítóu)霉12/92第十二页，共92页。沙门(shāmén)菌铜绿(tónglǜ)假单孢菌生孢梭菌枯草(kūcǎo)芽孢杆菌13/92第十三页，共92页。4、微生物的特点(tèdiǎn)个体小,面积大：小于0.1mm。肉眼不可见。分布广,种类多（10万多种）：自然界中到处都有，如水、空气、土壤等,土壤中的数量最多。代谢强，转化快：发酵乳糖的细菌在1小时内可分解其自重(zìzhòng)1000～10000倍的乳糖；产朊假丝酵母合成蛋白质的能力比食用公牛强10万倍。生长旺，繁殖快：微生物有惊人的繁殖速度，大多数微生物几十分钟内就可以繁殖一代。适应性强，易变异（耐药性产生的原因）14/92第十四页，共92页。二、微生物与人类(rénlèi)的关系微生物无处不在，我们无时不生活(shēnghuó)在“微生物的海洋”中。15/92第十五页，共92页。二、微生物与人类(rénlèi)的关系微生物在哪里(nǎli)?16/92第十六页，共92页。17/92第十七页，共92页。细菌(xìjūn)数亿/g土壤，土壤中的细菌(xìjūn)总重量估计为：10034×1012吨；每张纸币(zhǐbì)带细菌：900万人体体表及体内存在(cúnzài)大量的微生物：皮肤表面：平均10万个细菌/平方厘米；口腔：细菌种类超过500种；肠道：微生物总量达100万亿，粪便干重的1/3是细菌，每克粪便的细菌总数为：1000亿个；每个喷嚏的飞沫含4500-150000个细菌，重感冒患者为8500万。18/92第十八页，共92页。时时刻刻(shíshíkèkè)与微生物“共舞”是祸？是福？微生物既是人类的敌人(dírén)，也是人类的朋友！*19/92第十九页，共92页。微生物是自然界物质(wùzhì)循环的关键环节；微生物是人类(rénlèi)的朋友！体内的正常菌群是人及动物健康的基本保证；帮助消化、提供必需的营养物质、组成(zǔchénɡ)生理屏障微生物可以为我们提供很多有用的物质；醋、酶、各种药物、疫苗、面包、奶酪、啤酒、酱油等基因工程为代表的现代生物技术；*20/92第二十页，共92页。微生物是人类(rénlèi)的敌人！鼠疫天花(tiānhuā)艾滋病狂犬病埃博拉病毒……天花病毒康熙爱德华·詹纳*21/92第二十一页，共92页。二、微生物与人类(rénlèi)的关系可以说，微生物与人类关系的重要性，怎么强调都不过分.微生物是一把十分(shífēn)锋利的双刃剑，它们在给人类带来巨大利益的同时也带来“残忍”的破坏。它给人类带来的利益不仅是享受，而且实际上涉及到人类的生存。22/92第二十二页，共92页。内容(nèiróng)二：污染菌库的建立污染菌库建立的目的和应用(yìngyòng)污染菌库建立的步骤23/92第二十三页，共92页。一、污染菌库建立的目的(mùdì)和应用目的：应新版GMP要求(yāoqiú)，需对环境、原辅料及不同阶段产品监控或检测到的微生物进行鉴定，并建立污染菌种库。便于对日常监测中出现异常菌株与菌种库进行比对，查找其来源，并针对菌种特性对相应的监控环境采取有效 措施 《全国民用建筑工程设计技术措施》规划•建筑•景观全国民用建筑工程设计技术措施》规划•建筑•景观软件质量保证措施下载工地伤害及预防措施下载关于贯彻落实的具体措施 进行消毒。124/92第二十四页，共92页。目的(mùdì)：长期有规律地对环境、检品中的微生物进行监控，了解环境中的微生物污染种类和变化趋势，并作为质量控制(kòngzhì)文件加以保存，对企业日常生产质量管理和监管机构的监督检查都是有益的补充。225/92第二十五页，共92页。应用(yìngyòng)：对实验室洁净环境、各种检品进行监控，构建环境微生物分布图，提高(tígāo)检测结果公信力1建立(jiànlì)实验室环境微生物信息库、动态监控环境微生物的变化、建立(jiànlì)环境微生物污染趋势分析图，预测微生物污染方向，从被动的排查污染措施上升到主动的预防、预警。26/92第二十六页，共92页。应用(yìngyòng)：2增强药品中微生物检验能力，做到数据可信，国际认可，为执法、仲裁(zhòngcái)提供依据在严格依据(yījù)法定方法进行检验的同时，结合微生物鉴定技术平台，对检验过程和检验结果进行双重复核和监控。通过对比监测的微生物种群类别和样品微生物种群情况，客观准确的 评价 LEC评价法下载LEC评价法下载评价量规免费下载学院评价表文档下载学院评价表文档下载 检验质量，增加检验报告的含金量。27/92第二十七页，共92页。应用(yìngyòng)：3与国际标准接轨，监控药品生产环境，构建(ɡòujiàn)药品生产微生物风险评估体系美国FDA要求药厂将微生物鉴定到“种”一级，并建议在微生物形态和生化(shēnɡhuà)反应鉴定之外采用基因分型技术进行分析，以便对生产环境的微生物污染进行监控。28/92第二十八页，共92页。二、污染菌库建立(jiànlì)步骤污染(wūrǎn)菌的收集3.2.1.污染(wūrǎn)菌库数据的处理与应用污染菌的分离纯化4.菌种的保藏菌种的鉴定5.29/92第二十九页，共92页。一、污染(wūrǎn)菌的收集污染菌收集分类污染菌采集地点环境监控污染菌收集化验室生产---有毒区生产---无毒区分包装车间原辅料、不同阶段样品监控污染菌收集成品组原辅料组生产---有毒区生产---无毒区30/92第三十页，共92页。一、污染(wūrǎn)菌的收集31/92第三十一页，共92页。二、污染(wūrǎn)菌的分离纯化定义：样品或环境监控到的微生物有的呈混杂状态存在，要获得(huòdé)所需菌种，必须从中进行分离，即将待分离样品进行一定的稀释，并使微生物的细胞（或孢子）尽量以分散状态存在，然后使其长成一个个纯种单菌落。目的：使样品或环境中监控到的微生物长成单菌落后，便于后续的鉴定和保藏工作。32/92第三十二页，共92页。方法：稀释(xīshì)涂板法、稀释(xīshì)混合平板法、划线分离平板划线分离法33/92第三十三页，共92页。各浓度(nóngdù)做三个平皿挑选单菌落接种(jiēzhòng)斜面稀释(xīshì)涂板法从土壤分离微生物操作过程34/92第三十四页，共92页。三、污染(wūrǎn)菌的保藏一、菌种保藏（一）保藏目的(mùdì)及原理（二）菌种保藏的方法（三）菌种保藏注意事项二35/92第三十五页，共92页。（一）菌种保藏目的(mùdì)及原理目的(mùdì)原理创造不利于菌种生长的一切条件，使其代谢处于休眠状态。不生长不死亡不污染不降低或不丧失其优良性以尽量延长使用时间*36/92第三十六页，共92页。*37/92第三十七页，共92页。（二）菌种保藏(bǎocáng)的方法生活(shēnghuó)态休眠态培养基传代培养寄主(jìzhǔ)传代培养冷冻干燥斜面、平板液氮、低温冰箱沙土管、冷冻真空干燥*38/92第三十八页，共92页。常用保藏(bǎocáng)法简介特点简便保藏时间短易污染及退化1.斜面(xiémiàn)低温法斜面(xiémiàn)菌种置4~6℃冰箱中（3~6个月）39/92第三十九页，共92页。40/92第四十页，共92页。2.矿油(kuànɡyóu)保藏法无菌检验(jiǎnyàn)？注入种管淹没斜面约1cm矿油处理灭菌：152kpa、30min去水：40~50℃烘至无色透明口堵胶塞用时转管再转管方法简便的优点适用(shìyòng)于不宜冷冻干燥的微生物（如产孢能力低的丝状菌）的保存。某些细菌不宜采用此法进行保存。特点41/92第四十一页，共92页。42/92第四十二页，共92页。3.超低温冷冻(lěngdòng)保藏要求长期保藏的微生物菌种，一般都要求在-60～-80℃以下进行保藏。在超低温冷藏柜中保藏菌种的一般方法(fāngfǎ)是：1．离心收获对数生长中期至后期的微生物细胞2．用新鲜培养基重新悬浮所收获的细胞；3．加入等体积的20％甘油或10％二甲亚砜；4．混匀后分装入冷冻指管或安瓿中，于-70℃超低温冰箱中保藏。43/92第四十三页，共92页。如果待保藏菌种生长在斜面(xiémiàn)上，则可用含10％甘油的新配制液体培养基洗涤收获。若干细菌和真菌菌种可通过此保藏方法保藏5年而活力不受影响。44/92第四十四页，共92页。4.磁珠保藏(bǎocáng)法45/92第四十五页，共92页。5.液氮冷冻(lěngdòng)保藏法液氮超低温保藏法是近几年才发展起来的，此法国外已较普遍采用，是适用范围最广的微生物保藏法。原理:用液氮能长期(chángqī)保存菌种。这是因为液氮的温度可达－196℃，远远低于其新陈代谢作用停止的温度（－130℃），所以此时菌种的代谢活动已基本停止，化学作用亦随之消失。46/92第四十六页，共92页。常用(chánɡyònɡ)保藏方法比较47/92第四十七页，共92页。（三）菌种保藏(bǎocáng)的注意事项1．菌种在保藏前所处的状态一般(yībān)以稍低于生长最适温度培养至孢子成熟的菌种进行保存，效果较好。2．菌种保藏所用的基质碳源、砂土、保护剂3．操作过程对细胞结构的损害冻结速度48/92第四十八页，共92页。四、菌种的鉴定(jiàndìng)49/92第四十九页，共92页。1、菌种鉴定(jiàndìng)技术对细菌各种生物学性状进行分类，选用多项生理、生化指标逐一进行比较，通过查表或计算机分析各菌间相似(xiānɡsì)度，完成细菌分类。细胞形状、菌落形态、G氏染色(rǎnsè)等形态学特征初步判定。遗传特征：核酸序列蛋白质比较核酸碱基组成50/92第五十页，共92页。51/92第五十一页，共92页。用于鉴定(jiàndìng)的形态学特征52/92第五十二页，共92页。用于鉴定的生理(shēnglǐ)生化特征53/92第五十三页，共92页。用于鉴定(jiàndìng)的遗传学特征细菌(xìjūn)酵母菌霉菌(méjūn)54/92第五十四页，共92页。2、细菌(xìjūn)的鉴定55/92第五十五页，共92页。分离纯化得到单菌落菌落形态检验DNA提取构建系统发育树分子生物学鉴定通用引物扩增细菌16SrDNA序列16SrDNA序列分析鉴定结论样品接收革兰氏染色形态鉴定生理生化鉴定细菌鉴定仪细菌(xìjūn)的鉴定流程图56/92第五十六页，共92页。形态学--革兰氏染色(rǎnsè)细菌学上最常用的鉴别染色法。该染色法能将细菌分为G+菌和G-菌。原理：由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。G-菌的细胞壁较多易被乙醇溶解的类脂质、肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低(jiàngdī)，因此细菌仍保留初染时的颜色。57/92第五十七页，共92页。G+菌和G-菌细胞壁结构(jiégòu)和成分比较类型革兰氏阳性菌革兰氏阴性菌强度较坚韧较疏松厚度厚，20～80nm薄，5～10nm肽聚糖层数多，15~50层，每层厚1nm少，1～3层肽聚糖含量多，可占胞壁干重50～80%少，占胞壁干重10～20%磷壁酸+-外膜-+结构三维空间（立体结构）二维空间（平面结构）58/92第五十八页，共92页。革兰氏染色(rǎnsè)步骤59/92第五十九页，共92页。革兰氏阴性菌革兰氏阳性菌60/92第六十页，共92页。革兰氏阳性球菌：产品样本、水、环境监测中发现的大多数阳性球菌来自人，有些可能来源于天然来源的原料。药品生产中包括无菌工艺，最常见的污染物是革兰氏阳性球菌，有葡萄球菌属、微球菌属、链球菌属。人源污染的细菌经常与不规范的无菌行为(xíngwéi)和操作、裸露的皮肤或头发(人类脱落)有关。常见革兰氏菌污染(wūrǎn)来源61/92第六十一页，共92页。革兰氏阳性杆菌污染物通常来自于环境，特别是土壤或尘埃，也会来自原料，如聚乙二醇(PEG)。生物工艺最常见的革兰氏阳性杆菌污染，是芽孢杆菌属和类芽孢杆菌属，它们产生的内生芽孢对环境压力有高耐受性。芽孢杆菌属污染与缺乏无菌操作(cāozuò)意识，材料和表面的消毒不彻底，无效SIP循环，违反无菌原则，以及污染的原料有关。常见(chánɡjiàn)革兰氏菌污染来源62/92第六十二页，共92页。革兰氏阴性杆菌污染通常(tōngcháng)来自水源、土壤、植被、原料。革兰氏阴性杆菌包括大肠杆菌属，假单胞菌属，伯霍尔德杆菌属，劳尔氏菌属、狭长平胞属等。事实上，水和液体系统中通常(tōngcháng)发现存在这些属的微生物污染。所以，在生物工艺操作样品中通常(tōngcháng)不会发现革兰氏阴性杆菌。产品污染革兰氏阴性杆菌经常与积水、设备的清洁维护保养护操作不彻底相关。革兰氏阴性菌污染的主要问题之一是内毒素常见革兰氏菌污染(wūrǎn)来源63/92第六十三页，共92页。革兰氏阴性球菌在医学上是与人类有关的。它们包括引起性传播疾病(淋病奈瑟氏菌、脑膜炎奈瑟氏菌)和呼吸道感染(卡他莫拉菌)的微生物。这类的污染(wūrǎn)很少出现在生物工艺中。如果结果显示有革兰氏阴性球菌污染(wūrǎn)，很有可能是检验错误。常见(chánɡjiàn)革兰氏菌污染来源64/92第六十四页，共92页。革兰氏阴性螺旋菌在制药用水系统或洁净室环境很少发现。这些细菌与排泄物污染有关,包括被污染的水源。当检测到该类菌时，应该(yīnggāi)全面调查找到它的潜在来源。常见革兰氏菌污染(wūrǎn)来源65/92第六十五页，共92页。分离纯化得到单菌落菌落形态检验DNA提取构建系统发育树分子生物学鉴定通用引物扩增细菌16SrDNA序列16SrDNA序列分析鉴定结论样品接收革兰氏染色形态鉴定生理生化鉴定细菌鉴定仪细菌(xìjūn)的鉴定流程图66/92第六十六页，共92页。生理生化--半自动细菌(xìjūn)鉴定仪（ATBNew）检测项目：可鉴定(jiàndìng)由环境、原料及制成品分离出的菌种和药敏试验（包括：肠杆菌、非发酵G-杆菌、葡萄球菌、链球菌、酵母菌、厌氧菌）。可鉴定(jiàndìng)770种细菌和分析近80种抗生素药敏实验。67/92第六十七页，共92页。分离纯化得到单菌落菌落形态检验DNA提取构建系统发育树分子生物学鉴定通用引物扩增细菌16SrDNA序列16SrDNA序列分析鉴定结论样品接收革兰氏染色形态鉴定生化鉴定ATB细菌鉴定仪鉴定细菌(xìjūn)的鉴定流程图68/92第六十八页，共92页。分子生物学--具体(jùtǐ)流程基因组的制备(zhìbèi)PCR克隆(kèlónɡ)16sRNA阳性克隆鉴定，测序同源性分析，系统进化树建立69/92第六十九页，共92页。系统发育树根据同源性分析结果和系统发生树来判定(pàndìng)该菌株为Cellulophaga属细菌,命名Cellulophagasp.QY201。*70/92第七十页，共92页。3、真菌(zhēnjūn)的鉴定71/92第七十一页，共92页。真菌(zhēnjūn)的鉴定流程图分离纯化得到真菌样品的单菌落真菌菌落形态观察真菌DNA的提取构建系统发育树分子生物学评价通用引物扩增真菌ITS序列ITS序列在GenBank中进行Blast分析鉴定结论72/92第七十二页，共92页。真菌形态观察通常把真菌分为酵母菌和丝状真菌(霉菌)。霉菌由粗大、有隔或无隔分支状菌丝构成，菌丝分为基质菌丝和气生菌丝。气生菌丝特化结构上产生(chǎnshēng)多种无性、有性孢子。孢子着生部位、排列方式以及孢子形态是真菌鉴定的重要依据。*73/92第七十三页，共92页。酵母菌是微小的单细胞真菌(zhēnjūn)。可能在非专业人员看来，平皿上的酵母菌落像细菌。然而，在显微镜下，这些细胞大得多，看起来像葡萄干，因此可以很容易地区别于细菌。生物工艺中典型的酵母污染是生物工艺中的人员、植物和原材料。常见酵母菌污染(wūrǎn)来源74/92第七十四页，共92页。霉菌是多细胞真菌，其产生(chǎnshēng)的细丝称为菌丝。因此其学名为“丝状真菌”。这类微生物在土壤、尘埃(粉尘)和植被中非常常见。霉菌污染是这些微生物在生殖周期中会产生(chǎnshēng)的孢子。因此霉菌污染很容易传播。另一个问题是大多数物种产生(chǎnshēng)的真菌毒素对人类有害。常见(chánɡjiàn)霉菌污染来源75/92第七十五页，共92页。黑曲霉可引起烧伤(shāoshāng)病人皮肤感染或真菌性肺部感染3.2微生物的显微(xiǎnwēi)形态76/92第七十六页，共92页。曲霉(qūméi)青霉*77/92第七十七页，共92页。分生孢子梗青霉：分生孢子梗*78/92第七十八页，共92页。足细胞曲霉(qūméi)：分生孢子头79/92第七十九页，共92页。根霉：孢子囊、匍匐(púfú)枝和假根*80/92第八十页，共92页。犁头(lítóu)霉：接合孢子81/92第八十一页，共92页。酵母菌是单细胞构造，个体形态多为卵圆形、圆柱形，但有时某些酵母菌可形成(xíngchéng)假菌丝。酵母菌无性繁殖以出芽方式生殖。酵母菌：出芽(chūyá)酿酒(niànɡjiǔ)酵母白色念珠菌（假丝酵母）*82/92第八十二页，共92页。真菌(zhēnjūn)的鉴定流程图分离纯化得到真菌样品的单菌落真菌菌落形态观察真菌DNA的提取构建系统发育树分子生物学评价通用引物扩增真菌ITS序列ITS序列在GenBank中进行Blast分析鉴定结论83/92第八十三页，共92页。分子生物学在真菌鉴定(jiàndìng)中的应用现行国标仅能够对曲霉属，青霉属，镰刀菌属等少数几个种属的霉菌进行鉴定。我国的食品卫生微生物学检验国家标准中，对于青霉菌的鉴定需要在分离纯化后培养12-14天，再对其孢子及菌丝进行形态学观察。真菌孢子易于在空气中飘散(piāosàn)，难以杀灭，对实验室环境和检验人员安全具有潜在污染风险。分子生物学鉴定技术不需要使用选择性培养基，纯化后即可进行菌种鉴定。对真菌的菌丝体和孢子均能够进行DNA的提取，避免霉菌产生的大量(dàliàng)孢子对实验室工作环境带来的潜在污染危害。84/92第八十四页，共92页。五、污染(wūrǎn)菌库数据的处理与应用目的：建立环境微生物污染趋势分析图，预测微生物污染方向，从被动(bèidòng)的排查污染措施上升到主动的预防、预警。并将污染信息与历史污染物比对，回顾调查，帮助质量体系的改进。85/92第八十五页，共92页。企业(qǐyè)自查政府监管微生物样本(yàngběn)的采集微生物菌株鉴定(jiàndìng)企业环境控制及污染溯源能力新型监管模式的建立构建微生物分布图建立菌种信息库A类企业：分子水平B类企业：生化水平C类企业：镜检、API水平作用：企业微生物污染的监督、管理和风险评估新模式的建立86/92第八十六页，共92页。五、污染菌库数据(shùjù)的处理与应用环境监测(huánjìnɡjiāncè) 计划 项目进度计划表范例计划下载计划下载计划下载课程教学计划下载 收集、分离(fēnlí)、鉴别污染菌数据分析与应用87/92第八十七页，共92页。沉降(chénjiàng)菌监测频次及测试状态级别监测频次监测状态判定标准A级（B+A）中间产品制备每批动态静态：＜1CFU/皿（Ф·0.5hr）动态：＜1CFU/皿（Ф·4hr）分装每批全程动态轧盖每周动态移动层流车每月动态其他房间每月动态A级（C+A）每周动态A级（D+A）每月（洗瓶隧道烘箱每月）静态B级中间产品制备、分装每批动态静态：平均＜1CFU/皿（Ф·0.5hr）动态：平均≤5CFU/皿（Ф·4hr）轧盖每周动态其他房间每月动态C级每月动态静态：平均≤5CFU/皿（Ф90mm·0.5hr）动态：平均≤50CFU/皿（Ф90mm·4hrD级主要房间每月静态静态：平均≤10CFU/皿（Ф90mm·0.5hr）五、污染菌库数据(shùjù)的处理与应用88/92第八十八页，共92页。浮游(fúyóu)菌监测频次及测试状态级别监测频次监测状态判定标准A级（B+A）分装每批在线动态监测＜1其他房间每月动态A级（C+A）每季动态B级每月动态≤10C级每季动态≤100五、污染菌库数据(shùjù)的处理与应用89/92第八十九页，共92页。表面(biǎomiàn)微生物擦拭频次级别监测频次监测点判定标准接触（55mm）（CFU/碟）5指手套（CFU/手套）A级（B+A）每批一位操作人员：双手手套手指、洁服1点；设备3个点A级：＜1B级：≤5A级：＜1B级：≤5A级（C+A）每周A级：＜1C级：≤25A级：＜1C级：不作规定灌装A级（B+A）中间产品制备A级（B+A）每批所有操作人员：双手手套手指、洁服1点；振荡塞1点；灌装机2点；冻干机2点/台A级：＜1B级：≤5A级：＜1B级：≤5五、污染菌库数据(shùjù)的处理与应用90/92第九十页，共92页。五、污染菌库数据的处理(chǔlǐ)与应用污染(wūrǎn)菌库柱状图应用1：为无菌模拟分装(fēnzhuānɡ)验证提供环境菌应用2：为消毒剂效果验证提供环境菌，以确定消毒剂消毒效果及种类91/92第九十一页，共92页。谢谢！JUSTDOIT！92/92第九十二页，共92页。