葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖实验九一、实验目的(1)了解血糖的概念。(2)掌握血糖的测定方法——葡萄糖氧化酶法。血糖的来源、去路血糖水平恒定的生理意义保证重要组织器官的能量供应，特别是某些以葡萄糖供能的组织器官。脑组织不能利用脂酸，正常情况下主要以来葡萄糖供能；红细胞没有线粒体，完全通过糖酵解获能；骨髓及神经组织代谢活跃，经常利用葡萄糖供能。测定方法无机化学法：Folin-Wu法有机化学法：邻甲苯胺法酶法：葡萄糖氧化酶法血糖测定的常用方法HOW？方法类型原理用途及备注磷钼酸法定量G+Cu2+→Cu2O↓稳定、准确、但对（Folin-Wu）分光Cu2O+磷钼酸试剂→蓝色钼化合物葡萄糖无特异性， （430nm） 受血中非糖还原物质的影响。 邻甲苯胺法定量G+邻甲苯胺→蓝绿色的席弗(Schiff)碱较Folin-Wu法特异 （630nm） 但不及酶法。 D-甘露糖能与邻甲 苯胺反应，生成类 似吸收光谱，造成 正误差。（一）化学法 酶法分析是指用酶作为工具定量测定某种物质含量的分析方法。定量分析的目标可以是酶的底物，辅酶，也可以是酶的激活剂或抑制剂。（二）酶法酶法分析的主要方法：单酶反应定量法和偶联酶反应定量法 单酶反应定量法：指用一种酶为工具酶定量测定某种物质的方法。 偶联酶反应定量法：当单酶反应底物或产物反应底物或产物的物理化学手段无法区分时，还可以借助另一种酶作为指示酶，通过偶联反应进行定量分析。 方法类型原理用途及备注 己糖激酶定量G+ATP→G-6-P+ADP血清尿液脑脊液、 （HK）法分光G-6-P+NADP+公认参考方法 动态→GA-6-P+NADPH操作简便，特异 终点 （340nm）性和灵敏性均高 推荐常规方法 葡萄糖氧同上G+O2→GA+H2O2 化酶（POD）H2O2+染料→有色染料 偶联法（还原型）（氧化型）可制试纸片定量（Trinder） （4-氨基安替比林+酚半定量筛选试验 →红色琨类化合物505nm）葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法原理（1）葡萄糖＋O2＋H2O（2）H2O2＋4-氨基安替吡啉＋苯酚葡萄糖酸＋H2O2葡萄糖氧化酶（GOD）H2O＋红色醌式物质过氧化物酶（POD）Trinder反应505nm光吸收法测定相对血糖浓度*方法评价：此方法特异性高、准确、简便，还可用于自动分析仪（1）取3支试管，按下
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加入试剂:实验步骤：充分混匀，37℃水浴中保温20min；冷却至室温后，505nm处比色比色方法：以空白管调零，读取标准管及测定管吸光度值。 试剂 标准管(ml) 测定管(ml) 空白管(ml) 血清样品 – 0.03 – 葡萄糖标准液 0.03 – – 蒸馏水 – – 0.03 酶酚混合试剂 3.00 3.00 3.00（2）计算依据朗伯-比尔定律：A=KLC 血清葡萄糖= （mmol/L） 参考值： 空腹血清葡萄糖浓度:3.89～6.11mmol／L×标准液浓度注意事项： 本法用血量甚微，操作中应直接加标本至试剂中，再吸试剂反复冲洗试管。 此法可直接测定脑脊液葡萄糖的含量，但不能直接用于测定尿液葡萄糖含量。因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，可感染过氧化物酶发硬，造成结果假性偏低。 严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液，然后再进行测定。临床意义：生理性高血糖：摄入高糖食物，情绪紧张病理性高血糖：①糖尿病②内分泌腺功能障碍③颅内压增高④脱水引起高血糖生理性低血糖：见于饥饿和剧烈运动病理性低血糖：特发性功能性低血糖，依次是药源性，肝源性和胰岛素瘤等。 调节血糖水平的激素：胰岛素、胰高血糖素、糖皮质激素和肾上腺素。思考题： 本实验原理为酶促化学反应，为何未加终止剂终止酶的反应？ 本实验涉及显色反应，该反应与血清碱性磷酸酶活力测定中的显色反应有何异同？ 为何不同检测方法所提供的空腹正常血糖参考值存在差异？葡萄糖氧化酶法：3.89~6.11mmol/LFolin-Wu法：4.4~6.7mmol/L邻-甲苯胺法：3.89~6.11mmol/L *方法评价：此方法特异性高、准确、简便，还可用于自动分析仪
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