LacZ染色LacZ阳性显色为深蓝色，其染色的部位为目的基因敲掉的部位，因此是
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基因的定位。比如：Tpbp-Cre小鼠与Rosa-LacZ小鼠交配，通过取材后的LacZ染色就可以知道Tpbp在哪个时间点哪个部位表达。各种溶液的配制方法：0.2%PFA：Stock 25mlPFA（带手套、口罩） 0.05g；咯批0.1MPIPESbuffer 25ml2mMMgCl2 1M 50ul5mMEGTA 0.25M 500ul30%蔗糖：25mlSucrose 7.5g1XPBS 25ml2mMMgCl2 1M 50ulDetergentrinse:0.1MPB（pH7.3） 25ml2mMMgCl2 1M 50ul0.01%sodiumdeoxy 10% 25ul0.02%NP-40 20% 25ulStainingsolution:0.1MPB（pH7.3） 25ml2mMMgCl2 1M 50ul0.01%sodiumdeoxycholate 10% 25ul0.02%NP-40 20% 25ul5mMK3Fe(CN)6 0.5M 250ul5mMK4Fe(CN)6 0.5M 250ulX-GAL 20mg/ml 1.25ml1、切下着床点或胎盘或其他阳性组织（如小肠、肾），放入0.2%的PFA中，4°过夜，然后换成30%的蔗糖过夜（组织沉入瓶底即可）。2、将组织放入OCT中包埋（需准备液氮瓶和包埋的小塑料盒）。3、切冰冻切片，-80°保存。4、取出切片，在室温中静置10min左右。5、切片放入0.2%的PFA中，冰上10min。6、用PBS2mMMgCl2清洗，冰上10minX2次（500mlPBS1ml1MMgCl2）。7、将切片放入detergentrinse中，冰上10min。8、放入stainingsolution（避光），37°过夜。9、在PBS2mMMgCl2清洗，5minX2次。10、分别放入tapwater和dH2O中（前者2-3下，后者数下）。11、依次放入30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、85%乙醇，各20s。12、放入伊红中，2下（将玻片上多余的伊红擦去）。13、依次放入95%乙醇、100%乙醇、100%乙醇、二甲苯、二甲苯，各20s，封片。
浙公网安备 33021202002483