CAD电雾式检测器应用文集

CAD电雾式检测器应用文集中药及天然产物化药生化药物药用辅料食品与化工其他前言液相色谱仪常用检测器主要分为选择性检测器和通用型检测器，其中选择性检测器包括紫外/可见光吸收检测器（UVD）、二极管阵列检测器（DAD）、荧光检测器（FLD）等，通用型检测器主要指示差折光检测器（RI）、蒸发光散射检测器（ELSD）、质谱检测器（MS）等。紫外吸收检测器是目前液相色谱仪中应用最广泛的检测器，它灵敏度高，线性范围宽，但要求被检测样品组分有紫外吸收或衍生后有紫外吸收，属于选择性检测器；二极管阵列检测器是紫外检测器的一个分支，是一种光学多通道检测器，它可以对每个洗脱组分进行光谱扫描，经计算机处理后，得到光谱和色谱结合的三维图谱；荧光检测器同样属于选择性检测器，其灵敏度在目前常用液相色谱仪检测器中是最高的，但要求目标化合物受激发光作用后，能产生发射光，主要适用于能激发荧光的化合物或衍生后能激发荧光的化合物。通用型检测器中，示差折光检测器是一种早期的测定无生色基团化合物的检测器，只要被测组分与洗脱液的折光指数有差别就可使用，其灵敏度较低，对温度变化敏感，并与梯度洗脱不相容；蒸发光散射检测器，是20世纪80年代才研发生产出来的，主要用于检测挥发性低于流动相的样品，而不需要样品含有发色基团，它的响应值与样品的质量成正比，灵敏度比示差折光检测器高，对温度变化不敏感，基线稳定，可用于梯度洗脱，但由于灵敏度和重现性差，使得其应用受到影响；质谱检测器是另一种通用型检测器，在灵敏度、选择性、通用性及化合物的分子量和结构信息的提供等方面都有突出的优点，但它的昂贵操作费用和复杂性限制了它的推广应用。近年来，一款新型的检测器-电雾式检测器（CAD）在液相色谱分析中得到了较好的应用，它属于通用型检测器，是一种新型原理的、高灵敏度、重现性较好的检测器，它基于雾化检测器的原理，洗脱液经雾化后形成颗粒，经过漂移管干燥后与带电氮气碰撞，使得目标化合物带上正电荷，最后，通过静电计测量电荷的量，该测量值与目标化合物的质量成一定比例关系。电雾式检测器基于独特的新型 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 原理，解决了其他检测器设计与原理上的一些局限性，它的检测技术完全不依赖于化合物的分子结构，达到了通用性目的，能对大多数化合物提供一致响应性，同时能达到较高的灵敏度和低检测极限，很容易检测到纳克数量级的化合物，并且与液相色谱分离系统联用，其重现性、稳定性很好，因此能准确的用于定量分析或半定量分析，能检测到大部分非挥发性和半挥发性的有机物。该电雾式检测器自2004年10月一经推出，就相继获得了仪器行业的最高荣誉，获2005年PITTCON“撰稿人”银奖和素有“发明领域的诺贝尔奖”2005年“R&D100”奖。后期又推出了更高型号-CoronaultraRS和CoronaVeo，能更好的兼容HPLC的应用以及完全兼容超高效液相色谱（UHPLC）的应用范围。根据最近几年来国内外公开发 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 的文献，以及本公司开发的应用方法，编写了此文集，期望对相关的科研工作者以及色谱分析工作者有一定的参考与借鉴意义。赛默飞应用中心/市场部2013年4月20号●1●目录第一章电雾式检测器（CAD）设计原理、特点与应用进展...............................4第一节CAD设计原理与特点..................................................................................................................................5第二节电雾式检测器（CAD）应用进展综述.......................................................................................................71.2.1天然产物与中草药的分析.........................................................................................................................................71.2.2制药行业中活性药物成分与对离子分析.................................................................................................................71.2.3糖类与氨基糖苷类化合物测定分析.........................................................................................................................81.2.4表面活性剂、聚合物等化工行业应用分析.............................................................................................................81.2.5其它类型的应用分析.................................................................................................................................................8第二章电雾式检测器（CAD）与CP、BP、USP相关的分析方法....................112.1银杏制剂中银杏内酯的测定......................................................................................................................................122.2快速液相色谱结合CAD检测器测定兽药中的马度米星铵...................................................................................132.3胆汁（猪、羊、牛）中胆汁酸的CAD表征与胆汁酸差异性比较分析...............................................................132.4药用辅料中脂肪酸分析..............................................................................................................................................14第三章电雾式检测器（CAD）应用实例介绍................................................16第一节CAD在中药及天然产物分析中的应用....................................................................................................173.1.1三七药材液相色谱指纹图谱的建立.......................................................................................................................173.1.2电喷雾检测器测定人参皂苷的性能评价...............................................................................................................183.1.3紫杉醇杂质的相对响应因子测定...........................................................................................................................203.1.4青蒿素及其衍生物的检测.......................................................................................................................................21第二节CAD在化药分析中的应用........................................................................................................................233.2.1混合模式分离-CAD联用法分析依替磷酸二钠的检测方法...............................................................................233.2.2盐酸乙胺丁醇片中盐酸乙胺丁醇含量的测定.......................................................................................................233.2.3使用五氟苯基柱分析药膏中硫酸庆大霉素及其相关物质...................................................................................253.2.4高效液相色谱法测定对映体比率...........................................................................................................................263.2.5电喷雾检测器测定抗惊厥类药物...........................................................................................................................273.2.6对乙酰氨基酚纯度测定...........................................................................................................................................283.2.7活性药物成分（APIs）中阴阳对离子的同时测定...............................................................................................28第三节CAD在生化药物中的分析应用................................................................................................................303.3.1酿酒酵母发酵液中甘油含量的测定.......................................................................................................................303.3.2脂质体中磷脂含量的测定.......................................................................................................................................303.3.322种氨基酸的同时直接检测..................................................................................................................................31第四节CAD在药用辅料中的分析应用................................................................................................................34●2●3.4.1混合模式色谱与电雾式检测器测定蛋白药物中的聚山梨醇酯20......................................................................343.4.2非离子型表面活性剂：聚山梨醇酯20，聚山梨醇酯80和TritonX100的检测..............................................35第五节CAD在食品与化工行业中的应用............................................................................................................373.5.1采用HPLC-CAD法直接检测低聚糖.....................................................................................................................373.5.2排阻色谱法分析聚乙二醇.......................................................................................................................................383.5.3阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性离子和非离子表面活性剂的测定...........................................393.5.4采用柱后补偿液相色谱与电雾式检测器分析茶氨酸...........................................................................................423.5.5人造甜味剂Sweet’NLow®的检测......................................................................................................................43第六节CAD其他特色应用资料............................................................................................................................443.6.1对洋地黄毒甙强降解过程中物料平衡评价...........................................................................................................443.6.2生物柴油中甘油及甘油酯的测定...........................................................................................................................45附录一部分应用文献目录.....................................................................................................................................48附录二部分公开发表的文献目录.........................................................................................................................50●3●第一章电雾式检测器（CAD）设计原理、特点与应用进展●4●第一节CAD设计原理与特点CAD检测器是一款新型原理的，高灵敏度，重现性较好的通用型检测器，能准确的用于定量分析或半定量分析，能检测到大部分非挥发性和半挥发性的有机物。电雾式检测器的三款型号，见图1所示。CAD检测器的工作过程：HPLC洗脱液经与雾化器中氮气碰撞作用而雾化，其中较大的液滴经废液管流出，较小的溶质(分析物)液滴在室温下干燥，形成溶质颗粒。同时，用于载气的氮气分流形成的第二股氮气流经过电晕式装置(含高压铂金丝电极)形成带正电荷的氮气颗粒，与溶质颗粒反向相遇时经碰撞使溶质颗粒带上正电。为了消除由带有过多正电荷的氮气所引起的背景电流，在含溶质颗粒的气流流入静电检测计之前，通过一种称之为离子阱的装置（带有低负电压）使迁移率较大的颗粒（即粒度较小的氮气颗粒）的电荷中和，而迁移率小的带电颗粒把它们的电荷转移给一个颗粒收集器，最后用一个高灵敏度的静电检测计测出带电溶质的信号电流。由此产生的信号电流与溶质（分析物质）的含量成正比。���图2电雾式检测器的构造及工作示意图电雾式检测器的分析步骤如下：第一步：雾化与干燥HPLC洗脱液进入电雾式检测器雾化室，在氮气的辅助气下，进行雾化去溶剂，使洗脱液中的目标化合物变成颗粒，颗粒的量的多少与洗脱液中的目标化合物的浓度有关。没有雾化完的大液滴直接进入废液管，雾化完的超细小颗粒进入干燥管，把溶剂蒸发掉。由于在该过程中，颗粒物的粒径很小，因此，蒸发很快。图1电雾式检测器应用文集●5●干燥后的目标化合物颗粒随后随气流直接进入混合腔。因此，和大多数基于雾化原理的检测一样，雾化效率显著受到流动相中的有机相的影响，当有机相比例逐渐增加时，雾化效率增加，响应值也增加，在有机相比例达到80%时，雾化效率趋于稳定。第二步：使目标颗粒物带电另有一路氮气经过高压电晕放电针，变成带正电的氮气，在碰撞室与干燥的目标化合物进行正交碰撞后，带电的氮气裹在了颗粒物表面，把电荷转移给目标化合物颗粒，使目标化合物颗粒物带上电，因此，颗粒物越大，球面积越大，带电量也越多。经过碰撞后，离开碰撞室，迁移速度较快的多余的带电氮气被一个低压离子阱捕集移除，迁移率较慢的多电荷目标化合物颗粒通过离子捕集阱，并撞向一个颗粒物过滤网。第三步：检测带电目标化合物颗粒物颗粒物会撞击到收集器，然后把电荷转移到过滤网上，由此产生的电流会被高灵敏度的静电计测量到。然后，该电信号会被放大输出到检测器上，最终产生的信号强度与目标化合物的量直接成比例。由于在流动相背景中，可以把多余带电的氮气捕集掉，因此，检测器能检测到很少的电荷数，使得电雾式检测器的检出限较低，灵敏度较高。同时，由于电雾式检测器的响应不依赖于化合物的结构，其对大部分的化合物的响应因子也基本一致。而相比蒸发光散射检测器，由于其散射受到化合物的空间结构的影响，即使是同分异构体，同样的浓度其响应值也会出现较大的差异。电雾式检测器的主要特点：１）基于该检测器的设计原理与结构，该检测器总体上灵敏度高，如在分析葡萄糖、蔗糖和乳糖时，能检测到0.5ng的柱上样量；２）响应因子一致，不依赖于化合物结构，重现性非常好，如对24种化合物在相同色谱条件下分别直接进样1µg（不接色谱柱），其响应的峰面积的RSD值仅为10.7%；３）动态检测范围宽，达3-4个数量级；４）应用较广泛，能分析小分子、大分子化合物，如氨基酸、蛋白、聚合物等；５）使用操作直观简单，维护十分简便，工作流速0.2-2.0ml/min，完全兼容UHPLC超快速分析。电雾式检测器使用注意事项：电雾式检测器由于需要对流动相进行雾化，所以当需要使用酸或盐来调节流动相时要使用挥发性的有机酸和有机盐，如甲酸、乙酸和三氟乙酸等，有机盐要使用铵盐；pH值范围建议2-7.5，更高的pH值可能会增加背景和噪音值。●6●第二节电雾式检测器（CAD）应用进展综述电雾式检测器是一款理想的宽范围多类型应用的检测器，从2004年问世以来，应用领域主要集中在药物、蛋白、磷酯类、类固醇类、低聚糖类、表面活性剂类、碳水化合物、聚合物、对离子和多肽类的分析等。主要应用文献及有代表性的分析成果分别体现在以下五个方面，（1）天然产物与中草药的分析；（2）制药行业中活性药物成分与对离子分析；（3）糖类与氨基糖苷类化合物测定分析；（4）表面活性剂、聚合物等化工行业应用分析；（5）其它类型的应用分析。1.2.1天然产物与中草药的分析在天然产物及中草药分析中，由于该类样品所含目标化合物种类繁多，常同时含有紫外末端吸收的化合物和强紫外吸收类型的化合物，因此，很难采用某一类型的检测器，如紫外检测器，进行所有化合物的检测及定量分析。因此，根据电雾式检测器的通用性及响应一致性，对银杏、人参等进行了初步的指纹图谱分析。白长财等[1]利用电雾式检测器建立三七药材液相色谱指纹图谱，通过对三七皂苷类成分的检测分析，与ELSD和UV两种常用的检测器比较，CAD检测器具有较为平稳的基线和较高的灵敏度，更加适用于三七及含有较弱或无紫外吸收成分药材的指纹图谱分析。其次，很多天然产物与中草药的主要成分是萜类、皂苷类化合物，该类化合物通常紫外吸收较弱，因此，适合采用CAD来进行定量检测分析。Liwang等[2]分别用ELSD和CAD方法分析了人参中7种三萜类皂苷化合物，分别为Rg1,Re,Rb1,Rc,Rb2,Rb3和Rd，结果表明：CAD的灵敏度、重现性和线性都优于ELSD，灵敏度高2-6倍，峰面积重现性RSD小于2.5%。HanYoungEom等[3]采用ELSD和CAD分析了紫外末端吸收化合物-柴胡皂苷，是一种三萜类皂甙，共含有10种化合物，并比较了两个检测器的优缺点。分析结果表明，CAD的灵敏度与重现性都优于ELSD。同时，仔细考察了各种色谱条件及试剂等对CAD灵敏度可能造成影响的因子，如缓冲液的浓度、pH值、流动相流速、氮气的纯度和CAD检测值设定范围等。对CAD而言，最好的灵敏度表现是在0.1mM乙酸铵（pH4.0），流速为1.0mL/min，CAD范围为100pA；而ELSD在0.01%乙酸，0.8mL/min流速时表现最佳。氮气的纯度对两者影响都较小，而CAD的灵敏度是ELSD的2-6倍。PingSun等[4]采用高效液相色谱仪UVD与CAD串联的方式对紫杉醇及相关杂质进行了测定，并计算了各个化合物的相对响应因子（RRFs），结果表明，CAD的RRF值更一致。在本实验中，采用等度洗脱条件下，由于CAD峰响应与物质的结构无关，因此采用HPLC-UV-CAD对含有已知和未知杂质的样品进行分析，开发了一种经验方法计算所有杂质的RRFs，已知杂质的RRFs也通过线性校正曲线进行计算。对于已知杂质，比较两种计算方法得到的RRFs值，差异性很小。对于没有 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 品的未知样品，该新方法对于测定未知杂质或降解物的RRFs也是有效的。1.2.2制药行业中活性药物成分与对离子分析在制药行业中，常需要检测和定量活性药物成分及其各种杂质，且在最终的成品药中，常会加入辅料或对离子，有时也需要对其进行定量分析，以保证药品质量，同时，在药物研发过程中，需要进行药物代谢实验及一些药物筛选分析，都可以使用CAD来进行检测与定量。Pistorino等[5]比较了MS、ELSD和CAD对6-deoxyerythronolideB进行定量分析，最终从检出限和分析成本来看，CAD更具有优势，同时，对于双磷酸类药物，采用UV分析，达不到要求，因此，采用Dionex的两性分离色谱柱结合CAD检测器，能同时分析钠离子和双磷酸根，能达到很好的分离和定量要求；ChristopherCrafts等[6]采用两性离子色谱柱结合CAD检测器，同时分离测定了常用药物的对离子等。郭慧丽等利用HPLC-CAD法测定脂质体磷脂膜中各种类脂应用文集●7●的含量，可以快速、高效、准确地检测脂质体中的磷脂及其降解产物的含量。高维等[7]利用CAD检测器测定了盐酸乙胺丁醇片中盐酸乙胺丁醇（EMB）的含量，此方法测定EMB的最低定量限(LOQ)为15µg/mL(S/N=10)，方法回收率>99.84%，因此该方法准确、快速、简便，可用于EMB的测定及其释放度和稳定性研究，对其类似化合物的测定具有参考价值；PeterWipf等[8]采用UV、ELSD和CAD比较了测定手性化合物手性比例值（Er值），由于ELSD的非线性响应，紫外检测器不能检测没有紫外吸收的化合物，因此推荐使用CAD检测器测定手性体的Er值，得到较好的结果，也更接近于实际真值。ChristopherCrafts等[9]在药物代谢安全测试（MIST）中，按照2008年USFDA的指导准则要求，对人体代谢和药物代谢尽可能的进行半定量的分析，通常在该类分析中采用LCMS或LCMSMS进行定量和定性分析，但仅采用LCMS进行定量的测定往往有困难。因此有时，采用UV检测器对MS进行一个互补的检测手段，但这依赖于药物目标化合物和其代谢产物的化合物结构中是否有紫外吸收官能团。因此，ChristopherCrafts等在实验中采用UltiMate3000液相色谱（配DAD检测器），并串联CAD检测器（型号为ConoraUltra）和LTQOrbitrap质谱仪（ThermoScientific），测定了丁螺环酮（有较强的紫外吸收）和红霉素（较弱的紫外吸收）两种药物的代谢产物分析，并进行了比较，其中丁螺环酮的代谢物有5种代谢物，线性范围为4-124ng，采用同样的方法对红霉素及其4种主要代谢物进行了分析，紫外210nm都没有吸收，而CAD在红霉素100µM时，各代谢物均有响应，并根据峰面积值计算了4种代谢物相对峰面积响应值，进行了半定量分析。BrianForsatz等[10]在Schering-Plough研究院采用HPLC接CAD检测器对USFDA规定的清洁生产验证进行了相关探索性分析，对于制药行业来说，清洁验证是一个主要的分析应用部分，采用CAD和采用UV比较而言，CAD具有更多的优点，尤其对于没有生色基团的化合物，同时，对于很多没有紫外吸收的辅料，CAD也能达到准确定量，能保证生产设备干净无残留。1.2.3糖类与氨基糖苷类化合物测定分析糖类与氨基糖苷类化合物的共同特点是强极性，在ODS柱上没有保留，另外，它们均没有紫外吸收。因此，采用氨基柱或HILIC柱进行分离，电雾式检测器进行定量，取得了较好的分离度与较低的检出限。Ward等[11]对单糖及脱水酸酐的分析研究表明，在生物质燃烧中，常产生左旋葡聚糖，大部分是采用衍生成三甲基硅烷酯后用GC或GCMS分析，近来也有采用ESIMS分析，或离子色谱-PAD分析，而HPLC-CAD可以直接分析，不需要衍生和浓缩步骤等；ShinsukeInagaki等[12]采用HPLC-CAD直接分析了低聚糖类，采用氨基柱分离，测定了SGP糖，检测限达到0.40pmol(S/N=3)，该方法灵敏度虽然低于FLD检测器，但是是UVD的5倍左右，同时，还能不需要衍生同时测定单唾液酸糖和去唾液酸糖等。RoyW.Dixon等[13]采用强阳离子交换柱，用纯水洗脱，分析了左旋葡聚糖和其他脱水单糖，方法的检测限约为90µg/ml。1.2.4表面活性剂、聚合物等化工行业应用分析表面活性剂与聚合物材料在现代化工业中应用广泛，但由于其成分复杂，缺乏相应的标准品物质，同时，由于大部分处于紫外末端吸收，因此，很多分析工作者采用电雾式检测器进行了检测分析，取得了较理想的结果。DawenKou等[14]采用SEC与CAD结合分析了PEG类表面活性剂化合物及其二聚体杂质，结果表明，比较RI、ELSD和CAD的分析结果，CAD更为准确。聚合物分析中，Takahashi等[15]在SFC上，比较了CAD和ELSD用于测定PEG的分子量分布，结果表明：CAD的重现性远好于ELSD，CAD的S/N也更高，因此，CAD可以用于合成的多聚体的检测。1.2.5其它类型的应用分析TanjaVehovec等[16]比较了CAD与其他三种非紫外检测器-ELSD和RI，结果表明CAD的优点在于响应因子更一致，灵敏度更高，动态范围更宽，因此，采用一个通用的标准物质，可以对其他化合物及有关物质进行定量。同时，由于雾化效果受到有机相的影响，可以采用反梯度进行解决，对HPLC、UHPLC和●8●SFC都适用。同时综合介绍了CAD已经被用于制药、化学品、食品、消费品行业以及生命科学研究领域，它们包括非挥发性的和半挥发性的，中性的、酸性的、碱性的和两性的化合物，以及极性的和非极性的化合物（如磷脂类、蛋白类、类固醇类、聚合物类、糖类以及多肽等）；曹海龙等[17]建立了高效液相色谱法-电雾式检测器检测酿酒酵母发酵液中甘油含量的方法，色谱柱采用ShodexAsahipakNH2P-504E，流动相采用乙腈-水(体积比为75：25)，最低检出限达到10ng，回收率99.06～99.10%，相对标准偏差1.38～4.87％，该方法简便、快速、准确，可用于酿酒酵母发酵液中甘油的测定。还有其他一些应用可以在CAD的产品主页上查到（http://www.esainc.com/products/type/hplc_systems/detectors/coronacad），如发酵液中的磷霉素纯化与分析，生物柴油中的甘油三酯类分析，磷酸二钠盐药物类分析，化合物主成分与有关物质分析，磷酯类分析，不饱和脂肪酸；天然产物（如皂甙类）、表面活性剂类等。参考文献：[1]白长财,柴兴云,王海龙,等.利用电雾式检测器建立三七药材液相色谱指纹图谱，中国药学杂志，2009,10:54-55.[2]LiWang,Wen-ShunHe,Hai-XiaYan,etc.PerformanceEvaluationofChargedAerosolandEvaporativeLightScatteringDetectionfortheDeterminationofGinsenosidesbyLC.Chromatogr.2009,70:603-608.[3]HanYoungEom,So-YoungPark,MinKyungKim,etc,.Comparisonbetweenevaporativelightscatteringdetectionandchargedaerosoldetection,Journalofchromatography.A.06/2010;1217(26):4347-54.[4]PingSun,XiandeWang.LoriAlquier,etc,.DeterminationofrelativeresponsefactorsofimpuritiesinpaclitaxelwithhighperformanceliquidchromatographyequippedwithultravioletandchargedaerosoldetectorsMaryanoffJournalofChromatographyA,2008,1177(1):87-91.[5]M.Pistorino,B.A.Pfeifer,Anal.Bioanal.Chem.390(2008)，1189.[6]ChristopherCrafts,BruceBailey,MarcPlante.UseofChargedAerosolDetectionasanOrthogonalQuantificationTechniqueforDrugMetabolitesinSafetyTesting(MIST),http://www.dionex.com/en-us/webdocs/110510-PO-HPLC-Drug-Metabolites-21Nov2011-LPN2953-01.pdf[7]高维,方平飞,李焕,等.HPLC-CAD法测定盐酸乙胺丁醇片中盐酸乙胺丁醇的含量，中南药学，2009,5:338-340.[8]PETERW,STEFANW,LESLIEA.HPLCDeterminationsofEnantiomericRatios,CHIRALITY19:5–9(2007).[9]ChristopherCrafts,BruceBailey,MarcPlante,etc,.EvaluationofMethodsfortheSimultaneousAnalysisofCationsandAnionsUsingHPLCwithChargedAerosolDetectionandaZwitterionicStationaryPhase,JournalofChromatographicScience,Volume47,Number7August2009,534-539.[10]BrianForsatz,NicholasH.HPLCwithChargedAerosolDetectionforPharmaceuticalCleaningValidation,LCGCNorthAmerica,September2007.[11]T.J.Ward,R.F.HamiltonJr.,R.W.Dixon,M.Paulsen,C.D.Simpson,Atmos.Environ.40(2006)7005.[12]ShinsukeInagaki,JunZheMin,ToshimasaToyooka.Directdetectionmethodofoligosaccharidesbyhigh-performanceliquidchromatographywithchargedaerosoldetection，Biomed.Chromatogr.21:338–342(2007).[13]RoyW.DixonW,GregorB,.Determinationoflevoglucosaninatmosphericaerosolsusinghighperformanceliquidchromatographywithaerosolchargedetection，JournalofChromatographyA,1109(2006)214–221.[14]DawenKou,GeraldManiusa,ShangdongZhana.SizeexclusionchromatographywithCoronachargedaerosoldetectorfortheanalysisofpolyethyleneglycolpolymer.JournalofChromatographyA,Volume1216,Issue28,10July2009,Pages5424-5428.[15]KayoriTakahashi,ShinichiKinugasa,MasaakiSenda,etc.Quantitativecomparisonofacorona-charged应用文集●9●aerosoldetectorandanevaporativelight-scatteringdetectorfortheanalysisofasyntheticpolymerbysupercriticalfluidchromatography,JournalofChromatographyA,Volume1193,Issues1-2,6June2008,Pages151-155.[16]TanjaVehovec,AlesObreza.Reviewofoperatingprincipleandapplicationsofthechargedaerosoldetector,JournalofChromatographyA,1217(2010)1549–1556.[17]曹海龙,朱豫,李曙光,等.高效液相色谱法-电雾式检测器测定酿酒酵母发酵液中甘油的含量，分析仪器，2009,12(1):27-29.●10●第二章电雾式检测器（CAD）与CP、BP、USP相关的分析方法应用文集●11●2.1银杏制剂中银杏内酯的测定方法简介：银杏内酯化合物属于萜类化合物，由倍半萜内酯和二萜内酯组成，是银杏叶中一类重要的活性成分。对于银杏内酯的分析，因其紫外吸收弱，多采用HPLC-ELSD方法（见图3）。中国药典2010版方法中流动相采用非常规溶剂正丙醇-四氢呋喃-水，但正丙醇的沸点接近100℃，挥发性差，容易导致CAD检测器噪音增加。本实验改进了此方法，采用HPLC-CAD方法，流动相是常规反相色谱溶剂甲醇和水，改善了上述缺点（图4）。分析条件：分析柱：Acclaim120C18，5μm4.6×150mm(P/N:059148)柱温：35℃CAD检测条件：雾化温度：35℃流动相：A：甲醇；B：水，梯度条件见表1流速：0.8mL/min表1改进后的梯度条件时间(min)A(%)B(%）02773103070153565223565图3采用药典流动相银杏内酯ELSD色谱图（5μL）图4采用甲醇-水流动相银杏内酯在CAD检测器上色谱图（1μL）表2CAD与ELSD检测银杏内酯灵敏度比较检测器峰名信噪比（S/N）检测器峰名信噪比（S/N）CAD银杏内酯C864.1ELSD银杏内酯C111.2白果内酯448.0白果内酯191.7银杏内酯A767.5银杏内酯A166.9银杏内酯B694.8银杏内酯B96.1方法结论：本试验优化了中国药典2010版中测定银杏制剂中银杏内酯含量色谱条件，并采用CAD测定了其含量，可获得比ELSD检测器更好的灵敏度、重现性，并且降低了银杏内酯对照品的需求量，大大降低银杏制剂中测定色谱条件的复杂性，提高了方法的适用性，降低了检测成本。在信噪比方面，相同浓度标准进样相同体积，分别在CAD检测器和ELSD检测器上比较，结果显示，CAD检测的灵敏度至少比ELSD高2倍（见表2）。因此，对于药品中杂质检测，CAD检测可获得更好的灵敏度。参考文献来源：2012-APP-RLC-035-液相色谱-电喷雾检测器测定银杏制剂中银杏内酯（内部资料）0.05.010.015.020.025.030.035.038.0-5.00.010.020.030.040.045.0对照品1mVmin0.02.04.06.08.010.012.014.016.018.020.022.025.0-2.05.010.015.020.025.0STD_1.0pAmin银杏内酯C银杏内酯C白果内酯白果内酯银杏内酯A银杏内酯A银杏内酯B银杏内酯B0.05.010.015.020.025.030.035.038.0-5.00.010.020.030.040.045.0对照品1mVmin0.02.04.06.08.010.012.014.016.018.020.022.025.0-2.05.010.015.020.025.0STD_1.0pAmin银杏内酯C银杏内酯C白果内酯白果内酯银杏内酯A银杏内酯A银杏内酯B银杏内酯B●12●0.8741.2443.278pA0.005.0010.0015.0020.0025.0030.0035.0040.0045.0050.00分钟0.001.002.003.004.005.006.007.008.00pA-0.200.000.200.400.600.801.001.201.401.601.802.00分钟0.001.002.003.004.005.006.007.008.00马度米星铵马度米星铵0.8741.2443.278pA0.005.0010.0015.0020.0025.0030.0035.0040.0045.0050.00分钟0.001.002.003.004.005.006.007.008.00pA-0.200.000.200.400.600.801.001.201.401.601.802.00分钟0.001.002.003.004.005.006.007.008.00马度米星铵马度米星铵2.2快速液相色谱结合CAD检测器测定兽药中的马度米星铵方法简介：《中国兽药典》2010版采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)，甲醇-0.02mol/L醋酸铵溶液为流动相，常规C18色谱柱对马度米星铵进行测定。本实验采用UPLC-CAD检测器对马度米星铵进行测定，实验结果表明马度米星铵在CAD检测器上有较好的响应，进样精密度、稳定性都较好，其中灵敏度和稳定性较兽药典中蒸发光散射检测器方法相比具有明显优势，同时分析时间大大缩短。并且CAD操作简单，设置参数少，稳定性较好，受环境影响因素少。该检测器完全可以满足马度米星铵的测定。分析条件：分析柱：WatersBEHC18,1.7μm2.1×100mm柱温：30℃进样量：3μLCAD检测条件：氮气压力35.0psi流动相：甲醇-0.02mol/L醋酸铵（85:15）流速：0.3mL/min参考文献来源：2012-APP-RLC-006-HPLC-CAD法检测马度米星铵（内部资料）2.3胆汁（猪、羊、牛）中胆汁酸的CAD表征与胆汁酸差异性比较分析方法简介：本方法采用CAD检测器，以胆汁水解后常见的六种胆汁酸成分，运用HPLC方法分析了猪胆粉、羊胆图5样品测定谱图图6检出限测定谱图（浓度10ppm，进样2µL，s/n6.94）粉与牛胆粉的差别，中国药典2010版方法中为紫外192nm测定，为末端吸收，灵敏度低，杂质对主成分干扰较大。采用CAD检测分离度和灵敏度均较高，为猪胆粉的质量控制、胆粉的来源鉴别提供了一种有效的方法。分析柱：AcclaimSurfactant,5um4.6×150mm柱温：35℃电雾式检测器（CAD）：型号：CoronaUltra雾化温度：35℃，采集频率：5Hz进样量：5µL流动相及梯度条件见表3，标准品测定谱图见图7表3流动相及梯度条件时间(min)CH3CN(%)0.5%HAc(%)流速（mL/min）045550.92745550.927.190100.93590100.935.145550.94545550.9应用文集●13●结果参考：动物胆粉中含有的胆汁酸都不具有紫外吸收的生色团，因此只能在低波长检测。低波长检测的缺点是干扰大、噪音高、漂移严重，这类化合物的检测恰恰是CAD这类质量型检测器的优势。因此选择CAD检测器进行检测可以获得比紫外检测器更好的灵敏度（如图7）。将样品注入液相色谱仪，以比较各种来源胆粉之间胆汁酸的差异（图8）。方法结论：本方法采用CAD检测器能够对胆汁酸成分取得灵敏度较高的检测，与紫外检测器相比有较明显的优势。本方法所采用的AcclaimSurfactant色谱柱是一种硅胶基质的带有专利键合相的色谱柱，在相同条件下分析酸性物质可取得比常规C18更佳的分离与峰形。参考文献来源：2012-APP-RLC-023胆汁（猪、羊、牛）中胆汁酸的CAD特征的表征与胆汁酸差异性比较分析（LC-CAD）（TheCADinstrumentisfortrialpurposestoassesitssuitabilityforroutineuseinUSPlaboratories.）2.4药用辅料中脂肪酸分析方法简介：混合脂肪酸是一种常见药用辅料，作为栓剂等制剂的载体，其应用符合医药“低毒、高效”的基本发展原则和民众医疗保健的意愿，近年来发展较快。脂肪酸紫外吸收弱，用传统UV方法无法检测，本实验采用HPLC-CAD方法检测辅料中的常见脂肪酸取得了较好的分析结果。分析条件：色谱柱：PRP-1,7µm4.1×250mm(Hamilton)流动相：乙腈-四氢呋喃-60mM醋酸溶液=60:5:35,15min内变化到90:10:0流速：1.0mL/min柱温：45℃进样量：25µL电雾式检测器（CAD）：型号：CoronaUltra；雾化温度：15℃图7六种胆汁酸UV与CAD检测比较图（1、UV210nm色谱图；2、CAD色谱图）图8不同来源胆粉色谱图（1对照品；2猪胆粉；3羊胆粉；4牛胆粉）0.02.55.07.510.012.515.017.520.022.525.027.0-2050100150200胆酸混标CAD_1UV_VIS_1mAUmin21WVL:210nm0.02.55.07.510.012.515.017.520.022.525.027.0-2050100150220胆酸混标Sample_猪胆水解Sample_羊胆水解Sample_牛胆水解pAmin43211234567STD_STD_胆酸混标STD_胆酸混标211234●14●结果参考：图9辅料中脂肪酸分析图谱表4辅料中脂肪酸分析结果供试品中组分名称保留时间min峰面积pA*min塔板数Plates分离度Resolution拖尾因子USPTf月桂酸LauricAcid6.4630.886130708.111.11肉豆蔻酸MyristicAcid8.50010.771151536.861.06棕榈酸PlasmaticAcid10.59722.388159891.811.09油酸OleaticAcid11.21322.478167943.911.07硬脂酸StearicAcid12.54320.81822488n.a.1.05方法结论：本方法使用CAD检测器结合Hamilton的一款色谱柱，对多种脂肪酸同时进行分析，分离度高，色谱峰形好，有较高实用价值。参考文献来源：2013-APP-LC-039CAD检测器分析药用辅料中的脂肪酸（TheCADinstrumentisfortrialpurposestoassesitssuitabilityforroutineuseinUSPlaboratories.）0.0-2.0020Current[pA]4060801001202.55.07.5LauricAcidMyristicAcidPlasmaticAcidOleaticAcidStearicAcidCAD_110.012.5时间[min]15.017.520.022.525.0应用文集●15●第三章电雾式检测器（CAD）应用实例介绍●16●第一节CAD在中药及天然产物分析中的应用3.1.1三七药材液相色谱指纹图谱的建立方法简介：指纹图谱对中药的质量控制具有整体性、客观性的特点。目前对三七药材及其制剂的指纹图谱研究已有大量的报道，方法大多为HPLC-UV，少数为HPLC-ELSD。UV检测器适用于有紫外吸收的化合物的检测，但对皂苷等只有末端吸收的化合物的检测不理想，并且在梯度洗脱时容易造成基线漂移。虽然ELSD对皂苷、糖等化合物的检测灵敏度高于UV，但对低含量成分检测时重复性较差。本文利用HPLC电雾式检测器联用技术，建立了三七