HIV艾滋病抗体实室检测方法HIV上岗证培训

主要(zhǔyào)内容HIV检测一般情况：窗口期、检测样本及 流程 快递问题件怎么处理流程河南自建厂房流程下载关于规范招聘需求审批流程制作流程表下载邮件下载流程设计 关于样本实验室操作：采集、处理、检测、转运常用(chánɡyònɡ)筛查方法第一页，共24页。艾滋病检测(jiǎncè)意义艾滋病：影响人类健康的全球性灾难我国艾滋病的流行形势也日趋严峻据估算，我国大约只有10%艾滋病病毒感染者被发现，其余90%处于未知状态，这对相关的预防(yùfáng)、治疗和关怀工作带来极大挑战要找到尚未发现的感染者，实验室检测工作必不可少第二页，共24页。感染(gǎnrǎn)HIV后的血清学变化HIVRNA浓度(nóngdù)抗体(kàngtǐ)感染1周2周6周12周-年第三页，共24页。窗口期窗口期：机体感染HIV到能检出抗体之间的时期第三代HIV抗体检测试剂盒能使大部分感染者在4-8周后检测出HIV抗体如果到12周（即3个月）仍检测不出抗体，基本可以排除HIV感染，对抗体检测呈不确定反应或高危行为后高度怀疑有感染危险者，可再随访3个月后复检。必要时可做HIV-1p24抗原或HIV核酸检测作为(zuòwéi)辅助诊断第四页，共24页。检测样品：血液、组织液、排泄物、组织、器官、精液(jīngyè)以及有关血液制品、生物组织或其它物品等进行艾滋病病毒HIV或其相应标志物的实验室测定，包括HIV分离、抗原检测、核酸检测和抗体检测等目前用于HIV诊断的常规方法为血液中HIV抗体检测，我国目前检测血液中HIV抗体的常规检测程序分为筛查试验（包括初筛和复检）和确认试验第五页，共24页。HIV抗体(kàngtǐ)筛查实验流程图样本(yàngběn)阳性反应一阴一阳阴性反应筛查检测(jiǎncè)均阳性反应重复检测均阴性反应送确认实验室进行确认阴性 报告 软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载 筛查试剂原有试剂加另外一种筛查试剂第六页，共24页。设备(shèbèi)要求主要仪器设备包括生物安全柜、离心机、酶标读数仪、洗板机、移液器、温箱/水浴箱、冰箱、高压蒸汽灭菌器所用的仪器应该校准，每次使用(shǐyòng)后应做 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 为保证人员安全，实验室内的耗材最好使用(shǐyòng)塑料制品第七页，共24页。标本(biāoběn)要求1．种类：血清或血浆(肝素、枸橼酸钠或EDTA抗凝)。2．量：静脉血2ml，常规分离血清或血浆。3.3000转／分离心10分钟。4．保存：分离后7d之内测定的血清或血浆标本(biāoběn)可放置于28C保存，超过7d在-20C保存。第八页，共24页。试剂(shìjì)要求我国规定HIV抗体筛查试剂必须是：HIV-1/2混合型经国家(guójiā)食品药品监督管理局注册批准批批检合格在有效期内推荐使用临床质量评估敏感性和特异性高的试剂（）第九页，共24页。常用(chánɡyònɡ)筛查方法目前，国内常用的HIV抗体筛查试验方法有：酶联免疫吸附试验（ELISA）颗粒(kēlì)凝集试验　（PA）快速试验第十页，共24页。双抗原(kàngyuán)夹心法原理固相包被抗原待测抗体（IgG、IgM）酶标记抗原底物第十一页，共24页。试剂盒组成（双抗原(kàngyuán)夹心法ELISA）酶标板型阳性(yángxìng)对照型阳性(yángxìng)对照阴性对照酶标试剂6.浓缩洗涤液7.显色剂A液8.显色剂B液9.终止液第十二页，共24页。操作程序-1阅读 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 操作程序，严格按照试剂说明书操作将试剂盒及样品放置在室温半小时以上1）准备酶标板，小心撕去酶标板条上的封条(fēngtiáo)2）配液：将50ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释至1000ml备用。3）编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照3孔、阳性对照1型,2型各1孔、空白1孔。4）加样：分别在相应孔中加入加入100μl待检样品及阴、阳性对照、外部质控对照。第十三页，共24页。操作程序-25）温育：用封板膜封板后置37±1℃温育60±1分钟。6）洗涤：小心(xiǎoxīn)将封板膜揭掉，使用洗板机吸干孔内液体，用洗涤液洗涤5遍，拍干。7）加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。8）温育：用封板膜封板后置37±1℃温育30±1分钟。9)洗涤：小心(xiǎoxīn)将封板膜揭掉，使用洗板机吸干孔内液体，用洗涤液充分洗涤5遍，最后一次尽量拍干。。第十四页，共24页。操作程序-310）显色：每孔加入显色剂A、B液各50μl，轻轻振荡混匀，用封板膜封板后置(hòuzhì)37±1℃避光显色30±1分钟。12）测定：每孔加终止液50μl，轻轻振荡混匀，设定酶标仪波长于450nm处（建议用双波长检测，可不设空白），在15分钟内测定各孔OD值。13）用酶标仪测定OD值，打印结果第十五页，共24页。实验结果(jiēguǒ)判断（1）检查阴性对照和阳性对照的OD值是否符合要求，判断本次实验是否成立，并计算cutoff值结果判定:1.阴性对照的正常范围：正常情况(qíngkuàng)下，阴性对照孔OD值≤。2.阳性对照的正常范围：正常情况(qíngkuàng)下，阳性对照孔OD值≥。3.临界值（CUTOFF）计算：临界值=阴性对照孔OD均值。第十六页，共24页。实验结果(jiēguǒ)判断（2）4.阳性判定(pàndìng)：样品OD值≥临界值（CUTOFF）者为HIV抗体阳性（注意：初试阳性标本应重新取样进行双孔复检，复试阳性者应按“全国HIV检测管理 规范 编程规范下载gsp规范下载钢格栅规范下载警徽规范下载建设厅规范下载 ”送HIV确证实验室进行确证实验）。5.阴性判定(pàndìng)：样品OD值＜临界值（CUTOFF）者为HIV抗体阴性。第十七页，共24页。质控要求(yāoqiú)一.室内质控：1.在每次HIV实验中必须包含内部(nèibù)对照质控血清（试剂盒配套质控）:HIVI抗体、HIV2抗体阳性质控、HIV阴性质控及外部对照质控血清（自制或购买）。2.所有质控品与标本同时加入HIV试剂的微孔板内，最终质控结果符合实验要求，则实验结果可报告；否则应重新检测标本。第十八页，共24页。检测过程(guòchéng)中的问题及对策第十九页，共24页。ELISA实验所有(suǒyǒu)的孔均无色漏加阳性对照(duìzhào)酶标记物失效底物失效：应避光保存酶联板抗原失效第二十页，共24页。ELISA实验所有(suǒyǒu)的孔均显色洗板不彻底，孔内残留未结合的酶标记物。容器不清洁，有残留物质：酶受污染。底物失效，在加入之前(zhīqián)就已经显色。第二十一页，共24页。HIV抗体筛查检测及报告(bàogào)程序1.筛查（-）出具“HIV抗体阴性”报告2.筛查（+）复检：原有试剂＋另外一种不同原理（或厂家(chǎnɡjiā)）试剂或另外两种不同原理（或厂家(chǎnɡjiā)）试剂1）两种试剂均阴性：报告“HIV抗体阴性”2）一阴一阳或两种均阳性：出具“HIV抗体待复检”报告，不能出阳性报告，应送确证实验室。第二十二页，共24页。谢谢(xièxie)大家！第二十三页，共24页。内容(nèiróng)总结主要内容(nèiróng)。据估算，我国大约只有10%艾滋病病毒感染者被发现，其余90%处于未知状态，这对相关的预防、治疗和关怀工作带来极大挑战。必要时可做HIV-1p24抗原或HIV核酸检测作为辅助诊断。送确认实验室进行确认。1．种类：血清或血浆(肝素、枸橼酸钠或EDTA抗凝)。1）准备酶标板，小心撕去酶标板条上的封条。5.阴性判定：样品OD值＜临界值（CUTOFF）者为HIV抗体阴性。谢谢大家第二十四页，共24页。