中药药理实验方法学

null 药理学实验基础知识 药理学实验基础知识 开课目的：培养科学思维方法，严肃的科学态度，提高 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 问题解决问题的能力。掌握基本实验操作技能和实验方法，为今后科学研究打下基础。 要 求：工作服、仪器领取、卫生打扫、动物处理。 null 实验动物分类： 按种系分三种情况 A、按遗传学控制方法分为4类：近交系动物、突交系动物、F1杂种动物、封闭群动物。 B、未经遗传学控制的杂种动物。 C、按微生物学控制方法分5类：无菌动物、悉生动物、无特殊病原体动物、清洁动物、普通动物。 null 我国将实验动物分为四级： 一级动物：普通动物（CV）---普通自然环境中饲养繁殖的健康带菌动物。（教学和一般实验用） 二级动物：清洁动物（CL）---用于一般动物实验，除一级标准外，还需要不带有动物传染病病原体。 null 三级动物：无特殊病原体动物（SPF），在CL基础上还需不带有干扰实验的微生物。 按纯系动物的要求进行繁殖，在隔离器内或层流室内饲养，只有一些不致病的细菌丛，没有致病的病原体。 null 四级动物：无菌动物（GF）和悉生动物（GN）。 GF：全封闭无菌条件下饲养的纯系动物，体内不带任何微生物和寄生虫（包括绝大部分病毒）； GN：要求在无菌动物体内植入一种或数种已知的微生物。 三、四级动物要求高，价格贵，适用于特殊目的和要求的实验。 null实验动物的选择： a.选对与人的机能、代谢、结构、疾病特点和机能反应相近似的实验动物。药物的反应与人的反应相似的动物。 b.选用遗传背景明确，模型指标显著且稳定，解剖、生理特点符合实验目的的实验动物。 nullnullNIH小鼠 BALB/c小鼠 远交系小鼠，国际上广泛通用的实验动物，已选为某些生物制品检定的法规动物。 近交系小鼠，毛色黑色；补体活性高；较易诱发免疫耐受性；对结核杆菌敏感；干扰素产量高。是肿瘤学、生理学、免疫学、遗传学研究常用的品系。 nullC57BL/6J小鼠：近交系小鼠，乳腺肿瘤发生率低，但对致癌因子敏感。肺癌发病率雌性26％，雄性29％。对放射性照射极为敏感。用于肿瘤学、生理学、免疫学、核医学和单克隆抗体等研究。 BALB/c-nu裸鼠 ：无毛，裸体，T淋巴细胞缺损，可研究免疫功能和病毒细菌寄生虫感染机制等。 nullSD大鼠Wistar大鼠 nullＳＤ大鼠：远交系大鼠， 对呼吸道疾病抵抗力强，对性激素刺激性高，多用于生理、营养、安全性试验。 　 Wistar大鼠：远交系大鼠，抗病力强，自发性肿瘤发病率低，多用于肿瘤、免疫、药理、内分泌。 null 豚 鼠　　对各种致病菌和病毒敏感，对组胺类药物有高度敏感性，自身不能合成维生素，易于过敏，耳蜗管对声波敏感，缺氧耐受性强，血清中补体丰富，皮肤对毒物刺激敏感等。 null 新西兰兔 家 兔血清量较多，胸淋巴结明显，耳血管粗大，诱发性排卵，眼球大，发热反应典型恒定，对许多致病菌和病毒敏感，颈部神经血管和胸腔适合做急性心血管实验 ，皮肤对刺激反应敏感等。 nullnull Beagle犬nullnull 果 蝇 蚕null 猴null 小鼠：常用于药物筛选、急性毒性实验。价格便宜，繁殖周期短，易得。（18~22g） 大白鼠：常用于抗关节炎实验、利胆实验、子宫实验、长期毒性实验（150~200g） null 豚鼠：研究平喘药和抗组胺药常用，对组胺特别敏感。毒理学中过敏实验（300~500g） 家兔：常用于观察药物对呼吸、心脏、血管、肠肌运动的影响，热源检查、解热实验；雌兔用于避孕药研究和子宫实验。（1.5~2.5Kg） null 犬：常用于慢性实验如高血压、胃瘘、肠瘘、冠脉流量，还有长期毒性实验。 其他动物：鸽子、蛙类、果蝇、蚕、猴、猫、鸭等。 null 分组方法： 分层分组法---按性别、体重、测定指标（如基础体温、痛阈）先分层，再分组； 随机数字表法：按随机数字表来分组。 编号：标记常用苦味酸（3%~5%）、中性品红（0。5%）、硝酸银（2%）；方法见书，较大的动物如犬、猫等，可用号码牌挂在动物颈部或将特制的铝牌固定在耳壳上。 null 取血方法： 小鼠、大鼠---①断尾、②眼底（内眦球后静脉丛，小鼠可取0.2~0.3cc,大鼠可取0.5~1cc)、③断头、颈动脉取血。 兔--①耳缘静脉，②心脏，③股动脉 犬--①后肢外侧小隐静脉，②前肢背侧皮下头静脉，③耳缘静脉 豚鼠--①耳缘切割，②心脏穿刺。 null 常用抗凝剂 ①草酸钾 饱和液2滴于试管中，80度以下烘箱烘干，可抗凝3~5ml血液。若测定钾、钙含量的不用。 ②肝素 1%肝素0.1ml于试管中，80~100度烤干，可抗凝5~10ml血液 ③枸橼酸钠 3.8%枸橼酸钠1份，可抗凝9份血液。 血压实验用5~7%的枸橼酸钠抗凝。 实验 报告 软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载 或 论文 政研论文下载论文大学下载论文大学下载关于长拳的论文浙大论文封面下载 的书写实验报告或论文的书写 实验报告格式： 题目、目的、材料、方法、结果（表或图）、讨论、结论。 论文书写格式 题目、文摘、关键词、序、实验材料、方法、结果（表或图）、讨论（含结论）。参考文献 常用动物的捉拿和给药方法常用动物的捉拿和给药方法捉拿 小鼠、大鼠、豚鼠的捉拿方法基本一致。家兔抓背部皮肤，另一只手托起臀部。狗用狗头夹夹住颈部后再抓。 null给药： 途径--口服或灌胃、皮下注射、肌肉注射、腹腔注射、静脉注射。 静脉注射：家兔（耳缘静脉）、狗（后肢小隐静脉）、豚鼠（后脚掌外侧的静脉或颈外静脉） null 给药剂量： 根据单位体重给药。 处死和处理方法处死和处理方法小鼠、大鼠、豚鼠：颈椎脱位法处死。 兔、狗、猫：静脉注射空气（10~30ml）致死。 实验完毕后，动物按要求处死，送到指定地点焚烧。没有焚烧条件的，用袋子装好，送至指定垃圾站。 影响中药药理作用的因素影响中药药理作用的因素 三大因素：药物因素、机体因素、环境因素 药物因素---品种、产地、采集时节、贮藏、炮制、制剂（剂型）、不同入药部位 机体因素---年龄、性别、体质、情志、病理状态、个体差异（种族、高敏、耐受、特异质、肠道微生物环境等） 环境因素---气候、季节、时辰。为减少差异，应注意：为减少差异，应注意： 鉴定品种、一次性计算出实验用药物量后购买药物进行制剂加工（排除品种、产地、采集时节、贮藏、炮制、制剂等带来的影响）选择和临床用药一致的剂型（给药途径）（排除因给药途径不同导致的差异--生物利用度不同）。 选择年龄相同、批次相同、性别体重均衡的动物，遵循随机分组的原则，减少动物带来的差异。 动物连续给药时每天应在基本相同的时间进行。 药效学研究注意事项药效学研究注意事项 新药申报资料中，和药理学实验内容相关的是药效学和毒理学两大项内容。 药效学：药物对机体的作用研究。按新药研究指南的要求，根据功能主治来设计实验项目。 null注意点： ①主要指标确定，按新药指南要求或咨询药审中心确定。 如抗癌中药研究 ②模型的选择：有文献依据、符合中医临床“证”的模型，方法要注意体内、体外相结合。null体外：重复性好，用药量少，节省动物。但干扰因素多。 体内：结果接近临床，必须做。 原则---体内、体外实验相结合。 ③ 药品： 品种鉴定（赤芍）、稳定工艺，现在要求用中试产品。量的问题。 null④ 剂量：一般设三个剂量 低剂量--临床等效量 中剂量--临床等效量的2倍 高剂量--临床等效量的4倍 剂量换算剂量换算 按人和动物的体表面积折算的等效剂量比值换算 小白鼠（20g）：人用量*0.0026*50 大白鼠（200g）：人用量*0.018*5 按“每公斤体重占有体表面积相对比值”换算 小鼠：人用量*1（小白鼠比值）/0.08（50Kg人的比值） 大鼠:人用量*0.47（大白鼠比值）/0.08（50Kg人的比值） null临床常用剂量折算法nullnullnull ⑤ 组的设置 一般设6个组：空白组、模型组、模型+小剂量组、模型+中剂量组、模型+大剂量组、模型+阳性对照组。 阳性组设置的目的：检验实验方法是否正确、比较同类产品的优劣。 阳性药：功效主治和实验药物一致，剂型尽量一致；必须是药典记载的、公认的疗效确切的药物。 null⑥数据处理 药理实验数据必须进行统计学处理。实验数据分为计量资料和计数资料。 null 计量资料：尿量、时间、次数、心率、血压等 计数资料（发生率）：死或活、惊厥或不惊厥、翻正反射消失或不消失、扭体或不扭等 。 不同资料统计方法不同，现在多用统计软件包处理。 结果： P>0.05,说明两组间无显著性差异 P<0.05,说明两组间有显著性差异 P<0.01,说明两组间有非常显著性差异 举例:黄南星搽剂 药理实验设计三原则 --随机、对照、重复药理实验设计三原则 --随机、对照、重复 随机分组-----将受试样本随机遇而分组，以减少主观因素的影响和避免偏性误差。 对照：组间对照、自身对照 重复：实验的重复。如条件不允许，可增加每组的样本数。 null 一般药理学研究： 神经系统：行为、流涎、肌颤、瞳孔、自发活动等； 心血管系统：血压、心率、心电图。 呼吸系统：呼吸的频率、深度。 剂量---选用产生主要药效作用的2~3个剂量。区别毒理学实验的剂量。 毒理学研究主要内容毒理学研究主要内容急性毒性实验 实验目的：观察药物一次性给药对动物带来的毒性和死亡情况。 通常测定半数致死量。如果求不出（毒性低），可测最大给药量。 半数致死量---指一群动物中半数动物死亡的剂量。 计算方法：比利氏法、孙氏改良蔻氏法等。最大给药量测定方法最大给药量测定方法 合格动物(小白鼠)分成2批，第一批分2组，药物组和对照组，药物组用最大浓度、最大体积给药，2~3次/24小时。第二天停药，连续7天，观察小鼠的体重、行为、分泌物、毛色及死亡情况。如有动物死亡，尸检肉眼观察并与对照组小鼠进行比较。必要时做组织学观察。 为何要观察7天？有可能是代谢产物中毒或迟发性中毒，几个小时看不出毒性。 结论：把一日累计量除以人临床用量求出相当于临床人用量的多少倍。null慢性毒性实验 实验目的：观察动物因连续用药对机体造成的损害、中毒开始的时间及停药后组织受损的发展和恢复情况。 实验动物：大白鼠（啮齿类）、犬（非啮齿类）。国际上要求大鼠要SPF级，犬用Beagle。 大鼠：5~6周龄；犬：6~12月龄。均雄、雌各半。 分组：低、中、高剂量组、对照组。（大鼠为每组至少20只，犬、猴为雌雄各3~6只） null给药时间：临床疗程的2~3倍。最长不超过半年。 给药途径：同临床给药途径。 观察指标：末次给药24小时后，处理一批动物。 ①一般观察：体重、进食量、外观、行为活动、粪便性状、分泌物（眼、鼻、肛门等），计算脏器系数。 脏器重量 脏器系数= 体 重 null②血液检查 血常规 血液生化 血常规：Hb、RBC、WBC、Pt、白细胞分类、凝血酶原时间。 血液生化：天门冬氨酸氨基转换酶、丙氨酸氨基转换酶、碱性磷酸酶、尿素氮、总蛋白、白蛋白、血糖、总胆红素、总胆固醇、肌酸磷酸激酶、甘油三酯等。还可测Na+、Cl-、K+浓度。 null③系统尸解和病理组织学检查 测量脏器系数 病理切片：心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、甲状腺、胸腺、睾丸、附睾、前列腺、卵巢、子宫、脑、胃、肠等。 附报告、照片。null 可逆性观察（恢复期） 第一批动物处理后，停止给药，继续饲养观察，半个月或一个月后处死，观察指标同第一批鼠。把第二批检测指标和第一批检测指标进行统计对比，可看出停药后损害的恢复和发展情况。 犬的长毒：检测指标多一个心电图。 特殊毒理研究--刺激性、过敏性实验特殊毒理研究--刺激性、过敏性实验皮肤用药：急毒、长毒、刺激性实验、过敏性实验。动物用兔或豚鼠。 黏膜用药：眼刺激性实验。用兔。 滴鼻剂、吸入剂：毒性和刺激性实验，用豚鼠或大白鼠。 直肠、阴道给药：毒性和刺激性实验。用兔或大白鼠。（药物接触至少4小时，观察24小时、48小时段全身症状和局部刺激） 三致--致畸、致癌、致突变 三致--致畸、致癌、致突变 基因突变实验 致突变 染色体畸变实验 啮齿动物微核实验null 微生物回复突变试验 基因突变实验 哺乳动物培养细胞基因突变试验 果蝇伴性隐性致死试验 null 哺乳动物培养细胞染色体畸变试验 染色体畸变实验 啮齿类动物显性致死试验 精原细胞染色体畸变试验 null 啮齿动物微核试验 啮齿动物微核试验 程序外DNA合成试验 SOS显色反应 null 一般生殖毒性 生殖毒性 致畸敏感期毒性试验 围产期毒性试验 null 哺乳动物培养细胞恶性转化实验 致癌试验 短期致癌试验 动物短期致癌实验 动物长期致癌试验：大鼠2年，小鼠1.5年 nullnullnullnull