血痕检验

第一章血液及血痕检验第一节概述一、血痕检验血痕（bloodstains）血痕是最常见的物证检材，血痕检验是法医物证检验中最常遇到和最重要的检验项目,血痕检验约占法医物证检验的80%左右。凡在现场（凶杀、斗殴、抢劫、盗窃、碎尸、灾害事故等）、致伤物、衣物（受害人与嫌疑人）上发现的可疑血液或血痕均涉及血痕检验。（1）血痕的定义:血液在人体外干燥后所形成的斑迹称为血痕。（2）血痕存在的启示：血痕的存在，多数情况下表示有人受伤。在伤害或凶杀案件的现场以及相关的物品上大多数都会遗留下血痕。根据现场血痕的分布、形状等情况，可以推断案件的性质，分析案件属于他杀、自杀或者是因灾害事故。在凶杀案件中，现场血液或血痕可提示被害人死亡原因、案件发生的时间和地点，可以分析罪犯和被害人之间的相互位置关系，有无搏斗过程等重要线索。犯罪嫌疑人身上、可疑凶器和其他物体上沾有被害人的血液，常为重要物证。因为搏斗或越墙、爬窗、破门时受伤，在现场和被害人的身上可能遗留罪犯的血痕，对案件的侦破极为重要。（3）血痕的特点：血液一旦离开人体，就面临外界物理、化学以及生物学因素的作用和影响。血液的降解、污染和腐败过程十分迅速。离开机体的时间越长，血液成分的改变越大。尤其是大分子的抗原蛋白质和DNA破坏会增加血痕个体识别的难度。所以血痕的检验方法比临床检验复杂，比新鲜血液检验更加困难。血痕越陈旧，检验的阳性率越低。因此及时发现和提取血痕，立即检验极为重要。二、血痕检验的目的和要求血痕检验需要解决以下问题：提取和送检的可疑斑痕是否是血痕。血痕是人血还是动物血。确定人血后，检测血液的遗传标记，进行个体识别。其他检验，如血痕的性别、出血量、出血时间及出血部位推断等。血痕检验的一般顺序为：肉眼检查；预试验；确证试验；种属鉴定；遗传标记测定；其他检验等。三、肉眼检查现场的血痕可因雨淋、日晒而变淡，凶器上或衣服上的血痕又可被洗涤而难以辨认。另一方面，许多有色物质，如油漆、颜料、酱料、泥土等又可在衣物上形成暗褐色斑痕，易与血痕混淆。深色衣物上的血痕易被疏忽遗漏，因此必须在现场仔细寻找，认真观察可疑斑痕。对可疑血痕存在的部位、颜色、形态及范围等必须详细记录、绘图、照相或录像。血痕的部位现场勘察主要是观察血痕分布的位置、数量以及血痕存在的部位。（1）室内：仔细检查地面、墙面、门窗、家具、蚊帐、被单、枕套、席子床板以及其他物品，注意在砖缝、锁扣、门栓等处隐藏部位寻找，应检查水龙头、水勺、面盆、水缸、毛巾上的可疑血痕。尤其在移动过的人及物品现场，注意冲洗后遗留下的微量血迹或血印痕。（2）室外：血痕可粘附在树叶、草叶上，呈有光泽的暗红色斑，易辨认。若血液渗入泥土中，则难以辨别，此时应将可疑斑痕连同周边无斑痕处的泥土整块取出送检。（3）伤者、死者或犯罪嫌疑人：检查伤者、死者或犯罪嫌疑人时应注意观察不易发觉或难以清除的部位，如毛巾上、指甲缝里、衣服皱褶、衣袋袖口、钮扣孔、鞋边等。血痕的颜色新鲜血痕的颜色呈暗红色，有光泽，随后逐渐变暗色、褐色或灰褐色。根据血痕干燥程度和颜色，可以大概推测血痕形成时间。血痕的形状血痕的形状往往与出血者的体位、行走方向及出血部位等有关。（1）血滴的形状受血滴滴落的高度和方向的影响:从0.1m以内的高度落在地面时血滴呈圆滴状。血滴边缘基本光滑或稍带锯齿状。从0.5m高度落下时，血滴边缘呈明显的锯齿状。从1m高度落下时，血滴边缘呈放射状，周边有溅出的逗点状或线条状小血痕。非垂直滴落时，锐角侧边缘光滑，钝角侧呈锯齿状或有溅出的小血痕。受伤后行走中滴落的血滴为一边呈锯齿状的圆形或椭圆形血滴，锯齿状边缘的方向为伤者行走的方向。动脉受伤，形成喷射溅状血痕；大量血液喷射到墙上可形成流注状血痕。静脉出血时，往往出现流注状血痕。此外还有擦拭状血痕、血印痕、血泊等。血痕的范围血痕的范围一般取决于出血量，但有时因混有尿液、唾液等使血痕范围扩大，根据血痕的大小可估计出血量。出血量常与死亡及受伤后存活时间等有关。详细的肉眼检查可发现许多重要的线索。在实验室对送检血痕还要进行仔细的肉眼检查，因为有良好的光线和附加设备，可能找到在现场未发现的新斑痕，获得新线索。必须强调，肉眼检查以及后续的所有实验室检查，不能用手触摸检材，以免检查者自己手上的汗液造成交叉污染，使实验结果的解释复杂化。四•血痕预试验(bloodstainpreliminarytest)概述预试验目的：预试验是一种筛选试验，目的是要从大量的可疑血痕中筛除不是血痕的检材。很多斑痕外观上与血痕相似，如油漆、酱油、染料、铁锈、蔬菜和果汁斑。通过预试验，可排除这类非血痕检材。预试验的方法：预试验的方法很多，多数是测定血痕中血红蛋白或其衍生物的过氧化酶活性，达到筛查血痕的目的。因为过氧化酶在自然界广泛存在，因此预试验阳性反应仅表示可能是血，而不能肯定是血。血痕预试验的特点：几乎所有的血痕预试验，均具有灵敏度高、操作简便、快速的特点。血痕预试验的意义：血痕预试验的意义在于阴性结果，阴性结果可以否定血痕。预试验阳性反应仅表示可能是血，而不能肯定是血。联苯胺试验(benzidinetest)联苯胺试验是迄今最常用和最灵敏的血痕预试验。原理：利用血痕中的血红蛋白或正铁血红素具有的过氧化物酶活性，使过氧化氢释放出新生态氧，将无色联苯胺氧化为联苯胺蓝。方法：剪取或刮取微量检材置于白瓷反应板上，或用滤纸轻擦斑痕。依次滴加冰醋酸、联苯胺无水乙醇饱和液各1滴。1-2min后无蓝色反应，再加3%过氧化氢1滴，立即出现蓝色为阳性反应。若不出现蓝色，为阴性反应。特点：灵敏度高，血液经过稀释50万倍，试验仍可能呈阳性结果。意义：联苯胺试验阴性结果可以否定是血痕检材，阳性反应仅表示可能是血，而不能肯定是血。注意：联苯胺试验有两类干扰物质，一是氧化剂，例如高锰酸钾、重铬酸钾、铁锈和镍盐等，能直接将联苯胺氧化为联苯胺蓝，呈现蓝色反应。但氧化剂造成的蓝色反应出现在未加入过氧化氢之前，所以要求实验时必须按上述次序滴加试剂。另一类干扰物质是生物源性物质如某些植物、蔬菜、水果等，本身含有过氧化酶使试验出现阳性反应。人体液如脓液、鼻涕或有些组织浸液，细菌如大肠杆菌等也含有过氧化物酶或具有过氧化酶活性的物质，亦能使联苯胺试验呈阳性。因此阳性结果只能说明检材可能是血痕，不能肯定为血痕。联苯胺试验的意义在于阴性结果，阴性可以否定血痕，除非血痕中的血红蛋白或其衍生物已经彻底被破坏。如果是血痕，联苯胺试验阴性说明血痕已经彻底破坏，后续的所有检测已经失去检测条件。联苯胺能够破坏血痕，不能再进行后面的检测，因此试验时不要将试剂直接滴在衣服或其他检材的斑痕上。联苯胺是致癌物，检测时应加强自我防护。血痕确证试验（bloodstainconclusivetest）（一）确证试验的概述目的：确证检材是否为血，主要依据是检测检材中是否含有血红蛋白或其衍生物。阳性结果可确证检材为血痕。特点：确证试验灵敏度一般都不太高，检材有真菌生长、细菌污染、或经过洗涤、雨淋、日晒后，确证试验往往呈阴性反应。因此确证试验阴性结果时，可继续作种属试验，因为常规的抗人血红蛋白血清沉淀反应的灵敏度比确证试验高。防止因确证实验的灵敏度低而漏检了血痕。（二）血色原结晶试验（高山结晶试验Takayamacrystaltest）原理：红蛋白在碱性溶液中分解为正铁血红素和变性珠蛋白。在还原剂作用下，正铁血红素还原为血红素，同变性珠蛋白和其他含氮化合物（如吡啶、氨基酸等）结合形成血色原结晶。方法：剪取或刮取少量检材，置载玻片上，用针分离成细纤维，盖上盖玻片，加1~2滴高山试剂，室温下静置10min后镜检。出现樱桃红色星状、菊花状或针状结晶，即为阳性。不出现结晶，为阴性反应。特点：特异性好，目前未发现任何其他物质，经过同样处理，能形成樱桃红色结晶。缺陷是灵敏度低，血液经过稀释200倍就难以得到典型的血色原结晶，阴性结果没有意义。经过水洗，雨淋或变性、腐败、陈旧的血痕阳性率低。高山试剂久置易失效，每次试验时应强调，作已知血痕的阳性对照。结晶形成的速度和结晶的形态大小与血液浓度有关。意义：阳性可以肯定是血痕。种属鉴定（一）概述当可疑斑痕确定为血痕后，应确定其种属来源，明确血痕是人血还是动物血，必要时还需确定是哪种动物血。血痕的种属试验是血痕鉴定的一个关键，因为动物血中含有某些与人血液遗传标记类似的物质，如A及B抗原；若不进行种属鉴定，直接测定血痕的ABO血型，可误将动物血判断为人血，造成错案。即使采用DNA分析作个人识别，仍必须确定血痕是人血后才能做DNA分型检测。血痕种属鉴定有许多方法，包括血清学方法、细胞学方法、分子生物学方法及生物化学方法。以血清学的沉淀反应最为简便实用。（二）沉淀反应（precipitationreaction）原理：沉淀反应是一种经典的免疫反应。可溶性抗原与相应抗体发生特异性结合后，当抗原抗体比例适合时可形成肉眼可见的抗原抗体复合物沉淀。血痕浸出液中的可溶性蛋白抗原，称为沉淀原，抗人血清或抗人血红蛋白抗体称为沉淀素。抗原抗体比例适当是沉淀反应的关键。如果抗原过剩，不利于抗原抗体复合物之间交联，不易形成稳定的抗原抗体复合物晶格，不出现沉淀反应。如果抗体过剩，游离抗原决定簇迅速被大量的单个抗体分子结合，抗原抗体复合物之间也难交联形成大的抗原抗体复合物晶格，表现为弱沉淀反应。反应中抗原过剩的阻滞称为后滞，抗体过剩的阻滞称为前滞。后滞比前滞更为多见。因此，作沉淀反应时，通常稀释抗原而不稀释抗体，并以抗原的稀释度作为抗体的效价。抗血清的种类血痕的种属鉴定常采用人的血红蛋白和人的血清蛋白免疫动物而获得相应的抗血清，即抗人血红蛋白血清和抗人血清蛋白血清。抗体的质量直接关系到种属鉴定的结果是否准确可靠，要求抗血清要效价高，至少在1万倍以上，与已知人血痕浸出液应在15min内出现阳性反应。抗血清的特点：要求抗血清具有种属和器官特异性。（1）种属特异性指抗体只对某一物种的组织、细胞、血清、体液、或分泌液发生特异反应的特性，而对其它种属动物的蛋白均不发生反应。抗人血清蛋白抗体、抗人血红蛋白抗体都具有种属特异性。（2）器官特异性指抗体只对某一器官成分发生特异反应，与其他器官蛋白均不发生反应的特性。例如抗人血红蛋白血清既具有种属特异性，又具有器官特异性。与动物蛋白不发生反应，与人体除血液以外的其他任何组织也不发生反应。（3）交叉反应抗体除与诱发其产生的相应抗原发生反应外，与其它的抗原也发生交叉反应。因此，用人的血红蛋白免疫动物而得到的抗体也有不同程度的交叉反应。（三）抗人血红蛋白胶体金试验胶体金法是一种免疫层析技术，用该技术进行种属试验，具有灵敏度高、操作简便的特点。原理：胶体金由金化合物制备而成，带负电荷，可作为抗体染料结合物。胶体金将抗体免疫球蛋白吸附在表面，形成一种标记了该种免疫球蛋白的“探针”，用此“探针”可以结合相对应的抗原。此种由抗体标记后的胶体金称为免疫胶体金。胶体金颗粒自身呈红色，当免疫胶体金颗粒结合对应的抗原后，再与抗原相应的抗体结合，免疫胶体金颗粒便被滞留而富集，出现肉眼可见的红色，据此判断阳性或阴性的结果。免疫层析胶体金试剂条是将所有反应物均固定在硝酸纤维素膜上，反应利用膜的毛细作用原理。试剂条分为加样区、反应区和吸附区三部分。加样区贴有一层有免疫胶体金颗粒的玻璃纤维膜。反应区有两条反应线：一条为检测线，包被有检测抗原的抗体，如抗人Hb抗体；一条为质控线，包被有抗免疫球蛋白抗体，能检测标记胶体金的免疫球蛋白抗体。吸附区将加样区和反应区层析扩展上来的剩余免疫胶体金颗粒吸附于其中，以提供层析的动力。方法：取少量血痕样本用蒸馏水浸泡，使浸泡夜微带黄色（淡稻草黄）。取出试纸条，在加样区（S）加3~5滴浸出液或将试纸条的加样区（S）浸于待检样本的浸泡液中5~10s,静置3~5min观察结果：反应区中的检测线和质控线出现两条红色区带为阳性结果。只有质控线显现红色区带为阴性结果，无带出现表明可能操作失误或试纸条失效，应重复测试（四）DNA检验1.根据Alu序列作种属鉴定哺乳类动物细胞DNA有一中度重复序列，重复单位长约300bp。其中在170bp附近有限制性内切酶Alu切割的AGCT序列，命名为“Alu”家族。Alu序列为人和灵长类所特有，具有种属特异性。对血痕检材用PCR扩增Alu家族进行检测，可作为种属鉴定。检测方法有斑点杂交及PCR扩增后电泳检测两种方法。引物序列：Alu9.15'-GGCACTTTGGGAGGCCAAGG-3'Alu9.25'-TACAAGCTTGTGCCACCATGCCCAAC-3'反应体系：含有10~100ng 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DNA,0.2pmol/L两种引物，200pmol/LdNTPs,1UTaqDNA聚合酶，50mmol/LMgCl2,10mmol/LTris-Hcl。(3)扩增产物的检测：扩增产物在2%琼脂糖凝胶中电泳，人可获得DNA长度为130bp的特异性条带。牛、大鼠、蛙、鲫鱼等的扩增片段大于130bp,且扩增产量非常少。除猴血外，其他动物均无扩增产物。2•根据28SrRNA序列鉴定种属人类rRNA由60s和40s大小的两个亚基构成，其中60s又由28s、5.8s和5s三个亚基组成。大部分28srRNA编码序列的区域进化缓慢，相对保守，但保守区中的可变区进化较快，种属之间差异较大。针对这一区域进行PCR扩增，可获得人和动物有差异的特异性片段。(1)引物序列：引物A:5'-ATCTAGTAGCTGGTTCCCTC-3引物B:5'-CCTCTAATCATTCGCTTTAC-3'(2)反应体系：含有10~100ng模板DNA,0.2pmol/L两种引物，200pmol/LdNTPs,1pTaqDNA聚合酶，50mmol/LMgCl2,10mmol/LTris-Hcl。（3）扩增产物的检测：扩增产物在8%聚丙烯酰胺凝胶中电泳，人类DNA扩增片段为108、104、101及99bp，主要产物为99bp，不同动物PCR扩增产物长度不同。细胞色素b基因序列进行种属鉴别细胞色素b基因位于mtDNA上，是一个具有种属差异的遗传标记，几乎所有的生物检材都可检验。由于mtDNA拷贝数远多于核DNA，检测的灵敏度较高。人和其他哺乳动物的细胞色b基因片段均存在AluI酶切位点，但酶切片段大小不同，可区分人与其他哺乳动物。（1）引物序列：引物1：5'-CATCGACCTTCCAGCCCCATCAAACAT-3'引物2：5'-TGTTCTACTGGTTGGCCTCCAATTCA-3'.（2）反应体系：含有10~100ng模板DNA,0.2pmol/L两种引物，200Umol/LdNTPs,1UTaqDNA聚合酶，50mmol/LMgCl2,10mmol/LTris-Hcl。（3）扩增产物的检测:PCR扩增产物经琼脂糖凝胶检测，可见一条981bp长的DNA片段。扩增产物用两种限制酶切割（AluI、NcoI）,酶解产物用6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，用银染色方法显现酶解片段。人类与动物酶切片段大小不同。七、血痕的个人识别检材确证为人血后，应测定血痕中的遗传标记进行个人识别。选择血液遗传标记应遵循以下原则：具有良好的遗传多态性。较稳定。检测方法已 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 化、简便快速、结果重复性好。目前检测血痕遗传标记的主要障碍是血痕质量问题，当检材保存不当或被水浸泡，其中的蛋白质和DNA严重降解，遗传标记被破坏；或有大量真菌或细菌生长，会丧失分型检测的条件。(一)血痕的ABO血型测定ABO血型抗原对高温、腐败有相当的耐受性，而且抗原性很强、很稳定，可以在血痕中保存相当长时间。ABO血型物质不仅红细胞上有，其他人体组织细胞也存在ABO抗原，这些特征在法医物证检材的个体识别中具有重要实际意义。ABO血型是法医物证检验中个人识别的传统检测项目。血痕红细胞血型测定方法与临床血型测定不同，常用方法有吸收试验，解离试验等.吸收试验(absorptiontest)又称吸收-抑制试验(absorption-inhibitiontest)(1)原理：血痕中A、B、H血型物质。能与相应的抗-A、抗-B、抗H抗体发生特异性的结合，使抗血清中的游离抗体减少或消失，不能再与相应的A、B、O型指示红细胞发生凝集反应。若血痕中无某种ABH抗原，则不能抑制抗血清中的相应抗体，抗体与相应的指示红细胞会发生凝集反应，其反应的强度没有变化。根据抗血清在与血痕吸收反应前后的效价改变情况，可推断血痕所含的血型抗原种类，判断血痕的ABO血型。(2)方法：取血痕3块，大小1cmx0.5cm，剪碎，置于试管中，分别加效价为16-32的抗-A、抗-B、抗-H血清各0.1ml。与检材充分混合后，置49冰箱吸收12~24h。离心取上清液测定吸收后的抗体效价。以检材无血痕部份作为阴性对照，用已知人A、B、O型血痕作为阳性对照。结果判断：检材无血痕部份吸收后抗体效价不降低，而待测血痕吸收后抗体效价比空白检材低3级或3级以上为阳性。综合抗-A、抗-B及抗-H血清试剂吸收的级数，判断血痕中所含的ABH抗原，确定血痕的ABO血型。特点：吸收试验是测定血痕ABO血型抗原的经典方法，结果稳定可靠，但是要求检材量较多。检材太少，易出现假阴性结果。吸收试验的抗血清效价宜用16~32，若检材量少和陈旧血痕，抗血清效价宜用8~16。抗血清效价太高，可能被抗原吸收不全，导致假阴性。有些血痕基质对抗血清试剂有非特异性吸收作用，试验时必须取无血痕部位基质作对照。解离试验(elutiontest)又称吸收■解离试验(absorption-elutiontest)(1)原理：血痕中的A、B、H抗原能与相应的抗A、抗-B、抗-H抗体发生特异性的结合反应。这种特异性结合是可逆的，569加热后，血痕上抗原结合的抗体可以解离下来。用已知的A、B和O指示红细胞检测解离液中抗体。红细胞出现凝集者为解离试验阳性，红细胞不凝集者为解离试验阴性。综合反应结果可判断血痕的ABO血型。(2)方法：剪取血痕纤维3段，长各0.5cm，甲醇固定10min，挥干后分别置3支小试管中，分别加效价为64的抗-A、抗-B、抗-H血清，室温放置30-60min。生理盐水洗涤数次，分别加0.1%浓度的A、B和0指示红细胞悬液1滴，置于569温箱5-10min后，除去血痕纤维，悬液稍离心，倾倒于载玻片上，镜检。镜下红细胞凝集者为阳性反应；不凝集者为阴性反应。以检材无血痕部分作为阴性对照，已知A、B、0型血痕作为阳性对照。只有当对照的结果正确时，才能对检材的结果作出判断。(3)特点：实验灵敏度高，检材用量少，适用微量血痕的血型测定；实验所需时间较短，实验所需设备简单。实验操作技术和经验要求较高，其中洗涤 步骤 新产品开发流程的步骤课题研究的五个步骤成本核算步骤微型课题研究步骤数控铣床操作步骤 是关键，洗多容易出假阴性；洗少容易出假阳性结果。抗体效价应高于1：64。必须设置已知A和B型血痕对照。选择对照血痕时应注意与检材血痕浓度相当、时间相近、基质相同。(二)血痕的DNA分析血痕个人识别主要用STR基因座分型，其次为序列多态性如HLA-DQa、PM及mtDNA等的检测。血痕的DNA分析目前已成为常规技术，技术的关键在于DNA的提取。1.DNA提取(1)DNA的提取方法：主要采用有机法和Chelex-100法。①有机法：A•基本提取步骤：剪碎血痕，置于1.5ml离心管中，加400训提取缓冲液(10mmol/LTris，10mmol/LEDTA，10mmol/LNaCl，39mmol/LDTT，2%SDS)及10pl蛋白酶K(20mg/ml),569过夜加500训酚/氯仿/异戊醇的混合液(25:24:1)，抽提蛋白质，用冷乙醇沉淀DNA，再用70%乙醇洗涤。弃去乙醇，沉淀干燥,再溶于TE缓冲液或无菌蒸馏水中。B.特点：提取的DNA纯度较高，2Chelex-100法：A.基本原理：Chelex-100是一种化学螯合树脂，由苯乙烯、二乙烯共聚体组成。含有成对的亚氨基二乙酸盐离子，能螯合多价金属离子，尤其是选择性螯合二价离子，比普通离子交换剂具有更高的金属离子选择性和较强的结合力，能结合许多影响PCR扩增反应的抑制物，并防止DNA在煮沸时被降解，同时在高温低离子强度下，还有催化DNA释放的作用，减少了DNA的损失。B•提取步骤：剪取1cm血痕纤维两根，放入200训5%Chelex-100液中，379水浴过夜，第二天取出放检材的离心管，置加热模块上1009加热10min,取出放离心机上离心，10000rpm,10min，取上清备用。C•特点：提取方法比较简单，提取模板DNA纯度较差，仅适用于PCR。DNA的纯化血痕及其它法医物证检材中常有杂质存在，可抑制PCR扩增。常见的杂质有深色染料、苯胺染料及正铁血红素等。在PCR扩增反应液中加入小牛血清蛋白等，可消除血红蛋白衍生物、染色染料等的影响。现场收集的法医物证检材，可能污染有各类影响进一步DNA检测的物质，有时需要纯化模板DNA。DNA纯化的方法：1氯仿、酚和异戊醇提取后的液相，再用饱和正丁醇水溶液提取一次，过滤纯化，用灭菌蒸馏水洗3次；②用离子交换色谱法纯化DNA纯化后只是去除了不能与DNA结合的杂质。血痕DNA的分析主要用STR基因座分型，其次为序列多态性如HLA-DQa、PM及mtDNA等的检测进行个人识别。血痕的性别鉴定测定血痕性别也是血痕个人识别的重要内容之一，常给案件侦察提供非常有价值的证据。一旦确定性别，即为个体识别提供了50%的否定率。判定血痕性别可检查X和Y染色质，也可测定性激素，或用DNA分析。前两种方法难免有误判，而后一种方法结果可靠，是目前主要鉴别血痕性别的方法。DNA分析包括：丫染色体特异性探针杂交技术，丫染色体特异性酶切片段，PCR扩增丫染色体特异性片段，PCR扩增X、Y染色体特异性片段等。目前主要采用同时扩增X、丫两条染色体的特异性片段，丫染色体特异性片段。(1)牙釉基因(amelogenin，AMG)牙釉基因位于X染色体Xp22，编码牙原基质牙釉质蛋白，故名牙釉基因。在人丫染色体中心粒附近有一类牙釉基因(amelogenin-likeAMGL)，与牙釉基因的碱基序列有90%的同源性。用一对特异性引物可同时扩增AMG和AMGL序列片段，X特异性片段长977bp，丫特异性片段长788bp。引物：AMXY-1F5/-CTGATGCTTGGCCTCAAGCCTGTG-3/AMXY-2F5/-TAAAGAGATTCATTAACTTGACTG-3/结果：扩增后男性可得到977bp和788bp两条带；女性只观察到977bp一条带。此法只需一对引物，使性别检验可靠、方便、快速。但是其扩增产物较长，不适合腐败血痕、过于陈旧血痕的性别鉴定。通过设计引物，缩短引物间距，扩增出更短的片段，可以克服此类缺点。(2)ZFY/ZFX基因ZFY基因位于丫染色体短臂，它编码一种锌指状蛋白；ZFX基因位于X染色体上，与ZFY基因有同源序列。设计三个引物同时扩增Y染色体及X染色体特异性的ZFY基因和ZFX基因的DNA片段来确定性别。位于Y染色体的ZFY基因片段长340bp，位于X染色体的ZFX基因片段长488bp。因此女性只有—条488bp的谱带，男性有340bp和488bp两条谱带。①引物序列：ZFXY5/-ATTTGTTCTAAGTGCCATATTCTCT-3/此引物为ZFX和ZFY基因二者同源序列通用的引物。ZFY35/-CATCAGCTGAAGCTTGATGACACACT-3/此引物为ZFY基因3/端特异DNA序列。ZFX35/-AGACACACCTACTGAGCAAAATGTATA-3/此引物为ZFX基因3/端特异DNA序列。该方法用三个引物在同—体系中—次检验X、Y两条性染色体。结果准确无假阴性。(3)扩增丫染色体特异DNA片段针对Y染色体特异性片段设计的鉴定性别的引物有数对。由于为Y染色体特有，必须同时扩增男女共有的片段作为对照，故常用人类Alu片段作对照。Alu片段长度为130bp，扩增结果：男性具有丫染色体特异扩增条带和Alu带；女性只有Alu带；无Alu带为扩增失败。常用的Y染色体特异DNA片段有DYZ1。DYZ1序列是Y染色体长臂异染色质区3.4kb的重复序列，在丫染色体上拷贝数为5000。1引物：引物对1Y1.15/-TCCACTTTATTCCAGGCCTGTCC-3/Y1.25/-TTGAATGGAATGGGAACGAATGG-3/引物对2Y1.35/-AATACCCTACATTCCCTTCCA-3/Y1.45/-ATGGAAATTGTATGCAGTAGA-3/②结果：丫1.1、Y1.2扩增的片段长154bp的DNA片段；Y1.3、Y1.4扩增产物为102bp的DNA片段。一般情况下，同步扩增Amelogenin基因座及ZFX/ZFY基因座，扩增片段小于300bp，鉴定性别是十分可靠的，无论男、女检材均可以得到有效扩增和分型，一般不出现假阴性结果。仅扩增Y特异性片段的方法不宜作为鉴定检材性别的首选方法，有异议时应同时检测2个或2个以上的基因座鉴定性别，只有结果一致时，才可做出结论。八、血痕的其他检验（一）出血部位的判定血痕检验中，判定出血部位有重要意义。但单纯血痕难以判断出血部位，只有血痕中混有组织细胞时，根据细胞形态特征判断是何种组织细胞，籍以推测出血部位。检验时，可利用种属试验中盐水浸液的残渣，涂片染色镜检。鼻出血时可见纤毛柱状上皮细胞，偶见鼻毛；口腔出血可见扁平上皮细胞，有时可见食物残渣；肺出血可见纤毛柱状上皮细胞及口腔扁平上皮细胞；胃出血可见食物残渣、胃粘膜及口腔上皮细胞；内脏损伤出血含有脏器及组织碎片，镜检时可见脏器特有的细胞；阴道出血可见阴道上皮细胞，偶见阴道滴虫、包皮垢干菌；月经血可见子宫内膜细胞、阴道或宫颈鳞状上皮细胞。因女性生殖器出血也可见这些细胞，故判断是否月经血常需用其他方法 证明 住所证明下载场所使用证明下载诊断证明下载住所证明下载爱问住所证明下载爱问 ，如检验纤维蛋白降解产物及纤溶酶活性等。（二）出血量的测定出血量的测定有助于判断尸体所在的现场是否原始现场或推测死前挣扎的时间等。测定方法如下：1.重量计算剪取含血检材与无血检材各一块，大小相等。室温干燥后，再放入干燥器内，使呈恒量，准确称量每块的重量，两者相差就是干血量。由于鲜血变为干血的重量比率是1000:211,则血量计算 公式 小学单位换算公式大全免费下载公式下载行测公式大全下载excel公式下载逻辑回归公式下载 为：血量二干血量x1000/211。计算血痕的总面积为剪下血痕面积的多少倍，则总出血量二血量x倍数。2.分光光度计测定法将一定大小的干血痕溶于定量蒸馏水内，陈旧血痕可用1-5mol/L氢氧化钾溶解。取1ml血痕浸液于吸收管底部，加入砒啶-氢氧化钠溶液（砒啶100ml,10%氢氧化钠30ml，蒸馏水加至300ml）3ml，用小玻璃棒搅匀，便形成氧化砒啶-血色原，这是较稳定的化合物。再加过量固体硫代硫酸钠，便形成还原血色原，该物质不稳定，只存在5-10min,在波长557.5nm或540nm测定光密度,根据预先制好的结晶血红素标准曲线查得结晶血红素克数。用系数25.2乘以结晶血红素克数便得1ml斑痕浸液的血红蛋白克数。再乘浸液总量（ml）便是斑痕浸液的血红蛋白量。假设100ml血中含14g血红蛋白，则血液量=斑痕浸液血红蛋白量x100/14。而全部斑痕血液量=已测斑痕血液量x全部斑痕面积/已测斑痕面积。出血量的测定要及时,时间越长,误差越大。（三）出血时间的测定血痕的陈旧度测定在某些案件中也很有意义。测定血痕陈旧度主要根据各种血液成分的变性和血清氯渗润基质的宽度，受时间推移的影响及其他因素，如热、阳光、水洗、腐败等的影响，一般只能作粗略估计。第二节血液及血痕检验案例血液（痕）是法医物证学检验中使用最早和最多的生物检材，因此研究也最为完善。案例一【案情简介】某年某月某日，死者吴某下晚自习骑自行车回家路上被迎面驶来的一车辆撞击致死。事故发生后，肇事车辆逃逸。案发后，当地交警经过调查，发现车牌号为XXXXX某大货车有肇事嫌疑，交警扣留了该车辆并对该车辆进行勘验。通过对嫌疑车辆的勘验，仅在嫌疑车辆左后轮花纹处发现少许灰黑色的不规则物质，送法医物证实验室进行检验鉴定。【实验室检验】（1）肉眼检查在嫌疑车辆左后轮花纹处发现少许灰黑色的不规则物质。（2）预试验-联苯胺实验联苯胺实验结果为阴性反应。（3）种属鉴定-对流免疫电泳法取少量疑似组织匀浆进行抗人血清对流免疫电泳法进行种属鉴定，结果为阳性反应，说明该组织是人体组织。取少许放显微镜下观察，该提取物具有组织学结构，即确定该提取物为人体组织。（4）个人识别-DNA分析分析从吴某身上提取的皮肤组织与嫌疑车辆左后轮花纹处提取物的人类基因组15个STR基因座的基因型结果显示该嫌疑车辆左后轮上的提取物与死者吴某的皮肤组织在这15个STR基因座中具有相同的STR分型。在证据面前，驾驶员交待了肇事经过。对犯罪事实公认不讳。【启示】联苯胺实验是一种方便快捷、灵敏度高的血痕预试验，其目的是要从大量的可疑血痕中筛除非血痕检材。联苯胺实验的意义在于阴性结果，阴性结果可以否定血痕。本案例中联苯胺实验出现阴性反应，可排除血痕。为什么明明是人体组织会出现这种情况？因为联苯胺实验是利用血痕中的血红蛋白或正铁血红素具有过氧化物酶活性，使过氧化氢释放出新生态氧，将无色联苯胺氧化为联苯胺蓝。联苯胺实验是检测血红蛋白或正铁血红素的，如果被检的人体组织不含有血液成分，联苯胺实验会出现阴性反应。本案例对一起交通事故中嫌疑车辆左后轮花纹处提取的疑似组织做联苯胺实验阴性，种属鉴定阳性、人类基因组15个STR基因座的基因型分析，并作出了同一认定。说明该检材为人体组织，同时又不含有血液成分，这种情况非常少见，可能是因为该组织来源于血管含量稀疏的脂肪或脑组织，在受到创伤分离时，由于交通事故车辆轮胎速度特别快，组织从人体迅速分离，没有沾上血液成分，或者表面沾上的血液成分由于雨水等的冲刷而丢失，导致联苯胺实验出现阴性结果。因此，在实验室工作中特别是现场勘查做初步检验这类检材时不能轻易地因为预试验阴性而放弃进一步检验，以致于失去侦破案件的机会。对此类的案件一定要带回实验室进行进一步的检验或用多种方法进行检验。案例二【案情简介】2005年3月5日，某县一单位被盗，现场勘验时发现在单位大门口的地上有蚕豆大小的疑似血痂状物，提取该疑似血痂状物，放入一垫有棉花的纸盒里，以防止血痂状物破碎，影响检验。室温保存，送实验室进行检验。【实验室检验】（1）肉眼检查：现场提取物为蚕豆大小、呈灰褐色的疑似血痂状物。（2）预试验-联苯胺实验：联苯胺实验阳性。（3）种属鉴定-抗人血红蛋白胶体金实验：抗人血红蛋白（Hb）胶体金实验阴性。不能确定为人血痕。（4）个人识别-DNA分析使用Chelex-100法提取疑似血痂的DNA进行人基因组STR基因座分析，未检测到扩增产物。重新取疑似血痂状物采用有机法结合Chelex-100法提取人血痂的DNA进行人基因组STR基因座分析，结果得到一男性STR基因座基因分型图，将数据输入DNA数据库，同时串并上九起跨县区作案的盗窃案。【启示】本案联苯胺实验阳性反应，仅表示可能是血，还需要进一步做种属鉴定才能确定是否人血痕。但本案种属鉴定-抗人血红蛋白胶体金实验呈阴性反应，可能是由于血液滴落到泥土，与泥土中某些物质发生反应或血红蛋白已降解，所以用种属鉴定没有检测到血红蛋白。使用Chelex-100法提取疑似血痂的DNA进行人基因组STR基因座分析，未检测到扩增产物，是由于血液滴落到泥土里，血痂里混有泥土里的杂质，提取的DNA纯度较差，没有得到扩增产物。重新取疑似血痂状物采用有机法结合Chelex-100法提取人血痂的DNA，得到的DNA纯度较高。因为用有机法提取DNA有纯化DNA的作用，可以得到高纯度的DNA。好的DNA模板，使PCR反应得以进行，获得扩增产物使我们能检测到STR基因型而进行个人识别。案例三【案情简介】2006年10月5日，某县公安局110指挥中心接到电话报称:在县供销社的小区有人持刀杀人，把人砍伤，请来处理。接到报警后，110民警立即赶到现场，此时，120医护人员已在现场对伤者何某、杨某、刀某进行初步处理，随后又将三名伤者送往县医院进行抢救。当天16时30分许，何某和杨某二人抢救无效死亡，刀某处于昏迷状态正在抢救中。某市公安局接到报案后，立即组织刑侦支队技术人员第一时间赶赴现场，对现场、尸体、伤者进行了初步勘查和检验，发现现场已遭到严重破坏，经检验，死者杨某的损伤主要集中于头部、胸部，有砍创、打击伤等，从其损伤的部位、严重程度来看，可确定不能自己形成，系他人所为。死者何某的的损伤主要集中于头部，其腹部有一锐器创，从其损伤的部位、严重程度来看，可确定不能自己形成，系他人所为。检验伤者刀某的伤势、结合X光片和刀某依然处于昏迷状态来分析，刀某的损伤也不能自己形成。由此从两具尸体和一伤者的情况可初步判定，该案涉及的三个人的损伤都系他人所为造成的故意杀人案。经勘验外围现场，确定进入现场的大门无明显破坏性痕迹，周围的墙及房屋也无攀爬痕迹等；勘验中心现场发现，所有的痕迹物证全部位于别墅一楼、二楼、三楼，未发现明显异常迹象，由此可基本排除他人进入现场作案的可能性。至此，尸体检验与现场勘验的初步判断相互矛盾，尸体检验支持他人所为，现场勘验排除他人所为。在这种情况下，现场血迹的个体认定成了分析现场和现场重建的关键。为了确定此案的案件性质，技术人员先后从现场上提取了近100份血痕检材，经DNA检验，确定了DNA的来源，根据现场血迹的形态和分布，客观地重建了现场，为现场分析提供了科学的依据，最后确定何某、杨某的损伤是他们在互相殴打时所形成，刀某在劝阻何某、杨某互相殴打中被误伤。从而确定了案件的性质，破获了此案。六个月后，伤者经抢救康复，逐渐恢复了部分记忆，进一步证实了对案件分析。【启示】随着现场勘验的正规化和标准化，现场分析和现场重建在案件侦破中的作用越来越显得重要，但现场分析和现场重建的正确与否，必须通过现场的物证来支持并证实。本案中尸体检验和现场勘验得到结论不能合理对接，相互间存在矛盾。最后通过对近100份现场血痕检材进行个人识别检验，以确定案发现场涉及到的三个人在案发时的位置，重建案发时的现场状况，将尸体检验和现场勘验有机的结合起来，最终破获了此案。案例四【案情简介】2007年10月10日，某市某县中学一青年女教师在家中被杀，案发现场分布有大量的血迹，在现场勘验中技术人员将现场上的血迹分片提取，先后共提取血痕检材40余份送实验室进行检验鉴定，以确定案发时的现场人员。种属实验确证是人血，提取血痕检材人类基因组DNA,分析基因组DNA的STR基因座基因型进行个人识别，结果发现在现场提取血痕检材中有三份血痕检材检出同一男性DNA（即这三份血痕检材所分析的STR基因座的基因型相同）其余均为死者所留，这说明犯罪嫌疑人在作案过程中受伤。根据这一情况，侦查人员对案发现场周边地区的医疗部门进行了查访，发现其中有一个李姓的男子受了伤，李某到医院包扎的时间与死者死亡时间相吻合。根据这一情况，对李某收审，取李某血液进行人类基因组DNA的STR基因座基因型分析结果发现李某的血痕与现场上遗留的男性血痕的DNA一致，从而侦破了此案。【启示】在凶杀案件中，现场往往留有大量的血迹，技术人员必须根据现场情况，分析血痕分布的部位、形状、颜色、范围等特点，提取对侦察破案有价值的证据和线索。本案中技术人员对现场上的血痕分片进行提取和包装，这将给实验室工作人员增加了大量的工作量。但我们可以从大量的物证检验中发现一些对我们侦察破案有价值的证据和线索，为案件的及时侦破起到了关键的作用。本案中在现场提取的大量血痕检材中检测到犯罪嫌疑人滴落在现场的血痕，根据犯罪嫌疑人有受伤史这一线索进行侦查，这极大地缩小了侦查范围，并为侦查提供了准确的侦查方向，为诉讼提供了可靠的证据。案例五【案情简介】2007年3月6日，永德县班卡乡忙东村新寨下组发生一起一家三口被杀的灭门惨案，该组村民熊小五及其长女张玉香、次女张建丽一家三口被人杀死在自家屋内。技术人员对现场进行认真仔细勘验，提取血痕检材17份，以及三名受害者的血痕送实验室检验。2007年3月8日抓获犯罪嫌疑人郭某后，技术人员又对郭某所穿的衣、裤、鞋、袜等进行了全面细致的检查，在犯罪嫌疑人郭某所穿白色T恤前胸部、左袖中部以及所穿的棕色皮鞋右鞋鞋面鞋带下方提取了3份可疑血痕送实验室检验。实验室检验】（1）肉眼检查：现场提取的血痕为暗红色，犯罪嫌疑人郭某所穿的白色T恤前胸部有绿豆大小的暗红色斑痕、上衣左袖中部有暗红色的芝麻大小的斑痕、右脚棕色皮鞋鞋带下方有暗红色点状斑痕。（2）预试验-联苯胺实验：上述血痕检材的联苯胺实验均为阳性，可能是血。（3）种属鉴定-抗人血红蛋白胶体金实验：上述检材抗人血红蛋白胶体金实验均为阳性。确定所取检材为人血痕。（4）个人识别-DNA分析用Chelex法提取上述血痕检材的DNA，分析其STR基因座的基因型，发现郭某所穿的白色T恤前胸部喷溅状血来自张玉香,上衣左袖中部有暗红色芝麻大小的血痕来自张建丽，右脚棕色皮鞋鞋带下方的暗红色斑点状斑痕为混合样本，系熊小五和郭某的混合血样。【启示】由于现场勘查人员和侦查人员有较强的证据意识，对现场物证和犯罪嫌疑人衣物进行了全面的寻找和提取，为DNA检验打下了良好的基础，最终为案件的成功侦破提供了强有力的证据。案例六【案情简介】2006年10月24日晚，永德县德党镇政府生活区丁某家被盗，技术人员用浸湿的纱布从门框上提取了可疑血痕（黄豆大小）。经案情分析判定，可能是犯罪分子所留。2007年6月，永德县公安局刑警大队在侦破一起系列入室盗窃案中，抓获杨某、王某两名犯罪嫌疑人，并提取两人血样送实验室检验。实验室检验】（1）肉眼检查：丁某家右侧门框中部有黄豆大小的可疑血痕，呈暗红色。（2）预试验-联苯胺实验：丁某家右侧门框中部黄豆大小的可疑血痕联苯胺实验阳性。可能是血。（3）种属鉴定-抗人血红蛋白胶体金实验：丁某家右侧门框中部黄豆大小检材提取物的抗人血红蛋白胶体金实验为阳性，确定其为人血痕。（4）个人识别-DNA分析用Chelex法提取丁某家右侧门框中部提取的血痕检材、两名犯罪嫌疑人血痕的人类基因组DNA,分析其STR基因座的基因型，发现杨某DNA的STR基因分型与永德县德党镇政府生活区丁某家被盗案门框上留下的可疑血迹的STR基因型相同。从而一举侦破了一起流窜盗窃案，并带侦破了24起盗窃案。【启示】从这起案件可以看出，在侦破盗窃案件中除了注意发现和提取指纹、作案工具的同时，还应注意对现场遗留的生物检材进行发现和收集，这往往对案件的侦破起到致关重要的作用。案例七【案情简介】2006年4月17日，镇康县南伞镇道水村委会木厂沟组李某被人杀死于家中。经现场勘查，提取了犯罪嫌疑人作案使用的榔头、砖头，死者血样以及死者外衣共四份检材。【实验室检验】（1）肉眼检查：榔头打击面有点状的棕色斑点，砖头长边的侧面有2x3cm大小棕红色可疑斑痕，死者外衣前胸有点片状的暗红色斑痕。（2）预试验-联苯胺实验：榔头打击面点状的棕色斑点和砖头长边的侧面2x3cm棕红色可疑斑痕联苯胺实验均呈阳性，可能是血。（3）种属鉴定-抗人血红蛋白胶体金实验：榔头打击面点状的棕色斑点和砖头长边的侧面2x3cm棕红色可疑斑痕的抗人血红蛋白胶体金实验均呈阳性，确定其为人血痕。（4）个人识别-DNA分析用Chelex法提取榔头打击面点状的棕色斑点和砖头长边的侧面2x3cm棕红色可疑斑痕做STR分型，结果得到这些血痕为死者李某所留。检测死者的外衣前胸的血痕，发现不是死者所留，可提示可能为犯罪嫌疑人王某所留。【启示】使用Chelex法提取检材的DNA进行检验，除榔头、砖头上的血迹认定为死者血外，经过检验人员的细致处理，所送检的衣物上的血迹也得到阳性结果，即可认定血迹是犯罪嫌疑人所留，为案件的侦破提供了证据。在犯罪手段越来越多样化、越来越隐蔽的情况下，传统侦破手段受到很大限制，利用DNA分析等先进技术手段可以对案发现场复原、缩小排查范围甚至直接认定犯罪嫌疑人，为维护社会稳定、打击犯罪发挥更加重要的作用。案例八【案情简介】2007年6月3日，耿马县孟定镇青年路刘某家出租房席梦思床底夹板内发现一具高度腐败女尸。死者赵某，生前系孟定镇青年路一按摩店按摩小姐。从提取现场的床垫上可疑血迹、垃圾筒内卫生纸上可疑斑迹、阴道拭子、赵某尸体血痕等物证送检。2007年6月6日，临翔区南天路正东旅社床下发现一具女尸，死者施某生前系坐台小姐，提取施某阴道拭子、尸体血痕、施某右手食指指甲处提取极微量的疑似血痕。针对这两起案件在作案地点选择、侵害对象、藏匿尸体方式方面有很大相似性，提取两案的相关生物检材送检。【实验室检验】（1）肉眼检查：6.3案：垃圾筒内卫生纸上有片状淡黄色可疑斑迹；死者赵某阴道拭子高度腐败、呈黄色。6.6案：死者施某右手食指指甲处有芝麻大小的疑似血痕；死者施某阴道拭子高度腐败、呈黄色。（2）种属鉴定：旅人精蛋白胶体金实验：①死者赵某阴道拭子和垃圾筒内卫生纸上片状淡黄色可疑斑迹阳性②死者施某阴道拭子阳性。（3）个人识别-DNA分析采用小体积有机法结合Chelex-100法提取DNA,用PCR技术分析人类基因组DNA的STR基因座的基因型，在6.3案和6.6案两案的阴道拭子及死者施某右手食指指甲处的血痕检测到同一男性DNA基因分型,使两起案件成功串并。对抓获的重大作案嫌疑人何有军血样进行DNA分析，并与两起命案中阴道拭子及死者施某右手食指指甲处的男性DNA进行比对，结果显示与嫌疑人何有军的DNA基因分型一致，圆满地侦破这起系列杀人案。【启示】针对有些案件在作案地点选择、侵害对象、藏匿尸体等作案方式方面有很大相似性，可以考虑串并案进行侦查，为圆满侦破系列案提供线索。案例九【案情简介】2007年2月14日8时35分，镇康县公安局刑警大队接到报警称在镇康县南伞镇南伞村委会街子队罗小玉家地边的沟里发现一具腐败尸体。经检验，死者系女性，年龄在20岁左右，身高145cm至160cm之间，体重50至60公斤，尸体被人用土掩埋，未着衣物，颈部以上及双上肢不存，有被动物啃食的痕迹，死亡时间在一个月以上。扩大对现场外围的搜索，勘查人员在距尸体50m处的竹蓬里发现了沾附有血迹的衣服、袜子等物品。在外围调查走访中，侦查人员了解到街子队人朱学荣、赵小怀夫妇的女儿朱某在2006年12月5日失踪，便找到朱学荣、赵小怀夫妇前来辨认，但是因为尸体已经腐败，朱学荣、赵小怀夫妇仅能分辨出衣服、袜子应是女儿失踪前所穿。提取死者阴道拭子、大腿深层肌肉及衣服、袜子及失踪人员朱某的父母朱学荣、赵小怀夫妇血样送检。【实验室检验】（1）肉眼检查：朱某蓝色外衣左侧上臂处有5x8cm擦拭样可疑血痕。（2）预试验-联苯胺实验：朱某蓝色外衣左侧上臂处有5x8cm擦拭样可疑血痕联苯胺实验阳性。说明可能是血。（3种属鉴定-抗人血红蛋白胶体金实验：朱某蓝色外衣左侧上臂处5x8cm擦拭样可疑血痕抗人血红蛋白胶体金实验阳性，确定是人血。（4）个人识别-DNA分析针对检材已严重腐败，取死者大腿深层肌肉采用酚－氯仿有机法结合Chelex-100提取DNA。同时提取朱学荣、赵小怀夫妇的DNA，朱某蓝色外衣左侧上臂处5x8cm擦拭样血痕的DNA,提取死者阴道拭子精子的DNA,用PCR技术分析人类基因组DNA的STR基因座的基因型，均得到相应的基因型，通过比对认定死者即是朱学荣、赵小怀夫妇的女儿-失踪人员朱某。并且朱某蓝色外衣左侧上臂处5x8cm擦拭样血痕和死者阴道拭子精子基因型是一致。认为犯罪嫌疑人可能受伤。经侦查，罗老玉的儿子在2007年1月外出缅甸打工，外出前右手受伤，有重大作案嫌疑。采集罗老玉血样来确定其与该男性的关系。后经检验比对，该男性确应系罗老玉的直系亲属，从而锁定了凶手，在案件的侦破中发挥了重要作用。【启示】物证的搜集在案件的侦破中起到至关重要的作用。在物证的发现和提取中必需注意到每一个细节，并把每一个环节串联起来。案例十【案情简介】2004年5月10日，官渡区如苑马军场小区甘某丈夫前往派出所报称：“其妻子甘某已经失踪几天”，后派出所片警前往其家中勘验，在卧室双人床下发现甘某尸体，甘某死亡几天来，家属并未在家中发现尸体，反而在家中生活数天。尸体检验：经查，尸体颈周有指印状表皮剥脱，颈部深浅肌群有不同程度的肌内出血，舌骨大角骨折，死因为扼颈致死。从尸体体表损伤可以判断在致死过程中死者有挣扎的可能。【实验室检验】（1）肉眼检查：检查死者十指指甲，在右手食指指甲中发现少量拟似组织的成分。在死者颈部可能为犯罪嫌疑人扼颈的地方用棉签擦拭备用。（2）预试验：检材量少，不做预试验（3）种属鉴定：检材量少，不做种属鉴定。（4）个人识别-DNA分析用Chelex-100提取死者右手食指指甲中少量拟似组织的DNA，同时提取所有死者家属及实验室人员的DNA,用PCR技术分析人类基因组DNA的STR基因座的基因型，均得到相应的基因型，在排除死者、所有死者家属及实验室人员的基因分型后推断为犯罪嫌疑人所留，案件破获后证实无误.【启示】1、此案的核心在于检材的提取，提取时要注意对死者双手的保护，在转移尸体时用塑料袋将双手保护起来，而且在尸检放置于冰柜前，用细小棉签将十指指甲分别转移提取。2、在报告此类微量检材的检验结果时要慎重，要排除无关人员（家属及实验室人员）的干扰。3、在女性被害案中，应该常规提取女性受害者的阴道拭子。4、提取检材要全面，不要因为有可能无法检验就放弃提取，诸如此案中甘某颈部擦拭物，现有技术条件下无法检验，但以后条件成熟后还是有机会检验并得到结果。案例十一【案情简介】某年某地发生一起夫妻死亡案，在案发现场室内、出入口处未见人为破坏痕迹。室内发现两名死者，女性死者身上检见钝器伤和锐器伤，男性死者身上检见锐器伤、手腕上有试刀痕，现场遗留有铁锤、菜刀各一把，上面均见大量血痕。实验室检验】（1）肉眼检查:现场遗留的铁锤上有大量的血痕、菜刀从刀刃到刀柄到菜刀上的凹槽均有血痕。（2）预试验：联苯胺实验阳性。说明可能是血（3）种属鉴定-抗人血红蛋白胶体金实验：铁锤和菜刀上的可疑血痕抗人血红蛋白胶体金实验阳性，确定是人血。（4）个人识别-DNA分析此案前后检验了100余份检材，经预试验和种属鉴定确定均为人血，在菜刀上就检验了12个地方，从刀刃到刀柄到菜刀上的凹槽均进行了检验，在12份检材中仅有一个地方的血迹是女性死者所留，其余11个地方的血迹均是男性死者所留。【启示】随着DNA检验技术的不断发展，虽然在检验的灵敏度、检验的效率、可检验检材的范围等方面都得到了很大的提高，但消耗的成本也愈来愈高，所以在检案中应该尽量避免批量送检、批量检验，以降低消耗。用一把凶器杀害两人或两人以上时，很难同时在一把凶器上检验出两名或两名以上死者的DNA，在此案中能够同时检出两名死者的DNA，是因为菜刀的形状特殊，在菜刀近柄处的刃背上有三处梭形镂空，就是在最后一处镂空的内壁上检出女性死者的DNA。通过现场勘查、结合外围调查，在菜刀上同时检出两名死者的DNA，基本上可以判断此案系男性将女性杀死之后再自杀的案件。案例十二例外的单亲亲子鉴定基因座D8S1179D21S11D7S820CSF1P0D3S1358子14/1528/3011/1212/1216/16父113/1528/308/1212/1215/16父213/1528/288/1212/1216/16基因座TH01D13S317D16S539D2S1338D19S433子6/710/1213/1321/2315/16父117/711/1211/1318/2313/15父26/710/1113/1318/2113/15基因座D19S433VWATP0XD18S51D5S818FGA子15/1617/188/1113/1911/1221/23父113/1514/188/1113/1511/1123/23父213/1518/208/813/1510/1120/23如果仅仅从位点信息上看，可以得出父1、父2都可以做孩子的生物学父亲，但这明显是错误的结论，因为每一个人只能有一个生父。【启示】目前使用的复合扩增试剂盒是美国ABI公司的ID试剂盒，它包括美国CODIS数据库的13个基因座以及其它四个基因座，主要针对北高加索等欧洲人群设计，对中国汉族人群的分辨率有限，现在国内研发的国产试剂（公安部的DT-15、基点认识的G0