蛙心灌流模拟实验
探究不同浓度酒精对离体蛙心脏收缩的影响
【目的】 学习Straub氏法灌流蟾蜍离体心脏方法;了解心肌的生理特性;并观察不同浓度酒精对心脏活动的影响。
【原理】 作为蛙心起搏点的静脉窦能按一定节律自动产生兴奋，因此，只要将离体的蛙心保持在适宜的环境中，在一定时间内仍能产生节律性兴奋和收缩活动。心脏正常的节律性活动需要一个适宜的理化环境，离体心脏也是如此，离体心脏脱离了机体的神经支配和全身体液因素的直接影响，可以通过改变灌流液的浓度，观察其对心脏活动的作用。
【材料】 牛蛙;RM6240BD微机生物信号处理系统，张力换能器;蛙心套管(straub)，常用手术器械，蛙板或蜡盘，蛙心夹，滴管，培养皿或小烧杯，污物缸，纱布，橡皮泥，任氏液，5%、25%、75%的酒精溶液
【方法】
1(仪器连接和参数设置
张力换能器输出线接微机生物信号处理系统第1通道(亦可选择其它通道)， 微机生物信号处理系统参数设置:
RM6240系统:点击“实验”菜单，选择“生理科学实验中”的“蛙心灌流”项目。系统进入该实验信号记录状态。仪器参数:通道时间常数为直流，滤波频率10Hz，灵敏度3g，采样频率400Hz，扫描速度 1s/div。
2(离体蛙心制备
(1)取蟾蜍一只，破坏脑和脊髓后，仰卧固定在蛙板上，从剑突下将胸部皮肤向上剪开，然后剪掉胸骨，打开心包，暴露心脏，分离左、右主动脉。
(2)在左主动脉下方穿1根线，靠头端结扎作插管时牵引用，在主动脉干下方穿1根线，在动脉圆锥上方系一松结用于结扎固定蛙心插管。
(3)左手持左主动脉上方的结扎线，用眼科剪在松结上方左主动脉根部剪一小斜口，右手将盛有少许任氏液的大小适宜的蛙心插管由此切口处插入动脉圆锥。当插管头到达动脉圆锥时，用镊子夹住动脉圆锥少许，将插管稍稍后退，并转向心室中央方向，镊子向插管的平行方向提拉，心室收缩期时将插管插入心室(如图1)。蛙心插管进入心室后管内的任氏液的液面会随心室的舒缩而上下波动。蛙心插管进入心室后，用预先准备好的松结扎紧，扎线套在蛙心插管的侧钩上打结并固定。剪断主动脉左右分支。
好的松结扎紧，扎线套在蛙心插管的侧钩上打结并固定。剪断主动脉左右分支。
图1 蛙心插管示意图
(4)轻轻提起蛙心插管以抬高心脏，用一线在静脉窦与腔静脉交界处作一结扎，结扎线应尽量下压，以免伤及静脉窦，在结扎线外侧剪断所有组织，将蛙心游离出来。 (5)用新鲜任氏液反复换洗蛙心插管内含血的任氏液，直至蛙心插管内无血液残留为止。此时离体蛙心已制备成功，可供实验。
(6)将蛙心插管固定在铁支架上，用蛙心夹在心室舒张期夹住心尖，并将蛙心夹的线头通过滑轮连至张力换能器的应变梁上，调节此线张力至1g，插管内加灌流约
1~1.5ml，并在插管上标记灌流的高度，在此后的实验过程中，灌流液恒定于该高度。 【观察项目】
1(描记正常的蛙心搏动曲线，注意观察心跳频率、心室的收缩和舒张程度。 2(把蛙心插管内的任氏液全部更换为5%的酒精溶液，做好标记，观察心博变化。待曲线出现明显变化时，立即吸取套管中的灌流液，同时做好标记;并用新鲜任氏液清洗2-3次，待心搏恢复正常。注意:换液时切勿碰套管，以免影响描记曲线基线，同时保持液面的高度一致。
3(向套管内加入25%的酒精溶液，做好标记，观察心博曲线的频率与振幅变化。当曲线明显变化时，立即吸取套管中的灌流液，并做好标记，迅速用壬氏液清洗2-3次，待心博恢复正常。
4(同法向套管滴加75%的酒精溶液，观察并记录心搏变化。
【注意事项】
(1)以蛙心夹连接心脏和换能器，连线张力改变会影响蛙心收缩幅度。 (2)注意在实验过程中，保持插管内液面的前后一致，避免前负荷变化而影响结果。 【实验预期结果】随着酒精浓度的增加，心脏收缩率逐渐降低
【讨论】为什么酒精会影响心脏的收缩异常,
【参考文献】
(1)酒精滥用者的左心室收缩与舒张功能减低_同济大学附属东方医院 (2)不同浓度酒精对离体大鼠心脏收缩的影响 江苏大学
(3)酒精对离体蟾蜍和大鼠心脏收缩的影响--《河北医科大学学报》
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