说明 龙眼微生物保鲜技术的研究与应用 2008I0007 车建美，福建农科院 2008-2010 在研 福建省科技厅科技计划重点项目 20 青枯病生防菌蜡状芽孢杆菌GFP标记及其在番茄根际定殖机

说明 龙眼微生物保鲜技术的研究与应用 2008I0007 车建美，福建农科院 2008-2010 在研 福建省科技厅科技计划重点项目 20 青枯病生防菌蜡状芽孢杆菌GFP标记及其在番茄根际定殖机 说 明 本调研是为十二五“科技基础性工作”项目预备～请根据实际情况填写～没有的就写无～但一定要写十二五的计划～特别是目标、内容及人员队伍～仪器设备条件～便于我们决定是否及如何安排贵单位参加。 “微生物资源”调研提纲 1 前期工作基础 1.1 本单位(课题组)目前微生物资源收集情况(概述) 福建省农业科学院农业生物资源研究所农业微生物研究中心着眼于农业领域的特色微生物及相关资源收集，保藏和应用研究。现已收集保藏了5200份土壤标本，分别来自中国、东南亚、德国、巴西等国家和地区，用于芽孢杆菌的分离;微生物菌株活体3697株(25724份)，其中已鉴定菌株分属细菌、放线菌和丝状真菌，共123个种，其中芽孢杆菌2250株，Bt Cry基因两条。菌株保藏主要采用-70?甘油冷冻和冷冻干燥真空保藏技术;菌种鉴定主要采用MIDI公司的Sherlock菌株脂肪酸鉴定系统和rDNA序列鉴定技术。 现有保存资源均实现了信息规整和数据库管理，基于Ajax技术，采用Linux + Apache2 + MySQL + PHP + Perl建立了微生物菌株等资源的信息管理系统和共享平台。 本研究中心以边建设、边完善、边共享为原则，及时对外开放服务，现已完成了共计63株功能菌种的生物学特性研究和应用前期研究，其中5个菌株作为生物农药核心菌株，6个菌株作为零排放养猪技术关键菌株进入了产业化阶段。 表1 福建省农业科学院农业生物资源研究所微生物研究中心(课题组)微生物资源收集情况 菌种 收集保存数量 活性评价阳性菌株 已鉴定的种属(基因)数/已发表的新种属 已鉴定的化合物数/新已申请专利的分类 (活的实物) (基因)数* 新种属(基因)数 (基因)数 化合物数 菌株数 0 0 0 病毒 0 0 0 古菌 拮抗菌:62株 0 0 细菌 3094株(23035份) 农药降解菌:2株 104种 抗虫菌:30株 0 0 放线菌 21株(105份) 拮抗菌:1株 1种 酵母菌 3株(15份) 0 0 0 0 丝状真菌 571株(2505份) 18株 0 0 0 原生动物 细胞系 0 0 0 基因 0 8株(64份) 基因2个 材料 2 0 0 合计 3697株(25724份) 95株 123株 * 按已做的活性分别列出。 另有土壤标本5200份。 1.2 本单位(课题组)已建立(可被认可的)的相关技术 细菌固体培养:涂布平板法、稀释倒平板法、选择培养:选择性平板培养法、富集培养法。 分离培养 平板划线法。 分子生物学:16S(18S)和ITS序列比对鉴定、分类鉴定 化学分析:脂肪酸菌种快速鉴定方法(MIDI) 生理生化鉴定。 特异引物扩增鉴定法。 青枯病生防菌、青枯雷尔氏菌植物疫苗、枯 萎病生防菌、线虫生防菌、微生物发酵床无活性评价 抗虫:苏云金芽孢杆菌抗虫活性生物测定。 其它:农药残留降解效率测定。 污染养猪微生物、微生物保鲜菌筛选、农药 残留降解微生物筛选。 超低温保存: -70?甘油冷冻保存，沙土管保保藏 干燥保藏: 冷冻干燥真空保存、砂土管保存 短期保存:悬液保藏、穿刺保存、纸片法。 存。 说明: 资源的分离培养技术(分别根据表1的各种类群写)、 鉴定技术分别指出在显微观察技术、生理生化鉴定技术、化学分析技术、分子生物学鉴定技术、DNA杂交技术等已经掌握的部分 菌种(基因)保藏技术 分别指出属于低温、超低温、液氮或沙土管等方式 活性评价技术分别指出本课题在抗细菌活性、抗真菌活性、抗虫活性、酶活性、抗肿瘤细胞活性、抗病毒活性及其它未提及的活性评价方面建立了那些评价方法 1.3 相关人员队伍 表2 福建省农业科学院农业生物资源研究所微生物研究中心(课题组)参与微生物资源相关研究的人员 投入微生物从事相关 姓名 年龄 学历 职称 技术专长* 资源的工作工作年限 量(月/年) 刘波 52 博士 研究员 分类鉴定 10 2 分离培养: 细菌: 固体培养: 涂布平板法、稀释倒平板法、平板划线法 林营志 35 博士 副研究员 分离培养: 选择培养: 选择性平板培养法、富集培养法。 7 3 分类鉴定: 分子生物学: 16S(18S)及ITS序列鉴定。 朱育菁 35 博士 副研究员 分类鉴定 7 3 分离培养: 细菌: 固体培养: 涂布平板法、稀释倒平板法、平板划线法 蓝江林 37 博士 副研究员 6 3 分离培养: 选择培养: 选择性平板培养法、富集培养法。 黄素芳 40 学士 副研究员 分类鉴定: 化学分析: 脂肪酸菌种快速鉴定方法(MIDI) 5 3 阮传清 35 博士 副研究员 活性评价: 抗虫: 苏云金芽孢杆菌抗虫活性生物测定。 7 3 分离培养: 细菌: 固体培养: 涂布平板法、稀释倒平板法、平板划线法 32 6 3 车建美 博士 助理研究员 分离培养: 选择培养: 选择性平板培养法、富集培养法。 分离培养: 细菌: 固体培养: 涂布平板法、稀释倒平板法、平板划线法 分离培养: 选择培养: 选择性平板培养法、富集培养法。 葛慈斌 35 硕士 副研究员 活性评价: 抗细菌活性: 青枯雷尔氏菌拮抗菌生测 10 10 活性评价: 抗细菌活性: 组培苗生物测定青枯雷尔氏菌拮抗菌活性。 活性评价: 抗真菌: 尖孢镰刀菌拮抗菌生测 31 4 3 史怀 硕士 助理研究员 分类鉴定: 化学分析: 脂肪酸菌种快速鉴定方法(MIDI) 保藏: 超低温保存: -70?甘油冷冻保存 肖荣凤 32 硕士 助理研究员 保藏: 短期保存:悬液保藏、穿刺保存、纸片法。 7 3 分类鉴定: 生理生化鉴定。 分离培养: 细菌: 固体培养: 涂布平板法、稀释倒平板法、平板划线法 陈 璐 27 硕士 助理研究员 5 3 分离培养: 选择培养: 选择性平板培养法、富集培养法。 分离培养: 细菌: 固体培养: 涂布平板法、稀释倒平板法、平板划线法 郑雪芳 32 硕士 助理研究员 5 3 分离培养: 选择培养: 选择性平板培养法、富集培养法。 分离培养: 细菌: 固体培养: 涂布平板法、稀释倒平板法、平板划线法 曹 宜 33 硕士 助理研究员 10 3 分离培养: 选择培养: 选择性平板培养法、富集培养法。 刘 芸 33 硕士 助理研究员 活性评价: 其它: 农药残留降解效率测定。 5 3 分离培养: 选择培养: 选择性平板培养法、富集培养法。 周先治 33 硕士 助理研究员 活性评价: 抗细菌活性: 青枯雷尔氏菌拮抗菌生测 5 3 活性评价: 抗细菌活性: 组培苗生物测定青枯雷尔氏菌拮抗菌活性。 保藏: 超低温保存: -70?甘油冷冻保存 刘丹莹 39 学士 助理研究员 10 10 保藏: 干燥保藏: 冷冻干燥真空保存、砂土管保存 刘国红 26 硕士 芽孢杆菌分类鉴定。 2 10 , 参考1.2的内容具体写出技术专长 1.4 本单位(课题组)可供使用的仪器设备 表3福建省农业科学院农业生物资源研究所微生物研究中心(课题组)用于微生物资源研究的仪器设备 名称 用途 购置时间 价格 数量 2 微生物鉴定系统软件 MIDI SHER20CK (含安捷伦气相色谱等) 磷脂脂肪酸菌种鉴定、土壤微生物群落分析。 2006年 / 2009年 70万元/套 1 冻干机Virtis 6KEL 菌种冻干保存 2006年 21万元 1 超低温冰箱 三洋MDF-U52V 菌种超低温保存 2005年 6.3万元 2 超低温冰箱 三洋MDF-U72V 菌种超低温保存 2009年 6.5万元/台 1 Biometra梯度PCR仪 TGRADIENT96 基因克隆、菌种鉴定 2006年 4.5万元/套 1 Biometra梯度PCR仪 TProfessional 基因克隆、菌种鉴定 2009年 5.7万元/套 1 Bio-Rad C1000PCR仪 基因克隆、菌种鉴定 2009年 7.5万元/套 1 美国UVP凝胶成像系统 基因克隆、菌种鉴定 2009年 6.7万元/套 1 Bio-Rad 192型电泳系统 基因克隆、菌种鉴定 2009年 1.8万元/套 1 台式冷冻离心机 Hettich Mikro 200R 基因克隆、菌种鉴定 2006年 4万元 1 台式冷冻离心机 Sigma 3-18K 活性物质分析 2004年 8.5万元 1 气质联用仪(安捷伦) 活性物质分析 2008年 55万元/套 1 液相色谱安捷伦1100 Serial 活性物质分析 2004年 23万元 1 紫外可见光分光光度计 UV2550 微生物生理生化分析 2005年 8.2万元 2 奥特光学显微镜 菌种形态观察 2009年 0.32万元/套 1 发酵系统(搅拌式70L) 微生物发酵 1999年 16万元/套 1 发酵系统(气升式50L) 微生物发酵 2000年 3万元/套 1 梯度发酵系统(含5个10L罐、1个50L罐) 微生物发酵特性研究 2009年 36万元/套 5 温控摇床 微生物培养、微生物生理生化分析 2005年 1.2万元/套 5 人工气候箱 微生物培养、微生物生理生化分析 2005年 1.1万元/套 6 超净工作台 无菌操作 2003 - 2009年 0.45万元/台 1 GPS仪 野外样品采集点定位 2007年 0.29万元 1.5 已获得资助的相关课题 表4 承担课题一览表 进展序号 课题名称 编号 负责人，单位 起止时间 类别 情况 30871667 2009-2011 生防菌对青枯雷尔氏菌致弱机理的研究 刘波，福建农科院 在研 科技部国家自然科学基金 1 农田循环高效生产模式关键技术研究与集成示范”之课题13“东南地2007BAD89B13 刘波，福建农科院 2007-2009 在研 科技部国家支撑计划 2 区农田秸秆菌业循环生产技术集成研究与示范 设施蔬菜病虫害生物-化学协同控制技术研究 2002AA244031 刘波，福建农科院 2002-2005 结题 科技部国家“863”计划 3 国家水体污染控制与治理科2008ZX07425-002 2008-2010 华南村镇塘坝地表饮用水安全保障适用技术研究与示范宁德示范点 刘波，福建农科院 在研 4 技重大专项 2006AA10A212 2007-2011 生物杀虫剂研究和创制 刘波，福建农科院 在研 科技部国家“863”计划 5 茄科作物青枯病和枯萎病生防菌剂的研究与应用--芽孢菌工程菌的构2006AA10A211 蓝江林，福建农科院 2007-2011 在研 科技部国家“863”计划 6 建及生防菌剂的创制 闽发改投资[2008]762零排放猪场微生物发酵床技术研究与应用 蓝江林，福建农科院 2008-2009 在研 福建省发改委专项 7 号 闽发改投资[2006]7812006-2009 生物农药高毒力菌株筛选利用与菌种资源基因库的建立 蓝江林，福建农科院 结题 福建省发改委专项 8 号 2006-2008 茄科土传病害生物防治拮抗菌剂生产工艺关键技术的研究与应用 闽农产(2006)10号 朱育菁，福建农科院 结题 福建省发改委专项 9 福建省生物农药工程研究中心 闽计高技[2002]153号 刘波，福建农科院 2002-2005 结题 福建省发改委专项 10 农业生物资源研究仪器设施专项 无 刘波，福建农科院 2008-2009 结题 福建省财政厅财政专项 11 福建省科技厅科技计划重点1998-2000 高效生物杀虫剂BtA的研制与应用 无 刘波，福建农科院 结题 12 项目 福建省科技厅科技计划重点2000Z031 2000-2002 青枯生物杀菌剂ANTI-8098的研制与应用 刘波，福建农科院 结题 13 项目 福建省科技厅科技计划重点2006J0319 2006-2009 水果中致腐微生物致腐机理的研究 曹宜，福建农科院 结题 14 项目 福建省科技厅科技计划重点生防菌对青枯雷尔氏菌微生态选择性致弱作用的机理研究 2006J0320 葛慈斌，福建农科院 2006-2008 结题 15 项目 福建省科技厅科技计划重点阴沟肠杆菌降解有机磷农药机理研究 2006J0321 马丽娜，福建农科院 2006-2008 结题 16 项目 福建省科技厅科技计划重点2006F3025 2006-2009 淡紫拟青霉寄生根结线虫卵相关基因的分离与鉴定 卓侃，福建农科院 结题 17 项目 福建省科技厅科技计划重点2007N2010 2008-2009 福建省农业生物药物研究与应用平台 刘波，福建农科院 结题 18 项目 福建省科技厅科技计划重点龙眼微生物保鲜技术的研究与应用 2008I0007 车建美，福建农科院 2008-2010 在研 19 项目 青枯病生防菌蜡状芽孢杆菌GFP标记及其在番茄根际定殖机制的研2008J0054 车建美，福建农科院 2008-2011 在研 福建省科技厅自然科学基金 20 究 2008J0320 2008-2011 土壤微生态因子与线虫生防菌淡紫拟青霉菌定殖特性的相互关系研究 史怀，福建农科院 在研 福建省科技厅自然科学基金 21 1.6 已获得的专利及成果 表5 省部级以上科技成果奖励和专利一览表 序号 成果/专利名称 类别 等级 授予单位 授予时间 主要完成人 证书号 刘波、朱育菁、林抗美、林营志、苑宝1 高效生物杀虫剂BtA的研制 省科技进步奖 二等 福建省科技厅 2006 2006-2-008 玲、葛慈斌、阮传清 农作物青枯病生防菌ANTI-8098的研刘波、朱育菁、林营志、林抗美、葛慈2 省科技进步奖 二等 福建省科技厅 2008 2008-2-004 究与应用 斌、曹宜、阮传清 气升式发酵反应器 3 专利 刘波、林国宪 ZL 95 2 02348.2 流滤式固膜分离器 4 专利 刘波 ZL 99 2 49443.5 超声雾化药物撒播装置 5 专利 刘波 ZL 99 2 49442.7 物理耦合装置 6 专利 刘波 ZL 99 2 49448.6 温室 7 专利 刘波 ZL 03 2 20392.6 包装袋(BtA生物杀虫剂) 8 专利 刘波 ZL 00 3 37037.2 瓶贴(生物杀菌剂) 9 专利 刘波 ZL 03 3 14054.5 表6. 发表论著一览表 1、国际专业学报(SCI) [1] LIU, B. AND SENGONCA, C., 1994. Development of 8-armed airflow olfactometers for measuring olfactory responses of insect predators. Anz. Scheadlingsk, Pflanzenschutz, Umweltschutz 67, 30-34. [2] LIU, B. AND SENGONCA, C. 1997. Seasonal population dynamic and within-plant distribution of the whitefly, Aleurotuberculatus takahashi David et Subramaniam (Hom., Aleyrodidae), and its parasitoid, Eretmocerus longipes Compere (Hym., Aphelinidae) in citrus and jasmine plantations in Fuzhou region of the southeastern China. Anz. Scheadlingskde., Pflanzenschutz, Umweltschutz 70: 97-101. [3] SENGONCA, C. AND LIU, B. 1997. Ecological studies on parasitism of Eretmocerus longipes Compere (Hym., Aphelinidae) on the whitefly, Aleurotuberculatus takahashi David et Subramaniam (Hom., Aleyrodidae) on jasmine in fuzhou region of the southeastern China. Anz. Scheadlingskde., Pflanzenschutz, Umweltschutz 70: 108-111. [4] LIU, B. AND SENGONCA, C. 1998. Functional responses of the parasitoid, Eretmocerus longipes Compere (Hym., Aphelinidae) to densities of the whitefly, Aleurotuberculatus takahashi David et Subramaniam (Hom., Aleyrodidae) at different temperatures. Anz. Scheadlingskde., Pflanzenschutz, Umweltschutz 71,53-56. [5] SENGONCA, C. AND LIU, B. 1998. Biological studies on Eretmocerus longipes Compere (Hym., Aphelinidae) a parasitoid of Aleurotuberculatus takahashi David et subramaniam (Hom., Aleyrodidae) in the laboratory. J.Appl. Ent 122, 207-211. [6] SENGONCA, C. AND LIU, B. 1998. Release of Eretmocerus longipes Compere (Hymenoptera: Aphelinidae) against Aleurotuberculatus takahashi David et Subramaniam (Homoptera: Aleyrodidae) on jasmine plantations in the Fuzhou region of southeastern China. Z. PflKrankh. PfllSchutz. 105, 504-512. [7] SENGONCA, C. AND LIU, B. 1998. Laboratory studies on the effect of temperature and humidity on the life table of the whitefly, Aleurotuberculatus takahashi David & Subramaniam (Hom., Aleyrodidae) from southeastern China. Anz. Scheadlingskde., Pflanzenschutz, Umweltschutz (in print). [8] SENGONCA, C., LIU, B. AND ZHU, Y. J., 2001. Efficiency of the mixed biocide GCSC-BtA against vegetable pests of different arthropod orders in the southeastern China. J. Pest Sci. 74, 33-36. [9] SENGONCA, C.; LIU, B., 2001. Influence of mixed biocide GCSC-BtA on the pupa and adult stages of Apanteles plutellae Kurd (Hym., Braconidae) and its host, Plutella xylostella (L. ) (Lep., Plutellidae). J. Pest Science, 74, 145-149. [10] LIU, B.; SENGONCA, C., 2002. Investigations on side-effects of the mixed biocide GCSC-BtA on different predators of Plutella xylostella (L. )(Lep., Plutellidae) in southeastern China. J. Pest Science 75, 57-61. [11] SENGONCA, C.; LIU, B., 2002. Effects of GCSC-BtA biocide on population dynamics of cabbage pests and their natural enemies from fields in southeastern China. J. Pest Science 75, 46-50. [12] LIU, B.; SENGONCA, C., 2003a. Conjugation of δ-endotoxin from Bacillus thuringiensis with abamectin of Streptomyces avermitilis as a new type of biocide GCSC-BtA in control of agricultural insect pests. J. Pest Science 76, 44-49. [13] SENGONCA, C.; LIU, B., 2003. Effects of GCSC-BtA biocide on abundance and diversity of some cabbage pest as well as their natural enemies in southeastern China. J. Plant Disease and Protection 110(5) 484-491. [14] WANG, L. J.，HUANG, M. YOU, X. GUAN AND B. LIU, 2004. Effects of toxins from two strains of Verticillium lecanii (Hyphomycetes) on bioattributes of a predatory ladybeetle, Delphastus catalinae(Col, Coccinellidae). Appl. Ent. 1439-0418. [15] LIU, B., Y.J. ZHU and C. SENGONCA, 2006. Laboratory studies on the effect of the bioinsecticide GCSC-BtA on mortality and feeding of diamondback moth Plutella xylostella L. (Lepidoptera: Plutellidae) larvae on cabbage. J. Plant Diseases Protection 113, 31-36. [16] SENGONCA, C., B. LIU and Y.J. ZHU, 2006. Insecticidal activity and antifeedant effect of a new type biocide GCSC-BtA against Plutella xylostella L. (Lep., Plutellidae). J. Pest Sci. 79, 3-8. [17] ZHU Y.J., B. LIU and C. SENGONCA, 2006. Toxicity of biocide GCSC-BtA on arthropod pests under different temperature conditions. J. Pest Sci. 79, 89-94. [18] ZHU, Y.J., B. LIU and C. SENGONCA, 2006. Efficiency of GCSC-BtA, as a new type of biocide, on different agricultural aethropod pests and its side-effect on some predators. Mitt. Dtsch. Ges. allg. angew. Ent. (Giessen) 15, 309-313. [19] ZHU YU-JING, KANG-KANG SONG, ZHI-CONG LI, ZHI-ZHEN PAN,YUN-JI GUO, JING-JING ZHOU, QIN WANG, BO LIU* AND QING-XI CHEN*。Antityrosinase and Antimicrobial Activities of trans-Cinnamaldehyde Thiosemicarbazone。J. Agri. Food Chemistry 2009, (021):9007554. 2、国家级学报 [20] 车建美,蓝江林,刘波*.转绿色荧光蛋白基因的青枯雷尔氏菌的生物学特性.中国农业科学,2009, 42, (2):511-522. [21] 葛慈斌,刘波*,林营志,朱育菁,肖荣凤.生防菌对青枯雷尔氏菌强致病力和无致病力菌株生长竞争的影响.植物保护学报,2006,33(2):151-156; [22] 蓝江林,朱育菁,葛慈斌,刘波*等.水葫芦内生细菌的分离与鉴定.农业环境科学学报,2008, 27(6): 2423-2429 [23] 李芳 黄素芳 刘波*,淡紫拟青霉对辛硫磷的降解效应:应用与环境生物学报.2006,12(1):104-107: [24] 李芳 史怀 刘波* 陈家骅,淡紫拟青霉对尖孢镰刀菌的拮抗作用与机制分析:植物保护学报.2005,32(4):373-378: [25] 李芳,葛慈斌,刘波*,陈家骅:淡紫拟青霉次生代谢物质的抑菌效应:植物保护学报:2006,33(1):94-98 [26] 李芳,刘波*,黄素芳.基质浓度对淡紫拟青霉“NH-PL-03”菌株生长的影响.中国生态农业学报.2006,14(4):153-156 [27] 李芳,刘波*,黄素芳.温度对淡紫拟青霉NH-PL-03菌株培养特性及毒力的影响.中国生态农业学报,2007,15(4).231-237. 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