激素对菘蓝叶片组织培养的影响

激素对菘蓝叶片组织培养的影响 激素对菘蓝叶片组织培养的影响 安徽农业科学,JcxunalofAnhuiA.Sci.2OO9.37(17):7868—7869责任编辑王淼责任校对况玲玲 激素对菘蓝叶片组织培养的影响 胡冬南,柯国庆2,王恒芬,范万兴 (1.江西农业大学江西省竹子种质资源与利用重点实验室,江西南昌330045;2.江西省瑞昌市林业局,江西九江332200) 摘要[目的]为提高菘蓝的生产效率,降低其生产成本提供技术支持.[方法]以菘蓝无菌苗的叶片为外植体,利用正交 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 研究6-BA 和NAA对菘蓝叶片分化的影响.【结果】处理6_BA1.5珥r/L+NAA0.6rn爵,L和6-BA2.0L+NAA0.2m#L的不定芽分化率均为 93.75%,分化系数分别为4o.0和38.75.NAA对叶片分化率的影响最大,其与6-BA的交互作用较强,6-BA的影响相对较小.菘蓝叶片 分化的最佳培养基为M_s+6-BA2.0L+NAA0.6nv/L.IBA和NAA对菘蓝试管苗生根均有一定的促进作用.单独使用0.1mr/L NAA的生根率迭%以上且根的质量较好,而过高浓度抑制生根.IBA对菘蓝生根的促进作用不如NAA,生根率较低且根的质量较差. 菘蓝生根的适宜培养基为Ms+NAA0.1mg/L.[结论]该研究为菘蓝的组织培养和快速繁殖奠定了初步基础. 关键词菘蓝;激素;叶片分化;生根培养 中图分类号$603.6文献标识码A文章编号0517—6611(2OO9)17—07868—02 EffectsofHormonesontheTissueCultureoflsat/s/rid/got/caLe艄 删 l~g-nlindai(JianiProvincialKeyI.abomtoryforBambooGennplasmResourcesandUtilizat ion.JianAgriculturalUniversity,NaIlc}哪哆, Ji~sxi330O) AbsU-aet[Objective]1heresearchaimedtoprovidetechnicalsupportforenhancingtheprod uctionefficiencyofIsat/s/nd/got/caandre(hJcingitspm- ductioncost.[Method]WithleavesofasepticI./nd/got/casea8explants,theeffectsof6-BAandNonthedifferentiationofI.indigotica leavesresearchedbyorthogon~design.1ResultIn1edifferentiationratesofadventitiousbudsinboththetreamaents6-队1.5ne./L+NAA0.6 ~e./Land6-BA2.0mg/L+NAA0.2nv./Lwere93.75%andtheirdifferentiationcoefficientswere40.0and38.75resp.rI11eeffectofNAAonthedif- ferentiationrateofleaveswasgreatest.itsinteractionwith6-BAstrongerandtheeffectof6-BArelativelyless.历optirmunmediumforthedif- ferentiafionofI.蜘t口 leaveswasMS+6-BA2.0nv/L+NAA0.6nv/L.BothIBAandNAAhadsonleprornotingeffectontherootingof1.一 d/got/caplanflets.When0.1mg/LNAAwasusedindividually,theID0tingratewashigherthan9r7%andthequalityofn~)tswasbetter,butthehiger concn.wouldinhibitrooting.promotionofmAonthereot~sofI.indigoticaWasinferiortothatofNAA.itsrootingratewaslowerandthequality ofrootswasWOl'Se.Thesuitablenl~ulnf0rmootingof1./nd/got/cawasMS+NAA0.1ms/L.[Conclusion]1hemsearehl删aprimaryfoundation f0rtissuecultureandrapidpropagationofI./nd/got/ca. Keywordslsat/sb~d/got/ca;Hormones;Leafdifferentiation;Rootingculture 菘蓝(IsatisindigoticaFort)是十字花科菘蓝属二年生草 本植物_lJ,其叶(大青叶)和根(板蓝根)都是常见的中药材, 具有广阔的开发前景.有关菘蓝的组织培养,人们开展过一 些研究,内容主要集中于外植体或培养基对菘蓝愈伤和再生 植株分化的影响[I5].由于这些研究中采用的试验方法不 同,因此得出的结论并不一致.该研究利用正交设计和单因 素试验对菘蓝叶片分化培养基和试管苗生根培养基进行了 优化,以期为菘蓝高效,低成本规模化生产提供技术支持. 1材料与方法 1.1试验材料菘蓝种子无菌培养形成的实生苗. 1.2试验方法 1.2.1叶片分化培养.将菘蓝无菌苗叶片切成2段,每段为 一 外植体,无菌条件下将叶片沿叶脉垂直方向剪出6个切口 并接种于分化培养基中.分化培养以MS为基本培养基,其 中添加不同浓度的6-BA和NAA.2种激素的浓度采用 (34)正交设计L6J(表1),共9个处理,每处理8瓶,每瓶接种 4个外植体. 表16-BA和NAA的浓度水平 髓e11tconcentrationlevdof6-BAandN从 作者简介胡冬南(1971一),女,江西余干人,副教授,从事植物遗传 育种研究. 收稿日期2009--03—12 1.2.2菘蓝的生根培养.将叶片分化产生的健壮不定芽接 种到Ms基本培养基中进行壮苗培养,约15d后取生长状态 较一致的小苗进行生根培养.以MS为基本培养基,添加不 同浓度的NAA或IBA,每处理8瓶,每瓶接种4棵小苗. 1.2.3培养条件.培养室温度25?,光照强度1500—2000 k,光暗(14/10h)交替培养(叶片先暗培养5d),培养基pH 值为6.0,6.1. 1.2.4数据分析与统计.叶片接种30d后统计叶片分化芽 的数目,统计分化率及分化系数.生根培养25d后统计生根 率及不定根的数目. 叶片分化率(%)=蓦x100 分化系数=(产生芽的总数/总外植体数)×100% 生根率(%)=(生根的外植体数/接种外植体数)x100 所得数据用DPS软件进行统计分析. 2结果与分析 2.1不同激素浓度对菘蓝叶片分化的影响在组织培养中 6-BA是一种被广泛应用的细胞分裂素,常与一定比例的生长 素如NAA配合使用.试验设计不同浓度的6-BA,NAA及它 们的组合,通过正交试验,了解6-BA和NAA对菘蓝叶片分化 的影响,以找出菘蓝叶片分化最佳培养基配方.由表2可以 看出,各处理中的菘蓝叶片都能分化出不定芽,但分化率高 低不同,其中处理F和H的分化率较大,为93.75%.分析各 激素不同浓度水平间的极差可知,NAA对叶片分化率的影响 -BA的交互作用也较强,6-BA的影响相对较小. 最大,它与6 由方差分析结果可知,无论是6-BA,NAA的浓度问还是不同 处理间,菘蓝叶片分化率的差异均未达到显着水平,而分化 37卷17期胡冬南等激素对菘蓝叶片组织培养的影响7869 系数存在显着差异.分化系数较高的2个处理也是F和H, 分别达到了40.00和38.75,因此,在菘蓝叶片培养不定芽时 可推荐使用这2个处理.,通过对正交试验结果寻优可分析 出,当用6-BA和NAA诱导菘蓝叶片分化不定芽时,2种激素 最佳浓度组合为应为2.0mg/L6-BA+0.6mg/LNAA,而这一 组合在参与试验的9个处理中没有出现,因此该组合的实际 效果还有待于进一步验证. 表2BA和NAA对叶片诱导率的影响(30d) bIe2田砖e1]feels0f每BAandNAAmtheleafinlildlollrate 2.2菘蓝试管苗的生根培养NAA是一种具有生长素类活 性的植物生长调节剂,诱发不定根的形成;IBA是一种广谱的 吲哚类植物生长调节剂,是良好的生根剂,促进植物的生 根_7j.试验以俗为基本培养基,附加不同浓度的NAA,IBA 以及2种激素的组合配比浓度,以筛选出最适宜菘蓝生根的 培养基.由表3可知,单独使用NAA时,适量的NAA能有效 促进菘蓝生根,当其浓度为0.1mg/L时,生根率能达到97% 以上,根的质量较好,而浓度过高则抑制生根.IBA对菘蓝的 生根促进作用不如NAA,生根率较低,根细,质量较差.因此 在菘蓝生根培养时可选择+0.1mg/LNAA作为生根培 养基. 衰3不同浓度激素对根分化的影响 1糊e3Theeffeas0fdiffenmtoanomtnlaonofhonnm~onthedifferenti. ation0froots 3结论与讨论 (1)6-BA和NAA对菘蓝叶片分化均有一定的促进作用, 在所设浓度范围内,2种激素都以稍高浓度的效果较好,9个 处理中叶片分化效果最好的培养基为:M-s+1.5mg/L6-BA+ 0.6mg/LNAA. (2)NAA和IBA对菘蓝根的分化均有一定的促进作用,且 表现为低浓度优于高浓度.NAA的生根效果较IBA好,生根率 较高,根较粗,菘蓝生根最佳培养基为IS+NAA0.1mg/L. (2)该研究在叶片分化试验中采用了正交设计,通过对 正交试验结果寻优可分析出,当用6-BA和NAA诱导菘蓝叶 片分化不定芽时,2种激素最佳浓度组合应为2.0mg/L6-BA +0.6mg/LNAA,而这一组合在参与试验的9个处理中没有 出现,其实际效果还有待于进一步试验验证. 参考文献 [1]姚派生.药用植物学[M].北京:中国中医药出版社,2003:266. [2]陈秋芳,黄群策,秦广雍.菘蓝叶片离体培养与试管无性系的建立[J]. 河南农业科学,20o7(7):98—100. [3]张丽琼,周琼,柳林,等.不同培养基对菘蓝叶片组织培养的效应[J].广 西热带农业,2oo7(6):30—31. [4]彭丽萍,张远兵,汪露润.菘蓝离体叶片高频再生体系的建立[J].安徽 科技学院学嘏,20O7,21(4):14—17. [5]苗永美,简兴,石静.菘蓝两种外值体愈伤组织诱导研究[J].生物技术 通报,2oo8(1):147—150. [6]李春喜,王志和,王文林.生物统计学[M].北京:科学出版社,20OO:149 — 156. [7]沈海龙.植物组织培养[M].北京:中国林业出版社,2005:41—43. 18J?^NGQ,[1ONGL,NINGZY,eI.Establishna~0f8oma~iccelldovesin Thes/umch/nenseTta'czandi协dtromiI1gt,~raque[JJ.AaiSci- ?ce&Tedmotogv,獬,9(5):47—49,62. [9]曾建军,孙—铭,孙敏,等.菘蓝离体培养过程中愈伤组织和再生芽发 生的细胞组织学观察[J].西南师范大学:自然科学版,20O4,29(6): 1069一lo72. 【_10JCAOYL,uJ0O,ZHANGXY,da1.Effects0fdiffematcuhu~econdifi~m? fitritlcation田nmL.plantletsilltissueculturelJJ.A印l舢d Sden~&Tedmdagy,20O8,9(2):30—32,l15.