槐米中芦丁的提取分离和检识及槲皮素的制备
杨翊涵,2013级中药学一班,
【摘要】本文整理总结了两次实验的操作过程与实验结果。包括从槐米中提取芦丁、芦丁的分离和检识～以及槲皮素的制备和检识。通过碱溶酸沉的方法提取芦丁～再利用稀酸水解生成槲皮素。通过芦丁的制备～掌握黄酮类化合物的提取分离的原理和操作。熟悉紫外光谱在黄酮结构鉴定中的应用。通过芦丁的结构检识～了解苷类结构研究的一般程序和方法熟悉重结晶技巧。了解和掌握黄酮类化合物的一些主要性质和鉴定方法。
【关键词】芦丁、槲皮素、提取分离、检识鉴定、结构、性质。 1. 1 芦丁的提取原理
利用芦丁结构中含有多个酚羟基～呈酚酸性～能在碱水中溶解的性质～可用碱性溶剂进行提取～提
取液加酸后可沉淀析出,碱溶酸沉
法,。也可利用芦丁在冷水中溶解
度小～在热水中溶解度大的性质进
行提取。
1.2. 芦丁的分离原理
利用芦丁结构在冷乙醇中溶解度小～在热乙醇中溶解度大～以及在热水中溶解度大～在冷水中溶解度小的性质分离。芦丁用溶剂加热
溶解后～趁热抽滤～滤液放冷后能析出而达到分离的目的,如不纯可再重复操作进行分离,。也可采用醇溶水沉法进行精制。 1.3. 芦丁的鉴定原理
,1,利用吸附薄层色谱的分离原理～芦丁与芦丁对照品在同一条件下进行展开～显色～以达到鉴定芦丁的目的。
,2,通过专属的化学显色反应,如三氯化铝显色反应,～确定芦丁的成分类型,黄酮类,。
1.4 实验原理
芦丁浅黄色针状结晶～难溶于冷水～可溶于热水,1:180，200,～热甲醇,1:10,～冷甲醇,1:100,～热乙醇,1:60,～冷乙醇,1:650,,难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等～易溶于碱液。
槲皮素黄色结晶～能溶于冷乙醇
,1:290,～易溶于沸乙醇,1:23,～
可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡
啶、丙酮等,难溶于水、苯、石油醚
等溶剂。
芦丁为黄酮苷～分子中具有酚羟基～显酸性～可溶于稀碱液中～在酸液中沉淀析出～可利用此性质进行提取分离。利用芦丁易溶热水、热乙醇～较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制。芦丁可被稀酸水解生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖～依此进行制备槲皮素。通过纸色谱及紫外光谱进行黄酮及糖的鉴定。
2.1 粗芦丁的制备
槐米粗粉50g～加水800ml加热～加氢氧化钠调PH8-9～搅拌加热,95?保温50min～趁热过滤～滤渣再如上提取一次。合并滤液。向滤液加入10%HCL调PH4-5～抽滤～至于80?干燥得芦丁粗品。所得粗品一半留备后用～另一半加热溶解～放臵过夜。
2.2 槲皮素的制备
将放臵过夜的芦丁粗品滤液再次抽滤～滤渣干燥后取1g臵于500 ml圆底烧瓶中～加入2%硫酸2.2ml和197.8ml蒸馏水～微沸回流至烧瓶内出现絮状结晶～静臵再次抽滤得槲皮素精品。滤液用碳酸钡中和至中性～过滤～蒸发浓缩至干。
3.1槲皮素的定性实验
,1,锆-枸试验:取样品液适量～然后加 2,ZrOCl2的甲醇溶液～注意观察颜色变化～再加入2,枸椽酸的甲醇溶液～
记录
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颜色变化。
(2)α-萘酚-浓硫酸反应:取样品液适量～加等体积的l0,α-萘酚乙醇溶液～摇匀～沿管壁缓加浓硫酸～注意观察两液界面的颜色。 3.2 芦丁及槲皮素的色谱
支持剂:聚酰胺层析板,5×10cm,。
展开剂:甲醇-丙酮-甲苯-乙酸,8:2:2:1,。
样品:自制槲皮素的乙醇溶液～自制芦丁的乙醇溶液。
对照品:槲皮素标准品的乙醇溶液～芦丁标准品的乙醇溶液。
显色剂:三氯化铝乙醇溶液喷雾～紫外光灯365nm下检识荧光。 3.3糖的纸色谱检识
支持剂:中速层析滤纸,5×20cm,
样品:取水解后的滤液20ml～水浴加热～且在搅拌下加适量碳酸钡细粉至PH中性～过滤～取滤液并浓缩至2mI左右～放冷后～供纸色谱点样用。
对照品:1,葡萄糖标准品醇溶液及1,鼠李糖标准品醇溶液。
展开剂:正丁醇-醋酸-水,4:1:5,。
显色剂:喷以邻苯二甲酸苯胺溶液～105?烘烤5分钟至斑点显色清晰。
4.1注意事项
,1,用石灰水调节芦丁提取溶液的PH～既可以达到碱提取芦丁的目的～还可以除去槐米中含有的大量粘液质。但钙离子浓度及pH值均不宜过高～否则多余的钙能与芦丁形成螯合物沉淀～同时黄酮母核在强碱性条件下易被破坏。
,2,用HCl调PH时～应注意PH不要过低～因为PH过低会使芦丁形成钅羊盐而使已形成的沉淀重新溶解～同时黄酮母核也会在强碱性条件下被破坏～导致收率下降。
,3,注意观察槲皮素制备过程中的实验现象。
4.2小结与讨论
本实验主要是利用芸香苷中含有较多的酚羟基～可溶于碱中～加酸酸化后又可析出芸香苷结晶的性质～采用碱溶酸沉法提取～并用芸香苷对冷、热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。芦丁可被稀酸水解～生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖～并能通过纸层析鉴定。芦丁及槲皮素还可通过化学反应及紫外光谱鉴定。通过种种方法达到实验目的。
根据本次试验汲取经验教训～以后实验一定要认真预习～不是浮于
表
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面～要真正学透、学懂～不能照本宣科～要有主观能动性～只有自己理解的、想通的才能真正记住～成为自己的东西。我们要改变学习方法～多多发挥主动性～并将这种学习方法运用到以后的其他科目中～才会事半功倍。
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