【doc】高效液相色谱法测定福多司坦口服溶液的含量、有关物质及对其稳定性的初步研究

【doc】高效液相色谱法测定福多司坦口服溶液的含量、有关物质及对其稳定性的初步研究 高效液相色谱法测定福多司坦口服溶液的含量、有关物质及对其稳定性的初步研究 药物分析杂志ChinJPharmAnal2006.26(10)——1457--—— 高效液相色谱法测定福多司坦口服溶液的含量, 有关物质及对其稳定性的初步研究 许茜,李杰,王燕,潘莹宇 (东南大学公共卫牛学院,南京210009) 摘要目的:建立一种测定福多司坦El服溶液的含量及有关物质的HPLC方法,并对福多司坦F3服溶液的稳定性进行初步研 究.方法:使用Agilent1050型高效液相色谱仪,色谱柱为DiamonsilC(150mm×4.6mm,5Ixm),流动相为重蒸水,检测波长 210nm,流速为1mL?min,柱温为40cc.结果:本法测定福多司坦浓度在1.0—500.0Ixg?ml的范围内线性关系良好, 线性方程为A=3.72十5.66C(r=0.9999,n7);重复性和中间精密度RSD均<1%;高,中,低浓度的平均加样同收率在 99.42%一100.2%之;检测限为2ng(S/N=3).结论:本方法检测褊多司坦及其有戈物质,々属性强,灵敏度高,重现性好. 稳定性研究结果 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明,福多司坦口服溶液应密封,置阴凉处保存. ;口服溶液;稳定性 关键词:高效液相色谱法;福多一J坦 中图分类号:R917文献标识码:A文章编 号:0254—1793(2006)10—1457—04 StudyondevelopmentandvalidationofanHPLCmethodfor determinationofcontentandrelatedsubstancesof fuduositanoralsolutionanditsstability XUQian,LIJie,WANGYan,PANYing—yu (PublicHeathSchool,SoutheastUnive~ity,Nanjing210009,China) AbstractObjective:ToestablishanHPLCmethodfordeterminationofthecontentandtherelatedsubstancesof Fuduositanora1solution,andthenitsstabilitywasstudiedwiththismethod.Method:AgilentHPICinstrumentwas usedwithaDiamonsilC18column(150mm×4.6mm,5m).Themobilephasewaswater;thewavelengthofthe UVabsorbancedetectorwas210nm:theflowratewas1mL?min-1andthecolumnwasmaintainedat40?.Re. suits:ThestandardCHIVewaslinearintherangeof1.0—500.0Ixg?mL, andthelinearequationwasAII3.72+ 5.66C(r=0.9999,=7).Thewithin—dayprecisionandthebetween—dayprec isionwerebothlessthan1.0% (RSD).Theaveragerecoverywerewithin99.42%一 100.2%.Conclusion:TheHPLCmethodisspecific,sensitive andreliable.TheresultsofthestabilitystudyofFuduositanoralsolutionverifiedthatitshouldbestoredinacool (:nnd;tiflnandclosed. Keywords:HPLC;fuduosita;oralsolution;stability 福多司坦(fuduositan),为白色或微黄色结晶性 粉末,无臭.在水和甲酸中极易溶解,在乙醇中极微 溶解,在乙醚和丙酮中几乎不溶;比旋度为一18.0. 至一23.0.;结构式见图1.它是一种新型的祛痰 药,属于由SSP制药株式会社在1988年创制的具有 司坦(steine)基本骨架的一类化合物,其基本作用是 杯状细胞增生抑制作用及对呼吸道的粘液,粘膜正 常状态的调节作用.该药于2001年首次在日本上 第一作者l’el:(025)83272563;E—mail:xutimige@sohu.com 市,由SSP公司,菱Welfide公司生产.预计它将 是乙酰半胱氨酸,羧甲基半胱氨酸等同类药的更新 换代产品?.目前该药存巾国尚未上市.关于其 原料及制剂中有关物质的测定及稳定性的研究,国 内外均尚未见文献报道.本文建立了一种良好的 HPLC方法,用于测定福多司坦口服溶液的含量及 有关物质,并研究了其在不同条件下的稳定性,为促 进该药在我国的研发和生产提供科学依据. 药物分析杂志ChinJPharmAnal2006,26(10) 幽1福多司坦结构 Fig1StructureofFuduositan 1仪器与试药 Agilent1050型高效液相色谱仪,Agilent色谱工 作站;福多司坦对照品(在本文色谱条件下,以峰面 积归一化法测得含量为99.52%),口服溶液空白辅 料溶液(主要为甘露糖,焦糖,苯甲酸钠,柠檬酸,香 精,纯净水等)及3批福多司坦口服溶液(5mL:0.4 g,福多司坦标示百分含量应为90.00%一110,0%, 有关物质不得过1.0%),均由江苏苏中药业集团股 份有限公司提供;重蒸水为实验室自制. 2色谱条件 色谱柱为DiamonsilC18(150mm×4.6mm, 5m);柱温40?;流动相为重蒸水,流速为1mL? min,;检测波长为210nm. 3系统适用性试验与方法专属性考察 配制浓度约为1mg?ml的对照品溶液,在本 文色谱条件下,取20L进样分析,理论塔板数按福 多司坦计算不低于5000,主峰与相邻杂质峰分离度 不低于1.5. 取本品2.5mL,置清洁具塞试管中,分别加入 0.1mol?L盐酸溶液lmL,0.1mol-L氢氧化 钠溶液1mL及30%过氧化氢溶液1mL,置于105 ?烘箱中破坏1h;另取1份于电炉上直火加热.破 坏后的液体或残渣转入100mL量瓶中,加水溶解, 定容.滤过,分别取续滤液20在本色谱条件下 测试,同时做未经破坏的本品及辅料溶液对照试验, 色谱图见图2.结果表明,本品在酸,碱,氧化,高热 条件下均有不同程度破坏,有降解产物产生,其中各 降解产物与福多司坦主峰在现行色谱条件下均完全 分离,对主峰无干扰;辅料溶液中其他物质峰对主峰 无干扰.本法专属性符合测定要求. 图2方法专属性试验色谱图 Fig2ChromatogramsofthespecificityvMid~ion A.福多司坦对照品(referencestandardoffuduositan)B.未经破坏本品(originalsample)C.热破坏本品(samplebrokenbyheat)D.酸破坏 本品(samplebrokenbystrongacid)E.碱破坏本品(samplebrokenbystrongbase)F.氧化破坏本品 (samplebrokenbyoxidation)G.空白 辅料溶液(solutionofsupplementarymaterials) 1.福多司坦(fuduositan,4.8rain) 4线性关系 取福多司坦对照品适量(约相当于福多司坦 10,00mg),精密称定,置100mL量瓶中,加水溶解 并定容至刻度,摇匀,作为储备液;精密量取储备液 药物分析杂志ChinJPharmAnal2006,26(10)一1459 1.0mL置10mL量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,作 为应用液.分别精密量取一定体积的应用液或储备 液,加水稀释,摇匀,得浓度为1.0,2.5,5.0,10.0, 50.0,100.0,500.0g?mL的测定液.分别取20 注入色谱仪,在本色谱条件下记录色谱图,以福 多司坦峰面积A对浓度c进行线性回归.结果表 明,福多司坦浓度在1.0,500.0g?mL的范围 内线性关系良好,线性方程为: A=3.72+5.66Cr=0.9999(=7) 5灵敏度 经测定,本法对福多司坦的检测限为2ng(S/N = 3);定量限为20ng(S/N=10). 6重复性试验 精密量取同一批号样品6份,依”11”项下方法 操作,分别测定标示含量.测得平均标示含量为 99.43%?0.87%,RSD为0.87%(=6).结果表 明本法重复性符合测定要求. 7中间精密度试验 在另一天,选用另一台液相色谱仪,由另一实验 人员操作,依”II”项下方法操作,分别测定同一批 号(20031225)样品6份,测得平均标示含量为 99.07%?0.8I%,RSD为0.82%(n=6).测定结 果I=j重复性试验结果比较,无显着差异,证明本法中 间精密度符合测定要求. 8进样精密度试验 取”6”项下制备的供试品溶液,重复进样5次, 测得峰面积,计算得RSD=0.I6%,表明进样精密度 符合要求. 9回收率试验 按处方量的80%,100%,120%分别精密称取 福多司坦对照品适量各3份,按处方比例精密加入 空白辅料液,溶解,混匀,分别精密取适茸(相当 于福多司坦约80,IO0,120mg),置于IO0mL量瓶 中,以下按”11”项下方法操作,记录色谱图,按外标 法将峰面积代入归方程计算,3个加标水平的平 均【旦J收率测定结果分别为99.80%,99.75%, 9976%;RSD分别为0.28%,0.38%,0.20%(n= 3). l0供试品溶液稳定性试验 取含量测定用供试品溶液1份,分别在放置0, 4,8,12h时取20L注入色谱仪,记录色谱图至主 成分峰保留时间的2倍.结果表明,福多司坦峰面 积在12h内RSD为0.44%,表明供试品溶液放置 12h内稳定. 11口服溶液的含量测定 精密称取福多司坦对照品适量,加水制成每1 mL含0.1mg的溶液,即得对照品溶液;取本品适量 (约相当于福多司坦100mg),置100mL量瓶中,加 水稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液1.0 mL,置10mL量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,即得 供试品溶液.分别精密吸取上述对照品溶液与供试 品溶液各20L,注入液相色谱仪,测定峰面积,以 外标法计算出样品中福多司坦的含量.测定结果见 表1. 表1福多司坦口服溶液的含量及有关物质测定结果(%) TablResultsofdeterminationforcontentandrelated substaricesoffuduositanoralsolutiOn 批号(LotNo.)标示量%(1abeledmnount%)响关物质(relatedsubstances) l2口服溶液的有关物质考察 取本品,加水制成每1mL中含1mg的溶液,作 为供试品溶液;量取适量,加水制成每1mL中含 0.01mg的溶液,作为对照溶液.取对照溶液20L 注入液相色谱仪,调节检测灵敏度,使对照溶液中的 主成分色谱峰的峰高为记录仪满刻度的10%, 20%.取供试品溶液20I注入液相色谱仪,记录 色谱图至主成分峰保留时问的2倍,以自身对照法 计算有关物质的百分含量.测定结果见表1. l3口服溶液稳定性的初步研究 13.1影响因素试验取1批福多司坦口服溶液, 去除外包装,分别于4500lx强光照射,60条件下 放置10d,并于第5d和第10d取样分析,考察口服 溶液的性状,色泽,澄清度,有关物质和含量(测定 方法同”II”及”I2”项),考察结果与0d数据比较. 由于本品为溶液剂,不再进行高湿试验,只做高温试 验和强光照射试验.辅料溶液与本品一并按相应要 求放置,按规定时间取样,测定本品的各项指标.结 果表明在高温60?条件下放置10d,本品有关物质 有所增加,但仍符合规定,其余各项检查指标均未_见 明显变化.强光照射4500lx条件下,本品各项检查 指标均未见明显变化.辅料溶液在上述条件下稳 定. 13.2加速试验及长期试验取3批福多司坦口服 溶液,模拟上市包装,在40cc,相对湿度为75%? 5%(在干燥器下部放置氯化钠饱和溶液)的恒温恒 湿箱中放置6个月(辅料溶液本品一并按相应要 .-—— 1460.-——药物分析杂志ChinJPharmAnal2006,26(1O) 求放置),分别于第1,2,3,6个月末,取样进行分析, 检验各项指标的结果与0月数据比较,进行加速试 验;另取3批福多司坦口服溶液,模拟上市包装,存 25?,相对湿度为60%?5%(在干燥器下部放置 亚硝酸钠饱和溶液)的恒温恒湿箱中放置l2个月 (辅料溶液与本品一并按相应要求放置),分别于第 3,6,9,12个月末,取样进行分析,检验各项指标的 结果与0月数据比较,进行长期试验.结果表明,福 多司坦口服溶液在加速试验条件下储存6个月,在 长期试验条件下储存12个月,其性状,含量,色泽, 澄清度,有关物质等各项指标均未见明显变化,辅料 溶液在相应条件下也是稳定的. 14讨论 l4.1流动相的选择因福多司坦极性较大,采用 十八烷基键合硅胶为固定相做反相色谱分离时容量 因子较小,在试验中选择流动相时曾尝试10%甲 醇,5%甲醇等,福多司坦主成分峰保留时间均小于 3min,与相邻杂质峰分离度不符合要求,后采用重 蒸水为流动相,主成分峰保留时问约为4.8min,与 相邻杂质峰分离完全,且柱效较高. l4.2检测波长的选择因福多司坦在紫外末端处 有最大吸收,经试验选择210nm为检测波长,灵敏 度符合要求,辅料成分在此波长处对主药测定无干 扰. l4.3色谱图记录时问在对本方法进行专属性考 察时发现,包括经在酸,碱,氧化,高热条件破坏过的 样品在内的各种溶液,在主成分峰保留时问的2倍 时间以后均不再出峰.因此,我们认为将有关物质 检查的色谱图记录至主成分峰保留时间的2倍,即 足以对样品的有关物质进行可靠的考察. 14.4关于稳定性试验虽然福多司坦口服溶液的 加速试验和长期试验结果表明各项指标均未见明显 变化,但影响因素试验的结果提示,其在高热条件下 有关物质有所增多,说明本品在相对较热的环境下 不够稳定.又依破坏性干扰试验的结果可知,本品 经氧化破坏严重,故本品应密封,置阴凉处保存. 参考文献 1KoichiTakahashi,Nobuhisa1wase,Masagolshikawa,eta1.Effectsof fudosteine,anewcysteinederivative,onairwaysecretioninrabbits andrats.FoliaPharmacoln(NipponYakurigakuZasshi),2000, 116(6):371 2ChP(巾国药典).2000.VolII(二部):Appendix(附录)197 (本文于2005年6月30日收到)