细胞生长曲线绘制实验
报告
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MTT法测定细胞生长曲线
MTT法测定细胞生长曲线
1、取生长状况良好的细胞，常规消化制成单细胞悬液并计数，调整细胞成六个浓度梯度，依次为:5x10、1x10、2x10、3x10、4x10、5x10/ml，均匀接种细胞于96孔细胞培养板，每孔加细胞悬。
液200ul，每个浓度组设6个复孔,共接种7块培养板，37?、5%C02浓度，饱和湿度培养箱中连续孵育24/48/72/96/120/148/172
小时后。
2、每孔加入20ulMTT溶液(smg/m1用PBSph=7.4配)，继续孵育4h后终止培养。
3、快速翻转培养板,弃去上清液,每孔加入150ulDMSO,振荡10min，使MTT蓝紫色结晶完全溶解。
4、用酶联免疫检测仪于490nm处检测各孔的吸光值(OD值)，并以未接种细胞只加培养基孔的吸光值为空白对照调零，取6孔平均值。
5、实验重复3次，以培养“时间”为横轴，“吸光值”为纵轴绘制细胞生长曲线。 344444
篇二:细胞生长曲线的测定
(一)细胞生长曲线的测定(细胞计数法)
1(取生长良好接近汇合的细胞，用胰酶消化，用新培养基制成
细胞悬液后计数(见
四、细胞传代培养的实验步骤)。如是非粘壁细胞，则离心弃旧培养基后，换上一定量的新鲜培养基然后制成细胞悬液计数。
2(根据细胞计数结果按每个小方瓶5×104,mL作传代培养接种细胞，共接种21瓶细胞。
3(24 h后开始计数细胞，以后每隔24 h计数一次，每次取3瓶细胞，分别进行计数。计算平均值。连续计数7 d。
4(根据细胞计数结果，以单位细胞数(细胞数,mL)为纵坐标，以时间为横坐标绘制生长曲线。(细胞计数方法请参照实验三)
(二)细胞生长曲线测定(MTT法) 1(制备1 mL细胞悬液。空白对照以1 mL培养基代替细胞悬液。加入0(1 mL MTT于37?孵育4 h。使MTT还原为蓝紫色甲月赞结晶。
2(加1 mL DTW脱色液，37?至少静置30 min(甚至过液)，使甲质颗粒充分溶解。
3(吸取200 μL该溶解液至96孔板孔中，在酶标仪上读取OD值，检测波长570 nm，参考波长630 nm。
4(每隔24 h测量一个点，每个点为3个平行样品的平均值。
(二)细胞蛋白电泳
一.细胞总蛋白抽提 细胞裂解液
三去污裂解液:50 mmol/L Tris-cl (pH 8.0)，150 mmol/L NaCl，0.2 g/L叠氮钠，1 g/LSDS，100 mg/L Aprotin，10 g/L NP-40，5 g/L去氧胆酸钠，100 mg/L 苯甲基磺酰氟(PMSF)
总蛋白抽提程序:
1.PBS洗细胞3 次
2.加入裂解缓冲液(1.5x10 6 个细胞大约加入100μL 裂解液，或100ml细胞瓶中加入100μL 裂解液)，冰上放置20min
3.收集裂解液
4.离心，12000转，2~10min
5.吸取上清，蛋白定量，分装，保存在-78度备用。
试剂:
1. 30% 聚丙烯酰胺:29g 丙烯酰胺，1g N,N'-亚甲双丙烯酰胺，100ml 水，0.45um 滤膜过滤，棕色瓶，室温保存
2. 10% 过硫酸铵:1g 过硫酸铵，10ml 水，4?保存
3. 10% SDS:100g SDS，1000ml 水，68?助溶，pH 7.2
4. TEMED:lml TEMED，99ml 水，棕色瓶，4?保存
5. 5X Tirs-甘氨酸电泳缓冲液:15.1g Tirs碱，94g 甘氨酸，50ml 1(来自:WwW.xIelW.cOm 写
论文
政研论文下载论文大学下载论文大学下载关于长拳的论文浙大论文封面下载
网:细胞生长曲线绘制实验报告)0%SDS，1000ml 水，使用时配制成1X
【操作步骤】
l.将电泳槽玻璃板洗净，吹干，安装好;
2.用1,的琼脂糖电泳缓冲液(1g琼脂糖溶于100ml电泳缓冲液)封严玻璃板的边和底(保证不漏胶);
3.配分离胶，将配好的分离胶立即倒入凝胶槽内，至凝胶槽高三
分之二处，加入蒸馏水密封。待胶凝固后，约需 30min，倒掉水，用吸水纸吸干;
4.配浓缩胶，将配好的浓缩胶立即倒入凝胶槽内(以插入梳子不溢出为宜)，插入梳子;
5.待胶凝固后，拔出梳子，加入电泳缓冲液(淹没胶，但不高于电泳槽):
6.样品处理:取标准蛋白或样品20μl，加入20μl样品缓冲液，混匀，100?水浴加热3~5min，然后加入10μl溴酚兰溶液(0.05,)，混匀;
7.加样:将处理好的样品10μl加入到凝胶孔中，连接电泳仪;
8.电泳:打开电源，调整电压至100V，开始电泳，待样品全部进入凝胶后，将电压调至120V，待指示剂(溴酚兰)到达凝胶的底部距离下缘1cm时停止电泳，取下玻璃板，小心地把其中一块玻璃板从凝胶上取下来，测量分离胶的长度及分离胶上沿至溴酚蓝带中心的距离，取出分离胶(注意保持胶的完整性)
篇三:大肠杆菌生长曲线实验报告
一、实验
方案
气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载
设计
领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计
二、实验报告
三. 实验
总结
初级经济法重点总结下载党员个人总结TXt高中句型全总结.doc高中句型全总结.doc理论力学知识点总结pdf
浙公网安备 33021202002483