分光光度法同时测定叶绿素a和b的含量

一 ． c 雅 ， b． ． ， I ’ ． 技术开发 ． 分 光 光 度 法 同 时 测 定 叶 绿 素 a和 b的 含 量 M ASIl】R ⅥE OF CHLoRO删 L A AND B BY SPECIROPj}Ia1D 珏 RY 邓卫平 e init tk uae 0f刚ti啪 l础 l_嗽 im ion一 hot。n哪t ／／ n壕Ism the content of chlorophyl and chlorophyl b．in the needle of Korean pine at the 鞲me tint．The article also discusses the way to process the 1 b data by ming microcomputer． 本文首次用多波长线性回归一分光光度法同时测定红橙橙针中叶 姆童 a和叶擐素 b的含 量。讨论了用徽机处理实验致据的方法。 l 仪器与试剂 DU一7型分光光度计(美国) 眦 一ALrr一0KS—KT—P全 自动 凯氏定 氮 仪(日本)；98％、I-~O,(AR)、丙酮(AR)、95％乙醇 R)、氯仿( R)；石油醚3o～ 60℃沸程等． 2 实验 21 标准样品原液的爿备 以新鲜菠菜叶为原料，参照文献【l】的方法进行． z2 原液浓度的 定 将一定量的叶绿豢 a、叫绿 素 b的原液。用氯 仿、水和氯化钠水溶液依次洗涤，分层，分离．用 自动 定氮的方法，测定原 液的浓度． 自动定氮的方法及 条件参照文献【2j进行．测定结果如下： 原液叶绿素 a的浓度 0．1697 m m 原液叶绿素 b的浓度 0．1740酬 2．3 标准溶液系列的配制 以 95％ 乙醇为溶齐哼，定容，配制后得 标准 溶液 (见表 1)． 囊 l 振准溶液系列 序号 叶绿素 a(n1g／咖) 0．0085 0．0339 0．0509 0．0679 0．0849 叶绿素 b(mR／m]) 0．0087 0．0348 0．0522 0．0696 0．13．92 2．4 标准溶液系列吸光度(ABS)的测定 对于不同的标准溶液系列，在波长 600～ 690／~n 范围内，每隔 2nm,测 1个 ABS值． z5 红松松针 测定 取0．52l 鲜松针碎段Omm左右，试样采集见 文献【2】)，放人研钵，加碳酸镁和丙酮，研磨至丙酮 《化学工程师>>3／1994(总第4l期) 蒸发干，用 95％ 乙醇覆提色素，最后定容至 50．00m1． 在 600～ 690nm区同，每隔 2nm。ill ABS值． 3 数据处理 根据标准样品的ABS值 定可知，叶绿素a的量大 ABS值在OS~n,(95％ 乙醇溶剂，下同)；叶绿素b在 650ran．最大 吸收峰重叠严重，用一般方 法已无 法 理．本文用多波长线性回归一 徽机处理数据，其 原理简述如下： 根据Beer定律和吸光度加合原理，光程 为 Icm 时，对两组分混合物来说有： ／a,--C。+ + )．C 或 A =C2+ +a,／akcI其中： A。：混合物在波长 i处的总吸光度； q，a2：分另日为组分 l，2在波长 f处的吸光系数： C。，C2：分别为组分 l，2的浓度 ． 将 (或 A,／o0及 (或 q 看作是直线回 归方程中的因变量和 自变量，则通过一元线性 回 归 计算就可以求出 C．与 G． 为提高精确度，可选取 q和 中平均值较大者 作为除数因子． 上徽机用 B^ lsIC语言． 4 结果 相关 系数 R=0．9938，叶绿素 a，叶绿素 b含量 的 测定结果如表 2所示． 裘 2 叶绿蠢 I’叶绿蠢 b含■ 定翁暴 · l5 维普资讯 http://www.cqvip.com 一 ． 技术开发 ． 锅 ， ，觚 金 属 有 机 物 合 成 实 验 中 的 几 点 经 验 ROI 】C1[1DN OF SOM哐 EXPERⅡNCE 卫N s． 1}lIⅡl(： EⅡ咂R Ⅱ OF 0RGANO珊 AII C CoM 0U 巾S I 马东井 王玉杰 、^』王振荣 曹金方 一 ～ 饵 A simplified method of preparaton of anhydro~ rareearth element 0fnes'and the appara- tus and operation methods of mtration,d i1la￡-0n’矗tmctic'n in purif~i nitrosIm am int~ luc．zd． 本文介绍了简便制备无永氯化稀±的方法，和在高纯氮条件下进行过滤、蒸馆、萃取等装置 及操作。 由于绝大多数金属有机化合物对空气和水分极 为敏感，因此，这类化合物的合成需在无水无氧条件 下进行，所 以金属有机化合物 的合成与一般有机化 合物的合成在实验仪器和操作上就有所不 同．近几 年，我们一直从事稀土金属有机化合物的研究，在金 属有机化合物合成实验方 面积累 了一定的经验，在 此笔者提出几点改进的实验方法。 l 无水氯化稀±的爿；l备 于100ml梨形瓶中加入20ml浓盐酸 (A．R)和 15rrd 5 讨论 有关植物色素的测定，从文献报道看有 导数光 谱法【3】，荧光分光光度法【4】、 经典的联立方程法 【2】．本文用多波长线性回归法同时测定叶绿素 a与叶 绿素b尚未见文献报道。 联立方程法与多波长线性回归法都可用来同时 测定多组分体系，前者的特点是 ．rfl=n。后者是 m>n (m为设立的方程数；13为混合物中组分数)．它们都 受定量峰 (一般选最大吸收峰)位置选择的影 响。尤 其是前者，当定量峰有重叠，结果可能误差很大，甚 至不能实际应用．而后者可通过增加 m改善效果， 当m数 目适当时，个别点波长位置选择不 当对总的 结果影响很小，这就避免了经典法中由于定量峰选 择不 当而造成的较大偏差 。本文中定量峰的最大 吸 收处仅 相差 14rim。重叠程 度很大 (松针浸提 液在 600～ 690rim范围内只能看到 1个 ．车1。应用多波长 ． 16 ． 蒸馏水，称取 log氧化稀土 (99．9％1分批加入酸 中， 氧化稀土与酸完全反应并溶解，再加入 15g氯化铵 (A．R)，加热使其完全溶解．将此溶液转入蒸发皿 中，在通风橱内置于电炉上蒸发至于，将残余固体钧 研细倒入 100rnl(24#)圆底烧瓶中，装入处理装置(见 图 1)，将 圆底烧 瓶砂 浴，冷 阱 加 入 千 冰。在减 压 266．644～ 399． 下加热 (45o一500℃ )瓯 氯 化铵 完全升华至管壁上。然后充氯、封}Ij，待冷却后，将得 到的无水氯化稀±转入充氮的抽气榘形瓶 中，研细 备用．一般此方法可得无水氯化稀土 l2g左右，收 线性回归法得到了很好的结果 (相关系数为 0．9938． 根据文献【6】可知，在显著水平为 0．05时，自由度为45 时相关系数 为 0．288时，则线 性关 系成 立，本实 验 m=46'故 自由度为 46～2=44,所以相关系效为 0．9938 是相当不错的结果)。本文可不径物理或化学方法 分离，一次检出叶绿素a和叶绿素 b． 参 考 文 献 1 (苏 )XH波饮诺克著，植物生物化学分析方法，科 出 版社。】976 2 邓卫早硕士论文。东北林业大学。1959 3 C 91．203 88o P 4 黄贤智等，分析化学．19g7，4，293 5 ．黄贤智等。高等学校化学学报 ，1987(5)：427 6 鞠正卫，陈文苗鳊，概事与数理坑计，：lI|龙江科技 出 版社。1984 《化学工程师)>3／1994(总第4l期) 维普资讯 http://www.cqvip.com