聚酰胺柱层析分离姜酚类物质的效果

工 艺 技 术 聚酰壤撞 析 离萋酚类物质 (上海元祖食品有限公司，上海 201703) (暨南大学理工学院食品科学与 工程 路基工程安全技术交底工程项目施工成本控制工程量增项单年度零星工程技术标正投影法基本原理 系，广州510632) 籀 耍 ：姜酚是生姜中主要的辣味物质，具有显著的抗氧化效果和 多种药理作用：本文尝试以硅胶干柱和聚酰胺柱层析对 粗姜酚进行分离，结果显示 ，在 固定相为聚酰胺的柱上 ， 以10％~ ()％乙醇溶液为流动相，可以将其分离= 关麓词：姜酚 ，聚酰胺，乙醇，分离 Abstract：Gingerols is fhe main pungent constituenf In ginger． which has obvious antioxidanf effecf and other pharmaceutial properties This research Is managed to separate crude gingerols by silica geI dry column chromatography and polyamide Column Chromatography The results indicated fhaf crude gingerols COUld be separated through plyamide column chromatography with solvenf system of 20％-50％ ethanol l y words：gingerols；polyamide；ethanol；separate 中图分类号：TS201．1 文献标识码 ：A 文 章 编 号 ：10o2—0306(2005)01-0099—04 生 姜 具 有 药 用 、调 味 等 作 用 ，应 用 于 食 品 、医药 、 化 妆 品 等 行 业 ，它 是 卫 生 部 首 批 公 布 的 药 食 兼 用 的 植 物 资 源 之 一 。 生 姜 中 的 抗 氧 化 成 分 姜 酚 类 物 质 具 有 止 呕 、抗 炎 、利 胆 、护 肝 、保 护 胃 黏 膜 和 抗 溃 疡 、抗 肿瘤 、强心 、杀菌 防腐 等作用【l-91。研究 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明，从生姜 中 分 离 得 到 纯 姜 酚 难 度 很 大 ， 即使 分 离 出 毫 克 级 的 纯 姜 酚 往 往需 要 用 乙 醚 、正 己烷 等 自’机 溶 剂 和 其 他 昂 贵 的 材 料【 “l一但 是 考 虑 到 姜 酚类 物 质 结 构 和性 质 相 近 ，所 以 如 果 找 到 一 种 提 取 粗 姜 酚 的 快 速 、方 便 、廉 价 、低 污 染 、安 全 的 提 取 分 离 方 法 ，对 于 T业 化 生 产 粗 姜 酚 有 着 积 极 的参 考 意 义 。 生 产 的 粗 姜 酚 可 以作 为 食 品 添 加 剂 使 用 或 者 为进 一 步 研 究 提 供 试 材 。本 文 就 是 基 于 以 上 考 虑 而 对 聚 酰 胺 分 离 粗 姜 酚 展 开 的 研 究 一 收稿 日期 ：2004—06—23 ’通讯联系人 作者简介：柳乃奎(1976-)，男，山东农业大学食品学院硕士研究生 主要从事天然产物提取方面的研 究 基金项 目：国家高技术研究发展计划委员会专项经费和留学回国人员 科研启动 费资助一 柳乃奎 黄雪松 1 材料与 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 1．1 材料与设备 硅 胶 G 青 岛 海 洋 化 工 厂 ； 柱 层 析 用 聚 酰 胺 浙 江 省 台 州 市路 桥 四 甲生 化 塑 料 厂 ； 香 草 醛 化 学 纯 ； 钨 酸 钠 、钼 酸 钠 分 析 纯 ；Folin一酚 试 剂 按 照 文 献 配 制 I；姜 油 树 脂 购 自芜 湖 广 厦 生 物 工 程 有 限 公 司 玻 璃 柱 I R=3．82em，L=82em；玻 璃 柱 Ⅱ R= 0 9era，L=20em；RE一52AA 旋 转 蒸 发 器 上 海 亚 荣 生 化 仪 器 厂 ；TH一300梯 度 混 合 器 、DBS一100电 脑 全 自 动 部 分 收 集 器 、恒 流 泵 上 海 沪 西 分 析 仪 器 厂 ；752 紫 外 可 见分 光 光 度 计 上 海 市 第 三 分 析 仪 器 厂 。 1_2 实验方法 1．2 l 香 草醛 标 准 曲线 的制 作 参 见 文 献【13】。 1．2．2 分 离 方 法 姜 油树脂一硅胶 千柱层析一 聚酰胺柱 常压连续梯度洗脱 1．2-7_l 硅 胶 干 柱 层 析 将 硅胶 G 323g装 入 玻 璃 柱 I中 ，装 柱 后 高约 70em，真 空 泵 抽 气 后 下 降 至 61t2m= 然 后 称 取 姜 油 树 脂 8．07g，溶 于 35mL丙 酮 ，再 加 入 l2．1lg硅 胶 G拌 匀 ，在 旋 转 蒸 发 器 上 挥 去 丙 酮 ，得 到 吸 附 着 姜 油 树 脂 的 拌 样 硅 胶 ，然 后 加 到 柱 中 ，上 面 以 滤 纸 盖 住 ，此 时 柱 内 硅 胶 总 长 63cm：以 乙 醚 ：正 乙烷 = 7：3的 流 动 相 洗 脱 ，洗 脱 液 前 沿 流 至 柱 底 时 ，停 止 洗 脱 、将 柱 里 的 硅 胶 完 整 取 出 ，每 隔 3．5era 切 分 一 段 ，共 得 到 l8段 ，从 柱 底 开 始 到 柱 顶 编 号 1～18，晾 干 ，分 别 盛 在 l8支具 塞 试管 中 ，低 温 下 保 存 ： 1．2．2．2 硅 胶 干 柱 层 析 点 板 从 这 l8段 中 各 取 0．5g分 别 加 入 1．5mL 丙 酮 ，振 荡 后 取 上 清 液 在 硅 胶 薄 板 上 点 样 ；同 时 取 姜 油 树 脂 一 滴 ，用 适 量 丙 酮 溶 解 后 ，也 在 该 薄 板 上 点 样 ；之 后 ，用 乙 醚：正 己烷 =7：3的流 动相 展 开 ；用 3％三 氯 化 铁 的 乙醇 溶 液 显 色 。 抗 氧 化物 质 含 量 测 定 (相 当 于 香 草 醛 的 量 ) 从 维普资讯 http://www.cqvip.com 工 艺 技 术 l8段 硅 胶 柱 中各 称 取 0．1g，加 入 l8mL丙 酮 ，50℃水 浴 lh，冷 却 后 定 容 至 25mL一分 别取 lmI ，按 照 文 献 方 法 0测 吸 光 度 ，并 根 据 香 草 醛 标 准 曲线 汁算 出 相 当 于 香 草 醛 的量 ，选 出 含抗 氧 化 物 质 集 中 的 7，8，9，l0，ll 段 来 进 ⋯ 步 细 分 1．2．2．3 聚 酰 胺 柱 连 续 梯 度 洗 脱 流 动 相 采 用 不 同 浓 度 的 乙 醇 先 利 用 一 个极 性 范 变 化 较 大 的 洗 脱 系 统 作 一 尝 试 ，根 据 出现 峰 的情 况 ，逐 步缩 小 极 性 范 围 的 变 化 ，确 定适 宜 的 洗 脱 浓 度 一 柱 材 装 柱 量 取 聚 酰 胺 27em ，用 乙 醇 浸 泡 6h， 抽 滤 ，抽 滤 时 用 乙 醇 淋 洗 ；然 后 ，将 这 些 聚 酰 胺 用 真 蒸 发器 挥 丁其 中 的 乙 醇 ：将 这 些 聚 酰 胺 装 入 件 Ⅱ ， 真 窄 泵 从 柱 底 抽 气 ，使 其 中的 聚 酰 胺 紧实 一 样 品 装 柱 分 别 从 7，8，9，l0，ll段 称 取 0．05g， 加 入 适 量 丙 酮 溶 解 ，振 荡 ，静 置 6h，抽 滤 ，在 滤 液 中加 入 0．1g聚 酰 胺 。 然 后 ，在 真 空 蒸 发 器 上挥 下 丙 酮 ，将 吸 附 着 姜 油 树 脂 粗 分 离 物 的 聚 酰 胺 加 到 柱 Ⅱ中 ，其 上 盖 一 滤 纸 洗 脱 分 别 以 下 列 洗 脱 系 统 进 行 连 续 梯 度 洗 脱 ，接收管 每管 接约 lOmL洗 脱液 ：洗 脱系统 一 35e／c ～ 85％ 乙 醇 500mL； 洗 脱 系 统 ■ 37％ ～47％ 乙 醇 500mL；洗 脱 系 统 i 20％～50ck乙 醇 600mL；洗 脱 系 统 阴 20％～40％乙 醇 400mL：洗 脱 系 统 五 37％～4l％ 乙 醇 500ITIL 1．2．2．4 聚 酰 胺 柱 常 压 连 续 梯 度 洗 脱 液 中抗 氧 化 物 质 含 量 测 定I” 从 每 管 洗 脱 液 中取 1．0mL，按 顺 序 向 各 试 管 中 加 入 5mLFolin-酚 试 剂 甲 混 匀 ，48℃ 水 浴 30min，加 入 0．5mLFolin-酚 试剂 乙 ，摇 匀 ，48℃水 浴 30min 在 680nm 比色 测 吸 光 度 ，以 0D值 为纵 坐标 ， 以 乙 醇 浓 度 为 横 坐 标 对 各 次 洗 脱 结 果作 图 2 结果与分析 2．1 香草醛标准曲线 以 所测 的 OD值 为横 坐 标 ，香 草 醛 的量 (mg／mL) 为 纵 坐 标 作 图 ，其 同 归方 程 为 y=O．0l6469x-0．00l45 fr=-0．99l944) 一 0．0l4 { 0．0l2 < 0 0l 0．oo8 0．O06 垂。0．．oo00 4 U．1 l4 U2j 7 U．j ’4 U_424 U49 U536 0 0064 0．748 U．832 反应终点的OD值(680n,n) 图 l 香草醛标准曲线 2．2 干柱层析结果 2．2．1 硅 胶 丁 柱 层 析 分 离 中 所 得 l8段 硅 胶 中 的 姜 油 树 脂 的 硅胶 薄 板 层 析 图 2 L}I(流 动 相 是 乙 醚 ：正 己烷 =7：3)，点 0是 姜 油 树 脂 ，l～l8点 是 对 应 的 硅 胶 段 ，4～6点 的 Rf值 =0．78，而 8～l0点 的 R r值=0．47，8～ l0点 口尝 有 辣 味 ，根 据 文 献 【l4】，可 以 判 断 其 中 含 姜 ． 堕 酚 类 物 质 · 一 一 ’ 嗜 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 l0 ll l l3 l4 l5 l6 l7 l8 0 图 2粗分离中所得 l8段硅胶中的姜油树脂的 硅胶薄板层析图谱 2．2．2 所测 得 的 l8段 硅 胶 中 的抗 氧 化 物 质 从 图 3 叮 以 看 出 ，8～ll段 分 中 抗 氧 化 物 质 含 量 最 高 一 因此 ， 在 这 些 段 分 中 进 一 步 分 离 抗 氧 化 成 分 ： l 2 3 4 5 6 7 8 9 l0 ll l2 l3 l4 l5 l6 l7 l8 硅 胶段 (1～l8) 图 3 18段硅胶中的抗氧化物质含量 2．2．3 不 同浓 度 乙 醇 连 续 梯 度 洗 脱 效 果 2．2．3．1 35％～85％乙醇 洗 脱 效 果 见图 4 ： 1．5 l 0．5 0 — 35 38 4l 44 47 50 53 56 59 62 65 68 7l 74 77 80 乙醇浓度(V／V) 图 4 35％～85％乙醇洗脱效果图 从 图 4可 知 ，洗 脱 液 中 主 要 含 有 三 类 抗 氧 化 物 顷 ，在 浓 度 达 到 大 约 50％之 后 曲线 平 缓 ，可 以认 为 抗 氧 化 物 质 已摹 本 洗 脱 完 毕 。 2．2-3．2 37％-47％乙醇 洗 脱 效 果 见 图 5= 1．6 f 一 = 、C 一 = 1．4 1．2 1．0 0．8 0．6 0．4 0．2 0．0 37 39 4l 43 45 乙醇浓度(V／、 ) 5 37％～47％乙醇洗脱效果图 从 图 5可 以 看 到 ．前 两 种 组 分 没 有 分 离 开 ，而 且 洗 脱 峰 值 出 现 早 ，是 因 为 乙 醇 起 始 浓 度 高 = 另 外 ，在 乙 醇 浓 度 还 未 达 到 42％时 ，三 种 主 要 抗 氧 化 组 分 已 洗 脱 完 毕 。 一 i一 窭崔 0 电 一 ，一年 ～ 一一 ≤ 维普资讯 http://www.cqvip.com 2．2-3．3 20％～50％乙醇 洗 脱 效 果 图 6 0．8 { 赛 O．5 O．4 逗 0 ．3 宝 0．2 一 O．1 — 0 量 o 0 著0 n B 26 Zl n 5l 乙醇浓 度 (V／V) 图 7 20％～40％乙醇洗脱效果图 图 7中 ，可 能 因 为 乙 醇 浓 度 低 而 没 有 达 到 第 三 种 物 质 所 需 要 的 条 件 ，组 分 三 没 有 洗 脱 下 来 ，而 且 各 峰 峰 形 比较 宽 。 2I2_3．5 37％-4l％乙 醇 洗 脱 效 果 见 图 8。 从 图 8可 以 看 出 ，三 种 组 分 也 可 以分 离 ，但 组 分 二 与 组 分 三峰 形 较 宽 ，不 能 实 现 6-效 的 分 离 。 ， 、 2．0 l 1．5 0 兽 1．0 逛 0．5 尝 0．0 一 0．5 p7 37．5 38 38．5 39 39．5 40 40．5 41 乙醇浓度(V／V) 图 8 37％～41％乙醇洗脱效果图 2．2．3．6 五 种 洗 脱 系 统 的 比较 见表 l。 表 1 五种洗脱系统的比较 表 l中 ，R 、R23分 别 为 组 分 一 与组 分 二 、组 分 二 与组 分 三 的 分 离 度 。欲 利 用 色谱 将 两组 分 完 全 分 开 ， 首先要 两组 分的色谱 峰相距要 远 ，其 次是两组 分色 工 艺 技 术 潜 峰 要 尽 可 能 地 窄 一以上 五 种 洗 脱 系统 中 ，洗 脱 系 统 2O％～5O％ 乙醇 x,t于 最 主 要 的抗 氧 化 物 质 的 分离 效 果 最 好 3 讨论 流 动 相 为 20％～50％ 乙 醇 的 洗 脱 结 果 中 出 现 三 个 峰 ．三 个 峰 所 在 处 的 乙 醇 浓 度 分 别 为 27％ ，32％ ， 38％左 有 ，其 中 第 一 个 峰 最 大 ，从 各 种 姜 酚 构 成 的 含 节 和峰 面 积 及 图 l综 合 考 虑 ，推 测 第 一 、二 个 为姜 酚 类 ，第 三 个为 双 芳 环 类 一由于 洗 出三 个峰 的 溶 剂 的极 性 逐 渐 降 低 ．所 以 以 亡推 测 似 乎 与 HiroeI 提 到 的 “双 环 环 庚 烷 类 极 性 比单 芳 环 类 姜 酚要 高 ” 这 一结 论 矛 晤 但 是 本 沦 文的 这 一 推 测 是 基 于 以 下 理 论J 61：即聚 酰 胺 层 析 并 不 是 完 全 按 照 极 性 规 律进 行 ， 在 水 溶 剂 系 统 为 流 动 相 时 往 往 按 照 “氢 键 吸 附 ”原 理 ：a．形 成 氯键 的 基 团 越 多 ，则 吸 附 能 力 越 强 ；b．芳 香 核 、共 轭 双 键 多 者 吸 附 力大 ，少 者 吸 附 力小 。 根 据 b．可 知 ，单 芳 环 姜 酚 的 吸 附 能 力小 于 双 芳 环 姜 酚 ，因此 ，在 本 研 究 中第 一 、二 峰 应 为姜 酚类 4 结论 本 研 究 发 现 ，利 用 聚 酰 胺 为 固 定 相 ．2O％～5O％乙 醇 溶 液 为 流 动 相 可 以将 姜 油 树 脂 中 总 姜 酚 较 好 地 分 离 ．这 对 于 T 业 化 生 产 粗 姜 酚 具 有 积 极 的 参 考 意 义 一 参考文献： 【l 1 Cornell D W．Natural pungent compounds in examination of the gingerols，shogaols，paradols and related compo unds by TLC and GC[J]．Chromatography，1972．67：29-35． 【2】 Yang Y ，Kinoshita K， Koyama K，et a1． Nowel Experimental model using free radical—induced emesie for sun eying anti—emetic compounds from natural sources【Jl' P1anta Med．1 999．65：574～576． 【3】 末川守．关于生姜药理学的研究(第Ⅳ报 )6一姜醇对于花 生四烯酸代谢的作用【Jl'国外医学中医中药分册。1987．9(31：160～ l62． 【4】 Yoshikawa M，Yamaguchi S，Kunimi K，et a1．Stomachic principles in ginger III an anti——ulcer principle 6 —— gingesulfonic acid， and three monoacyldigalactosyl- glycerols， gingerglycolipids A，B，and C，form Zingiber Rhizoma Originating in Taiwan[J]．Chem Pham~Bull，1994，42(6)：1226-1230． 【5】 池田正树 生姜的药理学的研究(第 1报)一辣味成分(6)一 姜酚 ，(6)一姜烯酚的一般 药理作 用【Jl'国外医学中医中药分册． 198l(21：ll7～ll8 【6】 Surh Y J．Antitumor promoting potential of selected spice ingredients with antioxidative and anti—inflammator activities：a short review[J]．Food and Chem Toxicolo~'，2002．40：1 09 l～1 097． 【7】 Kobayashi M，lshida Y，Shoji N，et a1．Cardiotonie action of 【8】一gingerol an activator of Ca 一 pumping adenosine 维普资讯 http://www.cqvip.com 工 艺 技 术 抗 淀粉一 给 德 (长春工业大学生物工程学院，长春 130012) (长春工业大学化学工程学院，长春 130012) ■ 要 ：以玉米淀粉为原料 ，经化学合成 、湿热、冷却、酶解等工艺 处理，研制出一种新型的膳食纤维——抗性淀粉(RS)， 其产品色；睾好、13"味纯正 ，收率达到 75％。RS的含量达到 45％。 关键词 ：抗性淀粉(RS)，膳食纤维，玉米淀粉 中图分类号：TS236．9 文献标识码：A 文 章 编 号 ：1002—0306(2005)01—0102—02 RS是 英 文 Resistant Starch的 简 称 ，l982年 ，英 国 Eglyst等 在 进 行 膳 食 纤 维 的 研 究 中发 现 并 命 名 了 “抗 性 淀 粉 ”Ul。 l992年 ，联 合 国 粮 农 组 织 (FA0)根 据 Eglyst和 欧 洲 抗 性 淀 粉 研 究 协 作 组 (EURESA)的 建 议 ，将 RS定 义 为 ：“健 康 者 小 肠 中 不 吸 收 的淀 粉 及 其 降 解 产 物 ”I3l。 RS不 在 小 肠 内 吸 收 ，而 进 入 大 肠 被 细 菌 发 酵 ，使 抗 性 淀 粉 的 吸 收 延 迟 ，餐 后 血 糖 升 高 的 幅 度 降 低 [21，具 有 刺 激 消 化 液 分 泌 和 促 进 肠 道 蠕 动 ．缩 短 食 物 通 过 肠 内 时 间 的 作 用 ，有 利 于 消 化 、吸 收 和 排 便 。 它 可 以螯 合 机 体 胆 固醇 ，吸 附 胆 汁 酸 ，降 低 胆 固 醇 和 甘 油 三 酯 溶 解 ，阻 止 其 吸 收 ，并 有 利 于 调 节 胰 岛 收稿 日期 ：2004—06—23 作者简介：邱芳萍(1955一)，女，教授 ，研究方向：功能食品、保健食品 及保健药品等 邱芳萍 赵 伟 陶朝阳 素 的 分 泌 ，是 糖 尿病 患 者 理 想 的膳 食 RS抗 性 淀 粉 的 发 现 和 研 究 是 近 年 来 碳 水 化 合 物 与 健 康 关 系 研 究 中 的 一 项 最 主 要 的成 果 一由此 可 见 RS研 究 和 开 发 的 莺 要 性 和 其 深 远 意 义 。 1 材料与方法 1．1 材料与设备 玉 米 淀 粉 分 别 为 网家 企 业 生 产 ，并 对 不 同 厂 家 生 产 的 淀 粉 品 质 进 行 理 化 分 析 及 比较 ；无 离 子 水 其 电 导 率 为 l～3~s／em，符 合 食 品 级 卫 生 标 准 ；Ot一 淀 粉 酶 (Aol64)、蛋 白 酶 (P39l0)、糖 化 酶 (A99l3)、 无 机 盐 、碱 金 属 和 碱 土 金 属 、合 成 剂 Sigma公 司 ； 抑 制 剂 。 电 导仪 、754分 光 光 度 计 、高 压 蒸 煮 器 上 海 ；震 荡 恒 温 水 浴 锅 60～l00℃ ，上 海 ； 特 制 挤 压 机 自 制 ；水 处 理 装 置 宜 兴 ；喷 射 液 化 器 lt／h，美 国 ；淀 粉 调 浆 罐 M103-030，德 中设 计 ；合 成 反 应 器 0．3m ， 上 海 ；精 密 PH计 PHS一3C，上 海 。 1．2 实验方法 1．2．1 原 料 对 比实 验 其 测 定 指 标 如 下 ： 1．2．1．1 感 官 指 标 白 色 粉 末 ，具 有 光 泽 ；具 有 玉 米 淀 粉 固有 的 气 味 ，无 异 味 。 1．2．1．2 理 化 指 标 分 析 结 果 见 表 l。 — 一 — 一 — 一 — 一 — 一 — ·卜 一+ 一+ —·卜 一+ 一+ 一+ 一+ ”+ 一+ 一+ 一+ 一+ 一+ 一+ 一+ 一+ ··+ 一+ 一+ 一+ 一+ 一+ 一+ 一+ ··+ 一+ 一+ ··+ 一+ 一+ 一+ 一+ 一+ 一+ 一+ 一+ 一+ 一+ 一+ 一+ triphosphatase of sarcoplacmic reticulum， in guinea pig atrial musle[J]．Pharmacol Exp Ther，1988，246(2)：667． 【8】 Adewunmi C O，Oguntimein B O，Fum P．Molluscicida and antischistosomal activities of Zingiber Officinale『J】．Pinta Med．1990．56(4)：374～376． 【9】 Hiserodt R D，et a1．Isolation of 6-，8-，and 10-gingemls from ginger rhizome by HPLC and preliminary evaluation of inhibition of Mycobacterium avium and Mycohacterium tuberculosis【J】．J of A c Food Chem，1998，46：2504-2508． 【10】 Hiroe K，et a1． Gingerol related compounds form the rhizomes of Zingiber officinale[J]．Phytochemi，1992，3l(5)：1783- l786． 【ll 1 Hiroe K，et a1．Cyclic diaryl heptanoids from rhizomes of Zingiber officinale『J】．Phytochem，1996，43(1)：273-277． 【l2】 韩雅珊．食品化 学实验指 导【M】．北京：农业大学 出版社． 1992．54～57． 【l3】 黄雪松，王汉中．姜辣素的测定【J】．中国调味品，1996(8)：30- 31． 【l4】 黄雪松，王建华，路福绥．姜 酚的提取 、分离和鉴定『J】．山 东农业大学学报(自然科学版)，1998(4)：5ll～5l4． 【15】 Hiroe K，et a1．Cyclic diaryl heptanoids from rhizomes of Zingiber officinale[J]．Phytochem，1996，43(1)：273-277． 【l6】 中国科学院上海药物研究所．中草药有效成分提取与分 离【M】．上海：科学技术出版社，1983．1o4～106． 维普资讯 http://www.cqvip.com