罗克沙尔固蓝- 改良KLUVER'S–髓鞘
目的:髓鞘是白色脂肪、无生命的物质存在于神经纤维周围形成一个绝缘和保护作用的鞘。
原理:罗克沙尔固蓝是酒精溶性与水溶性的阿尔新蓝极相似。对脂蛋白着染,染色机制是一种酸碱反应形成盐的过程。脂蛋白的碱基被替换成染料的碱基。
对照:正常的大脑皮质
固定:10%甲醛
技术:10μ石蜡切片。置于37℃恒温箱过夜。
设备:蒸馏水洗玻璃器皿和染色缸,60℃恒温箱。
试剂:
罗克沙尔固蓝液:
罗克沙尔固蓝Luxol fast blue 1.0 gm
95%酒精 alcohol 100.0 ml
10%醋酸acetic acid 5.0 ml
混合溶解,过滤,保存期1年。
警告:易燃性液体,避免接触和吸入。
0.05%碳酸锂:
碳酸锂Lithium carbonate 0.5 gm
蒸馏水Distilled water 1000.0 ml
警告:避免接触和吸入。
伊红Y溶液:
0.25%结晶紫:
结晶紫Cresyl Echt violet 0.25 gm
蒸馏水Distilled water 100.0 ml
10%醋酸 Acetic acid 1.0 ml
混合溶解,过滤。保存期2年。
警告:避免接触和吸入。
安全:穿戴手套、护目镜和白大衣。避免接触和吸入。在通风场所进行。
醋酸:摄入有中等程度的毒性,吸入影响靶器官为呼吸系统,对皮肤、眼睛和呼吸系统有刺激性。腐蚀性。
碳酸锂:对皮肤、眼睛有刺激性
酒精:对皮肤、眼睛有刺激性,摄入可引起胃肠刺激、恶心、呕吐、腹泻、致盲、死亡。过度吸入可能引起鼻和呼吸道刺激。
程序:
1. 脱蜡至95%酒精。
2. 罗克沙尔固蓝液60℃过夜。
3. 95%酒精稍洗。
4. 蒸馏水稍洗。
5. 0.05%碳酸锂液5 seconds.
6. 70% 酒精,10 seconds×2
7. 蒸馏水稍洗。
8. 重复 5 - 7 项直至蓝色的白质与无色的灰质对比分明。
9. 70% 酒精稍洗。
10.伊红 1 minute.
11. 蒸馏水稍洗。
12. 结晶紫1 minute。
13. 蒸馏水稍洗。
14. 95% 和无水乙醇脱水,二甲苯透明和封固。
结果:
有髓鞘神经纤维:蓝色
Neurophils pink
神经细胞:紫色
参考文献:
Sheehan D, Hrapchak B, Theory and practice of Histotechnology, 2nd
ed,1980, pp262-264, Battelle Press, Ohio
Crookham,J, Dapson,R, Hazardous Chemicals in the Histopathology
Laboratory, 2nd ED, 1991, Anatech
程序卡
罗克沙尔固蓝- 改良KLUVER'S – 髓鞘
对照:正常的大脑皮质
技术:10μ石蜡切片。置于37℃恒温箱过夜。
程序:
1. 脱蜡至95%酒精。
2. 罗克沙尔固蓝液60℃过夜。
3. 95%酒精稍洗。
4. 蒸馏水稍洗。
5. 0.05%碳酸锂液5 seconds.
6. 70% 酒精,10 seconds×2
7. 蒸馏水稍洗。
8. 重复 5 - 7 项直至蓝色的白质与无色的灰质对比分明。
9. 70% 酒精稍洗。
10.伊红 1 minute.
11. 蒸馏水稍洗。
12. 结晶紫1 minute。
13. 蒸馏水稍洗。
14. 95% 和无水乙醇脱水,二甲苯透明和封固。
结果:
有髓鞘神经纤维:蓝色
Neurophils pink
神经细胞:紫色
罗克沙尔固蓝液:
罗克沙尔固蓝Luxol fast blue 1.0 gm
95%酒精 alcohol 100.0 ml
10%醋酸acetic acid 5.0 ml
混合溶解,过滤,保存期1年。
警告:易燃性液体,避免接触和吸入。
0.05%碳酸锂:
碳酸锂Lithium carbonate 0.5 gm
蒸馏水Distilled water 1000.0 ml
警告:避免接触和吸入。
伊红Y溶液:
0.25%结晶紫:
结晶紫Cresyl Echt violet 0.25 gm
蒸馏水Distilled water 100.0 ml
10%醋酸 Acetic acid 1.0 ml
混合溶解,过滤。保存期2年。
警告:避免接触和吸入。
0.05%碳酸锂:
碳酸锂Lithium carbonate 0.5 gm
蒸馏水Distilled water 1000.0 ml
警告:避免接触和吸入。
日期:
技师:
使用限期:
罗克沙尔固蓝液:
罗克沙尔固蓝Luxol fast blue 1.0 gm
95%酒精 alcohol 100.0 ml
10%醋酸acetic acid 5.0 ml
混合溶解,过滤,保存期1年。
警告:易燃性液体,避免接触和吸入。
日期:
技师:
使用限期:
罗克沙尔固蓝液:
日期:
技师:
伊红Y溶液:
日期:
技师:
0.25%结晶紫:
结晶紫Cresyl Echt violet 0.25 gm
蒸馏水Distilled water 100.0 ml
10%醋酸 Acetic acid 1.0 ml
混合溶解,过滤。保存期2年。
警告:避免接触和吸入。
日期:
技师:
使用限期:
0.25%结晶紫
日期:
技师:
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