中药化学实验讲义-2011

中药化学实验讲义-2011 中药化学实验讲义 编著者 李文军 林玉萍 梁晓原 饶高雄 (以姓氏笔画排列) 主审:梁晓原 2008年12月 前 言 中药化学是一门运用现代化学的理论和方法来研究中药化学成分的学科，近年来发展迅速，逐步渗透到中药鉴定、中药制剂、中药炮制等学科中，在药物的研制，资源的开发、药品检验、生产过程中有广泛的应用。在课程设置上，中药化学是药学相关专业的专业课程，其基本实验技能的培养是本课程的重要组成部分。为此，我们根据本课程教学大纲的要求，结合多年来教学和科研的体会，广泛听取意见，组织编写了本实验讲义。 本教材供中药学、制药工程、中药资源与开发、中药市场营销、中草药栽培与鉴定、中草药栽培技术等专业的学生使用。这次编写的《中药化学实验讲义》主要是继承了原有讲义的精华内容，新增了部分常用试剂的配制方法，加上与之配套编写的实验报告，对学生理论联系实际起到一定的帮助和促进作用。 在编写过程中，我们参考了国内已经正式出版的中药化学提取分离、鉴定等方面的书籍和文献，在此向这些编者致以诚挚的感谢!由于编者水平有限，错误和疏漏之处在所难免，敬请各位老师和同学对本教材提出宝贵意见和建议，以便我们进一步提高和修正。 编者 2008年12月 目 录 中药化学实验注意事项„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„1 实验一 盐酸小檗碱的提取、精制及检识„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„3 实验二 苦参生物碱的提取、分离及鉴定„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„7 实验三 大黄中游离蒽醌的提取、分离与检识„„„„„„„„„„„„„„„„„„10 实验四 芦丁的提取和鉴定 „„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„13 实验五 葛根中黄酮类化合物的提取、分离及鉴定„„„„„„„„„„„„„„„ 17 实验六 黄夹苷的提取、精制及鉴定„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„ 19 实验七 薯蓣皂苷元的提取分离和鉴定 „„„„„„„„„„„„„„„„„„„„22 实验八 三七总皂苷的提取和精制 „„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„24 实验九 茴香醚的提取分离和检识 „„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„26 实验十 薄荷醇的提取分离和鉴定 „„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„ 28 实验十一 穿心莲内酯的提取分离和鉴定 „„„„„„„„„„„„„„„„„„„„30 实验十二 中药化学成分的系统预试验 „„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„32 中药化学习题集„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„ „40 附录 „„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„39 参考文献 „„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„48 中药化学实验注意事项 一 中药化学实验室 规则 编码规则下载淘宝规则下载天猫规则下载麻将竞赛规则pdf麻将竞赛规则pdf 每位参加实验的同学必须遵守以下规则: 1、要求按安排好的桌号就坐，不得随意调换座位。 2、实验前必须充分预习，搞清原理和操作。实验开始时先仔细检查安装仪器装置，实验操作要严格按操作规程进行。 3、实验进行过程中，要认真观察注意实验进程是否正常。不得做别的事或擅自离开。 4、使用电器设备时，一定要先弄清电路原理及使用方法，切忌盲目使用。电线及仪器不要放在潮湿处，不要用潮湿的手接触电器。所用电器要正确接地。 5、使用精密仪器要先了解其工作原理、操作方法、注意事项，仔细准备好再使用。 6、使用玻璃仪器动作要轻巧，以防破碎及引起外伤，加热及减压时尤要小心。 7、实验室、实验台(桌)及仪器保持整齐、清洁。公用仪器药品用后及时放回原处。 8、实验室内要保持严肃、安静，不得大声喧哗。严禁抽烟、吃饭吃零食。 9、实验结束要认真整理清洁实验台(桌)及实验用品，打扫卫生。认真检查水，电、门窗，报告带教教师后方可离开( 二 实验室安全及防护知识 中药化学实验使用很多易燃、有毒、有腐蚀性的药品试剂和易破损的玻璃仪器。实验 操作又常常在加热或减压等情况下进行，需要各种热源、电器或其它仪器，操作不慎易引 起火灾、爆炸、中毒、触电、外伤等事故。但只要加强爱护财产，注重安全的责任心。严 格遵守操作规程，提高安全意识，及时发现并消除事故隐患。 (一)防火防爆 1、使用和存放易燃有机试剂，要远离火源。 2、在回流，蒸馏易燃有机试剂时，不得直火加热(应选用水浴、油浴或沙浴，加热前要加沸石，防止暴沸。要注意是否漏气，冷凝水是否通畅(注意室内通风情况应良好。 3、蒸馏有机溶剂时，不得在开口容器中加热(亦不能用广口容器接收。极易挥发及有 1 毒刺激性溶剂尾气应用橡皮管导入水槽。 4、不可将易燃有机溶剂倒入水槽或废物缸内。烘箱内不得烘盛有有机溶剂的器皿。 5、使用电炉长时间加热，要采用隔热措施，防止桌面栲焦。 6、平时准备好灭火用具，万一不慎着火，应沉着冷静积极抢救，立即切断室内所有火源和电源，然后针对着火情况选用适当灭火器材进行处理。 (二)防止中毒和意外伤害 1、使用有毒溶剂药品时操作要严格 规范 编程规范下载gsp规范下载钢格栅规范下载警徽规范下载建设厅规范下载 ，不能洒落在容器外，勿接触皮肤、口腔，勿吸入有毒气体。 2、产生有毒、刺激性气体的操作要在通风橱中进行。 3、使用处理有毒、危险物时应先观察对其他实验人员的影响，以免伤害别人。 4、有毒物品不得随意放置，严禁乱倒。 5、保持室内通风良好。 2 实验一 盐酸小檗碱的提取、精制及检识 小檗碱又称黄连素，是在高等植物中分布比较广泛的、有明显生理活性的化学戚分。 主要存在于黄连、黄柏、三颗针等中草药中。小檗碱具有显著的抗微生物、抗原虫的作 用，临床用其盐酸盐(即盐酸黄连素)治疗细菌性感染如痢疾、急性肠胃炎、呼吸道感染 等症。 黄连为毛茛科黄连属植物黄连(Copfis chinensis Franch)，三角叶黄连(C(deltoidea C. Y. Cheng et Hsiao)或云连(C(teetoldes C( Y.( Cheng)的根茎。 黄连含有小檗碱(1)，巴马汀(2)、黄连碱(3)、甲基黄连碱(4)、药根碱(5)等生物碱，其中以小檗碱含量最高，可达10,左右，小檗碱以盐酸盐的形式存在于黄连中。 目前制药工业提取小檗碱主要以三颗针为原料。三颗针来源于小檗科小檗属(Berberis)多种植物，其根皮含生物碱约2,，主要含小檗碱、小檗胺、药根碱、巴马汀等生物碱。 RRRRR13245 ROCHCHH1CH1332_+OHN2CHCHHCHCH3333OR2 ORHCHCH3322R5CHCHCH3422OR4 HCHCHCHH5333 OMeMeO HCNNCH3OMe3 HHO O OH 小檗胺 小檗碱(Berberine)属异喹啉类生物碱，自水和乙醇中结晶出来的小檗碱为黄色长针状结晶，含5个结晶水，在100?干燥时即失去结晶水，转为棕黄色，加热至110?时，其颜色加深变暗色。mp(145?至160?即分解。 小檗碱有三种互变异构体: OOO-+OHNOHNNHOOOCHO OMeOMeOMe OMeOMeOMe 季铵碱式 醇式 醛式 3 其中以季铵碱式结构状态最稳定，可以离子化呈强碱性，用过量的氧氧化钾处理小檗 碱盐类时，可转变为醇式叔胺碱和醛式仲铵碱。季铵碱式小檗碱可离子化，故有一定亲水 性，因此，游离小檗碱能缓缓溶于水，在热水及热乙醇中易溶，而在冷乙醇中溶解度为1:100，但难溶于苯、氯仿、丙酮等溶剂。醇式和醛式小檗碱则具有一般生物碱的通性，难溶于水，易溶于有机溶剂。 小檗碱的盐类除中性硫酸盐、磷酸盐外，一般在水中的溶解度均较小。小檗碱及其盐 类在水、乙醇中的溶解度如下表: 名 称 水 乙醇 小檗碱 1:20 1:100 盐酸小檗碱(B(Cl) 1:500 几乎不溶 酸性硫酸小檗碱(B(HSO) 1:100 微溶 4 中性硫酸小襞碱(B(SO) 1:30 可溶 24 中性磷酸小檗碱(B(PO) 1:15 可溶 34 小檗碱还能与苯、氯仿、丙酮等溶剂结合成分子缩合物，有完好的结晶状态，可作为小檗碱的识别之用。如用过量的氢氧化钠处理小檗碱盐类，使其转变为醇式小檗碱，就能与丙酮缩合成结晶型的丙酮小檗碱。 OOO_+CHCOCHClN33CHNCHCO23O OHOMeOMe OMeOMe 小檗碱盐酸盐 丙酮小檗碱 一、实验目的要求 1、掌握从黄连中提取、精制盐酸小檗碱的方法。 2、学习小檗碱的化学性质与检识方法。 二、实验原理 利用小檗碱的硫酸盐在水中的溶解度较大，而盐酸盐几乎不溶于水的性质，先将药材中的小檗碱转变为硫酸盐用水提出;而使其转化为盐酸盐，结合盐析法降低其在水中的溶解度，制得盐酸小檗碱。 三、实验方法 (一)盐酸小檗碱的提取 方法一:称取黄连粗粉100g，加0.5%硫酸热浸三次，温度控制在65,70?，第一次加0.5%硫酸300ml，热浸一小时，第二、三次分别加0.5%硫酸200ml，热浸半小时，趁热过滤，合并三次提取液，加入浓盐酸调至pH 2,3，再加入提取液量10%(W/V)的固体氯化钠， 4 搅拌使之充分溶解;冷却即析出大量黄色沉淀，放置过夜，常压过滤，即得盐酸小檗碱粗品，于80?以下干燥，称重。 方法二:称取三棵针根粗粉100g，加1%硫酸100ml，搅拌，使湿润度合适，放置半小时后，装入渗漉筒内，以1%硫酸为溶剂浸泡过夜后开始渗漉，流速控制在5,6ml/分为宜;收集渗漉液约500,600ml即可。然后于渗漉液中加入浓盐酸调至pH 2,3，再加入渗漉量的10%(W/V)的固体氯化钠，搅拌即析出大量黄色沉淀，放置过夜，常压过滤，沉淀于80?以下干燥，即得盐酸小檗碱粗品，称重。 (二)盐酸小檗碱的精制 取盐酸小檗碱粗品加于25倍量的沸水中，加热数分钟，搅拌使其溶解。然后加入石灰乳调至pH 8,9，趁热过滤，滤液于65?左右加浓盐酸调至pH2，放置冷却，即析出大量黄色沉淀，过滤，沉淀用蒸馏水洗至pH4，抽干，于80?以下干燥，即得精制盐酸小檗碱，称重，计算产率。 (三)盐酸小檗碱的检识 1、取自制精制盐酸小檗碱50mg，加水5ml，缓缓加热溶解后，加5%氢氧化钠溶液2滴显橙红色，放冷，加丙酮4滴，即发生浑浊，放置后，生成黄色沉淀，即为丙酮小檗碱，然后取上清液，加丙酮1滴，如仍发生浑浊，再加适量丙酮使沉淀完全;过滤，取滤液2ml，加10%稀硝酸1ml，摇匀，再加0.1mol/L硝酸银试液2滴，即有白色沉淀产生。 2、取自制精制盐酸小檗碱约2mg，置白瓷蒸发皿中，加浓硫酸1ml溶解，加5%没食子酸乙醇溶液5滴，置水浴上加热，即显翠绿色。 3、取自制精制盐酸小檗碱约5mg，加入5%盐酸2ml，搅拌均匀，再加漂白粉少量，即显樱红色。 4、取自制精制盐酸小檗碱约5mg，加水1ml使溶解后，加锌粉少许，再分数次加入浓硫酸数滴，每隔10分钟加一次，观察其黄色是否消退。 5、盐酸小檗碱的薄层层析 (1)氧化铝薄层层析 吸附剂:中性氧化铝(?级，过160目筛)，干法铺板(软板)。 样 品:? 自制精制盐酸小檗碱乙醇溶液 ? 盐酸小檗碱 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 品乙醇溶液 展开剂:? 氯仿-乙醇(9:1) ? 甲醇-丙酮-乙酸(4:5:1) 显色剂:先置于紫外灯(365nm)下检视，再喷雾改良碘化铋钾试剂，观察斑点颜色与标准品对照。 (2)硅胶薄层层析法 吸附剂:硅胶G硬板，于110?烘半小时。 样 品:? 自制精制盐酸小檗碱乙醇溶液 ? 盐酸小檗碱标准品乙醇溶液 展开剂:? 苯–乙酸乙酯–甲醇–异丙醇–浓氨试液(6:3:1.5:1.5:0.5) ? 正丁醇-醋酸-水(7:1:2) ? 氯仿-二乙胺(9:1) 显色剂:先置于紫外灯(365nm)下检视，再喷雾改良碘化铋钾试剂，观察斑点颜色与标准品对照。 5 四、思考题 1、自黄连中提取盐酸小檗碱的原理是什么, 2、精制盐酸小檗碱的原理是什么,加石灰乳的作用是什么, 3、盐酸小檗碱的检识反应中，与浓硫酸-没食子酸反应即Labat反应的机理是什么, 4、盐酸小檗碱的检识反应中，与浓硫酸-锌粉的反应机理是什么, 6 实验二 苦参生物碱的提取、分离与鉴定 苦参为豆科植物苦参(Sophora flavescens Ait.)的干燥根。味苦性寒，有清热利湿，祛风杀虫及解毒等功效。主要用于治疗湿热黄疸，赤白带下，痈肿疮毒，皮肤癣疥及肠炎痢疾等症。 苦参中主要含有生物碱类如苦参碱(1)、氧化苦参碱(2)、羟基苦参碱(3)、去氢苦参碱(4)、安那吉碱(5)、巴普叶碱(6)、N-甲基金雀花碱(7)等及黄酮类成分。 OOOO NNNN HO NNNN O 4321 N NCH3NRN O5 R=HO76 R=OH 苦参碱(Matrine or Sophocapidine)有四种形态，α-苦参碱为白色针状或柱状结晶， 0mp.76?,[α]+39;β-苦参碱为白色柱状结晶，mp.87?,γ-苦参碱为液体，bp.223?D /799.93Pa(6mmHg);δ-苦参碱为白色柱状结晶，mp.84?;常见的是α-苦参碱。苦参碱可溶于冷水、苯、乙醚、氯仿、二硫化碳，难溶于石油醚。 氧化苦参碱(Oxymatrine)为白色柱状结晶(由丙酮中结晶)，mp.162,163?(水合物)，207?(无水物);可溶于冷水、氯仿、乙醇，难溶于乙醚、甲醚、石油醚。 苦参碱易氧化转变为氧化苦参碱，而氧化苦参碱在很弱的还原剂如二氧化硫、碘化钾等存在的条件下，于室温下即可还原成苦参碱。 一、实验目的要求 1、掌握用离子交换树脂法提取分离生物碱的原理和方法。 2、了解喹嗪类生物碱的性质及检识方法。 3、学习离子交换树脂的处理与再生方法。 二、实验原理 苦参碱为喹嗪类生物碱，可溶于水和有机溶剂，具有生物碱的通性，能与酸结合成盐， 7 在水中可离子化，故可用酸水提取，再用离子交换树脂与生物碱进行交换，使其与其它非离子化成分分离，然后根据各生物碱结构、性质的差异，用溶剂法分离。 生物碱的离子与阳离子交换树脂交换的过程如下: +++..RSO H[BH]Cl+[BH]RSO3HCl+3 .+.+RSONHOHNH[BH]RSO+H O+34B4+32+.HRSO:磺酸型氢型阳离子交换树脂3 +.[BH]生物 碱盐酸盐Cl: B :游离生物 碱 三、实验方法 (一)树脂的选择与处理 本实验选用市售的聚苯乙烯磺酸型阳离子交换树脂(交联度1×7即7,)。由于市售的阳离子交换树脂为钠型，且含水量不足，故使用前需进行转型，去杂质和吸水膨胀处理，方法如下: 取市售阳离子交换树脂120g置于烧杯中，用蒸馏水洗至水的颜色较浅为止，再加蒸馏水室温下浸泡一天，或于80?水浴上加热一小时，使树脂充分膨胀;然后倾去水，减压抽干后，加人2mol,L盐酸200m1，不断搅拌，浸泡一小时，倾去酸水液，再加2mol,L盐酸400ml浸泡过夜。然后将树脂装入层析柱中，再将浸泡用的盐酸全部通过树脂柱(4,5ml,分)，用蒸馏水诜至pH4,5后备用。 (二)苦参生物碱的提取与交换 取苦参粗粉150g加适量0.1,盐酸湿润膨胀后，装人渗漉筒，加0.1,盐酸浸泡四小时，并将渗漉筒与离子变换树脂柱相连接，以4,5ml,分的流速渗漉，待渗漉液通过树脂柱后，将树脂从柱中取出倒入烧杯中，用蒸馏水洗涤数次，然后减压抽干，将树脂置于搪瓷盘中晾干。 (三)总生物碱的洗脱 将上述晾干的树脂置于烧杯中，加适量浓氨水，搅拌均匀，勿使水份过多，放置20分钟后，装入索氏提取器中，用氯仿回流提取至提取液无生物碱反应(检查方法是:取索氏提取器中部提取筒中的氯仿液滴在滤纸上，喷雾改良碘化铋钾试试剂，观察斑点颜色是否呈生物碱正反应)，约回流5,6小时，然后将氯仿提取液加无水硫酸钠脱水后，减压回收氯仿至干，残留物抽松，抽松物用丙酮结晶2,3次，可得白色结晶(若结晶颜色不白，可加活性炭脱色)，即为苦参生物总碱，干燥，称重(留少量做生物碱沉淀反应及薄层层析鉴定，其余用于分离苦参碱和氧化苦参碱)。 (四)苦参生物碱的分离 1、氧化苦参碱的分离:将上述所得总生物碱溶于30ml氯仿中，加入200ml乙醚，放置后即有沉淀析出，过滤，保留滤液;合并二次沉淀物，用丙酮重结晶，即为氧化苦参碱，干燥，测熔点，称重。 2、苦参碱的分离:将上述滤液蒸干，加石油醚(30,60?)回流提取三次，每次加石油醚100ml，合并三次石油醚提取液(不溶物含其它生物碱)，回收石油醚至100ml，放置，可析出少量结晶，过滤，所得结晶为N-甲基金雀花碱;滤液再浓缩至适量，放置析晶，过滤，所得结晶即为苦参碱，干燥，称重。 (五)苦参生物碱的沉淀反应 取自制苦参生物碱约0.1g加1%盐酸10ml使溶解，过滤，取滤液分置于三支试管中， 8 进行以下试验: 1、碘化铋钾试验:于上述一支试管中加入碘化铋钾试剂1,2滴，立即有桔红色沉淀产生。 2、碘化汞钾试验:于上述另一支试管中加入碘化汞钾试剂2,3滴，有白色沉淀产生。 3、碘-碘化钾试验:于上述第三支试管中加入碘-碘化钾试剂2,3滴，有褐色或棕褐色沉淀产生。 (六)苦参生物碱的薄层层析鉴定 1、氧化铝薄层层析法 吸附剂:中性氧化铝(?级，过160目筛)，干法铺板(软板)。 样 品:? 自制苦参碱乙醇溶液 ? 苦参碱标准品乙醇溶液 ? 自制氧化苦参碱乙醇溶液 ? 氧化苦参碱标准品乙醇溶液 ? 自制苦参总生物碱乙醇溶液 展开剂:? 氯仿-乙醇(19:1)展开三次 ? 氯仿-甲醇-浓氨水(5:0.6:0.2) 显色剂:喷雾改良碘化铋钾试剂，观察斑点颜色，并与标准品对照。 2、硅胶薄层层析法 吸附剂:2%氢氧化钠溶液制备的硅胶G硬板，于110?烘干半小时。 样 品:(1)自制苦参碱乙醇溶液 (2)苦参碱标准品乙醇溶液 )自制氧化苦参碱乙醇溶液 (3 (4)氧化苦参碱标准品乙醇溶液 (5)自制苦参总生物碱乙醇溶液 展开剂:(1)先以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-水(2:4:2:1)展开，展距约8cm，取出，晾干，再以甲苯-丙酮-乙醇-浓氨试液(20:20:3:1)展开，展距与第一次相同。 (2) 氯仿-甲醇-乙醚(44:0.6:3) 显色剂:喷雾改良碘化铋钾试剂和亚硝酸钠乙醇液，观察斑点颜色，并与标准品对照。 (七)树脂的再生 使用过的树脂，经过处理再生后仍可使用。处理方法是将用过的树脂用蒸馏水洗去杂质，抽干，加2mol/L盐酸浸泡后装在层析柱中，使酸液通过树脂柱，再用水洗去酸液，然后用2mol/L氢氧化钠溶液浸泡后装在层析柱中，使碱液通过树脂柱，再用水洗去碱液，然后再次用2mol/L盐酸浸泡，使酸液通过树脂柱，再用水洗去酸液即可使用。 四、思考题 1、用离子交换树脂法提取苦参生物碱的原理是什么? 2、要做好本实验，应注意哪些问题(包括提取，离子交换，碱化，洗脱，结晶等), 3、苦参生物碱中的喹嗪类生物碱如苦参碱、氧化苦参碱与一般的生物碱有什么不同,它们有何特点, 9 实验三 大黄中游离蒽醌的提取、分离及检识 大黄为泻下、健胃、清热、解毒的常用中药，品种繁多，质优者为蓼科植物掌叶大黄(Rheum palmatum L.)，药用大黄(R. officinale Beill)和唐古特大黄(R. tanguticum Maxim. ex Balf)的根及根茎。 大黄中含有多种羟基蒽醌类化合物，它们在植物中主要以苷的形式存在，总含量为2,5%。大黄中主要的羟基蒽醌类化合物有大黄酚(1)、大黄素(2)、大黄酸(3)、大黄素甲醚(4)、芦荟大黄素(5)及其苷类。 RR12OOHOH1HCH3 OH2CH3 HCOOH3RR124CHOCH3O3 OHCHH52 197?,能升华。可大黄酚(Chrysophanol)为金黄色片状结晶(乙醇或苯)，mp.196, 溶于丙酮、乙醚、氯仿、甲醇、乙醇、热苯和氢氧化钠水溶液中，微溶于石油醚、乙醚，不溶于水、碳酸钠和碳酸氢钠水溶液。 大黄素(Emodin)为橙黄色针状结晶(乙醇或冰醋酸)，mp.256,257?,能升华，易溶于稀氨水、碳酸钠和氢氧化钠水溶液，可溶于乙醇、丙酮，在乙醚、氯仿、苯、四氯化碳、二硫化碳等溶剂中溶解度较小，几乎不溶于水。 大黄酸(Rheine)为黄色针状结晶(升华法)，mp.321,322?,330?分解，易溶于碱水液、吡啶，微溶于乙醇、丙酮、乙醚、氯仿、苯、石油醚。几乎不溶于水。 大黄素甲醚(Physcion)为砖红色针状结晶(苯)，mp.203,207?,能升华，溶解性质与大黄酚相似。 芦荟大黄素(Aloeemodin)为橙黄色针状结晶(甲苯)，mp.223,224?,能升华，可溶于乙醚、热乙醇、苯、稀氨水、碳酸钠和氢氧化钠水溶液。 羟基蒽醌苷有大黄素甲醚葡萄糖苷，大黄素葡萄糖苷，大黄酸葡萄糖苷，大黄酚葡萄糖苷，大黄素-1-O-β-D葡萄糖苷，芦荟大黄素-ω-O-β-D葡萄糖苷。 一、实验目的要求 1、掌握pH梯度萃取法分离酸性成分的原理及操作技术。 2、掌握羟基蒽醌类成分的主要检识反应及薄层层析检识方法。 3、学习从大黄中提取分离羟基蒽醌类成分的方法。 二、实验原理 根据大黄中羟基蒽醌类成分可溶于热乙醇中，故用乙醇为溶剂加热回流提取总蒽醌类 10 成分，再利用羟基蒽醌类化台物酸性强弱不同，采用pH梯度萃取法分离，可得到各单一成分。 三、实验方法 (一)乙醇总提取物的制备 方法一:取大黄粗粉150g，置于1000ml的圆底烧瓶中，加乙醇回流提取三次，第一次加95,乙醇500ml，回流一小时，第二次加95,乙醇300ml，回流半小时，第三次加95,乙醇250ml，回流半小时，趁热过滤，合并三次乙醇提取液，放置后，如有沉淀可再过滤一次;滤液减压回收乙醇至糖浆状，即为乙醇总提取物;趁热转移至250ml的三角烧瓶中备用。 方法二:称取虎杖根茎粗粉150g置于1000ml的圆底烧瓶中，加乙醇回流提取三次，第一次加95,乙醇500ml，回流一小时，第二次加95,乙醇300ml，回流半小时，第三次加95,乙醇250ml，回流半小时，趁热过滤，合并三次乙醇提取液，放置冷却后若有沉淀产生，可再过滤一次;减压回收乙醇至糖浆状，即为乙醇总提取物;趁热转移至250ml的三角烧瓶中备用。 (二)总游离蒽醌的提取 在盛有乙醇总提取物的三角烧瓶中，加入乙醚l00ml，冷浸半小时，不断振摇，然后静置，将上层乙醚液倾出，置另一500ml三角烧瓶中，瓶内糖浆状物再同法提取4,5次，每次加乙醚50ml及丙酮2ml，至乙醚液颜色较浅为止，合并乙醚提取液(注意把水层分离干净)，即为含总游离蒽醌的部分，剩余物中则含有蒽醌苷类成分。 (三)游离蒽醌的分离 1、强酸性部分的分离:将上述乙醚提取液转移至500ml的分液漏斗中，加5,碳酸氢钠水溶液(先用pH试纸测定其pH值)萃取三次，每次加5,碳酸氢钠水溶液40ml(注意萃取时放置分层的时间应稍长些，以免萃取效果不好)。合并三次碳酸氢钠萃取液，在搅拌下小心滴加浓盐酸调至pH2(观察萃取，酸化时溶液的颜色变化)，放置沉淀，过滤，沉淀用水洗至近中性，干燥，称重，即为强酸性部分，主要含大黄酸，留作鉴定用。 2、中等酸性部分的分离:将上述经碳酸氢钠萃取过的乙醚液用5,碳酸钠水溶液(先用pH试纸测定其pH值)萃取5,6次，每次如5,碳酸钠水溶液40m1，至萃取碱液层颜色较浅为止。合并碳酸钠萃取液，在搅拌下小心滴加浓盐酸调至pH2，放置沉淀，过滤，沉淀用水洗至近中性，干燥，称重，即为中等酸性部分，主要含大黄素，留作鉴定用。 3、弱碱性部分的分离:将上述经碳酸钠萃取过的乙醚液用2,氢氧化钠水溶液(先 用pH试纸测定其pH值)萃取3,4取，每次加2,氢氧化钠水溶液20m1。合并氢氧化 钠萃取液，在搅拌下小心滴加浓盐酸调至pH2，放置沉淀，过滤，沉淀用水洗至近中性，干燥，称重，即为弱酸性都分，主要含大黄酚和大黄素甲醚，留作鉴定用。 (取上述大黄酚和大黄素甲醚混合物0.1g，用少量氯仿溶解，加少量硅胶拌匀，于水浴上挥干溶剂后备用。取层析用硅胶(200,300目)10g，用石油醚湿法装柱，将拌有样品的硅胶加至柱顶端，以石油醚-苯洗脱，每50ml为一份，浓缩，放置，可析出黄色针状结晶，即为大黄素甲醚，还析出小片状黄色结晶，即为大黄酚。) (四)蒽醌类成分的检识 1、碱液试验:取上述分离所得游离蒽醌类化合物结晶各5mg置于小试管中，加95,乙醇lml溶解，再加10,氢氧化钠水溶液2,3滴，观察溶液颜色变化。凡具有邻、对位酚羟基的蒽醌类化合物应呈紫,蓝色，其它羟基蒽醌类化合物多为红色。 2、醋酸镁试验:取上述分离所得游离蒽醒类化合物结晶各5mg置于小试管中，加95,乙醇lml溶解，再滴加0.5,醋酸镁乙醇液2,3滴，观察溶液颜色变化。凡具有α-羟基的 11 蒽醌类化合物应呈橙红色，具有间位二羟基的蒽醌类化合物应呈橙,红色，具有对位二羟基的蒽醌类化合物应呈紫,红紫色，具有邻位二羟基的蒽醌类化合物应呈蓝紫色。 (五)蒽醌类成分的薄层层析检识 吸附剂:硅胶CMC-Na硬板，于110?烘半小时。 样 品:1、强酸性部分结晶丙酮溶液 2、大黄酸标准品丙酮溶液 3、中等酸性部分结晶丙酮溶液 4、大黄素标准品丙酮溶液 5、弱酸性部分结晶丙酮溶液 6、大黄酚及大黄素丙酮溶液 展开剂:1、 苯-乙酸乙酯(8:2) 2、苯-甲醇(8:1) 3、石油醚(30,60?)-甲酸乙酯-甲酸(15: 5:1) 显色剂:先在日光和紫外光灯(365nm)下检视，为橙黄色荧光斑点，再置于氨气中薰后日光下检视，斑点变为红色。 四、思考题 1、pH梯度萃取法的分离原理是什么,它适用于哪些中药化学成分的分离, 2、根据薄层层析的结果分析大黄中存在的游离蒽醌类成分大黄素、大黄酚、大黄酸、大黄素甲醚、芦荟大黄素等的结构与酸性，极性大小的排列顺序如何, 3、根据大黄中存在的游离蒽醌类成分的结构，在其醋酸镁试验中应呈什么颜色,与实验结果是否相符合, 12 实验四 芦丁的提取和鉴定 芦丁(Rutin)亦称芸香苷(Rutisude)，广泛存在于植物界中。现已发现含芦丁的植物约有70余种，如烟叶、槐花米、荞麦叶、蒲公英中均含有大量的芦丁。尤以槐花米和荞麦叶含量最高，可作为提取芦丁的原料，使用最多的是槐花米。 槐花米为豆科植物槐(Saphora japonica L.)的干燥花蕾，所含主要成分为芦丁，含量可达12%,16%，其次含有槲皮素、三萜皂苷、槐花米甲素、乙素、丙素等。芦丁具有维生素P样作用，可降低毛细血管前壁的脆性和调节渗透性。临床上常用于毛细血管脆性引起的出血症，并常作为治疗高血压的辅助药。 槐花米主要化学成分的结构及性质: 1、芦丁(Rutin): 淡黄色细小针状结晶，mp.174,178?(含3分子结晶水),188?(无水物)。 溶解度: 水 1:100(冷)，1:200(热) 甲醇 1:100(冷)，1:9(热) 乙醇 1:650(冷)，1:60(热) 吡啶 1:11.7(冷)，易溶(热) 不溶于乙醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮等溶剂，易溶于碱液中呈黄色，酸化后复析出。可溶于浓硫酸、浓盐酸，加水稀释复析出。 、槲皮素(Quercetin): 2 即芸香苷苷元，为黄色结晶，mp.313,314?(含2分子结晶水)，316?(无水物)。 溶解度:乙醇 1:290(无水乙醇)，1:23(热)。可溶于甲醇、乙酸乙酯、丙酮、吡啶、冰醋酸。不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚等。 3、皂苷 粗品为白色粉末，mp.210,220?(分解)。易溶于水、吡啶，能溶于200倍的甲醇中。酸水解后得白桦脂醇、槐二醇二种皂苷元及葡萄糖，葡萄糖醛酸及葡萄糖醛酸内酯。 )白桦脂醇(Betulin) (1 无色针晶，mp.251,252?。能溶于醋酸、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、氯仿、苯、乙醚等溶剂，难溶于石油醚及水。 (2)槐二醇(Sophoradiol) 无色针晶，mp.219,220?或224?。能溶于石油醚、苯、丙酮、甲醇中，难溶于水。 4、槐属苷(Sophoricoside) mp.298?.易溶于热乙醇、热醋酸、吡啶、稀碱液，难溶于水、冷乙醇、冷醋酸、乙酸乙酯、丙酮中。 5、槐属黄酮苷(Sophoraflavonoloside) mp.207,208?。可溶于热水及乙醇，难溶于冷水、乙酸乙酯、丙酮，不溶于乙醚等低极性有机溶剂。 6、槐属双苷(Sophorabioside) 针状结晶，mp.156,160?(含结晶水),248?(无水物)。易溶于吡啶，能溶于热乙醇、丙酮，稍溶于热水，不溶于弱极性有机溶剂。 13 R1RR21 HOOO-glu-rhaOH1OHOHOH2 O-glu-gluORH52 OHO HOO R=O-glu4 R6R=O-glu-rha OHO H OHHOHH H HOHHO 3-(1)3-(2) 一、实验目的要求 1、了解黄酮苷的一般性质。 2、掌握酸碱法提取黄酮苷的一般原理及方法。 3、掌握黄酮苷(包括苷元)的鉴定方法。 二、实验原理 1、芦丁可溶于热水，难溶于冷水，其分子结构中具有较多酚羟基，显弱酸性，在碱液中易溶解，而在酸性条件下，易析出沉淀，故本实验采用碱溶酸沉的方法自槐花米中提取芦丁。 2、利用芦丁可被稀酸水解，生成苷元和糖，通过颜色反应、薄层层析、纸层析及苷元乙酰化进行检识和确认。 三、实验方法 (一)芦丁的提取 于1000ml烧杯中加500ml蒸馏水加热煮沸后，称取40g槐花米粗粉，投入沸水中，直火加热煮沸5分钟，在搅拌下小心加入石灰乳至pH 8,8.5，加热保持微沸20,30分钟，趁热用棉花过滤，滤渣再用调pH 8.5的石灰水200ml煮10分钟，趁热过滤，合并两次滤液，稍冷(60,70?)用浓盐酸调至pH4,5左右，放置过夜，即析出大量淡黄色沉淀，减压过滤，沉淀用水洗两次，然后用少量乙醇洗一次，抽干，沉淀于60?左右干燥，称重，即得芦丁粗品。 14 (二)芦丁的精制 将芦丁粗品置500ml圆底烧杯中，加300ml蒸馏水，再用石灰水调至pH8，加热煮沸数分钟，使其充分溶解，趁热抽滤，滤液滴加3mol/L盐酸至pH4,5。放置过夜，即析出沉淀，减压过滤，用少量蒸馏水洗涤沉淀2,3次，然后用少量乙醇洗一次，抽干，于70,80?干燥一小时，称重，即得芦丁精品，计算产率，测熔点。 (三)芦丁的水解—苷元分离 取精制芦丁1.5g，尽量研细，置于500ml圆底烧瓶中，加2%硫酸230ml，于直火加热微沸回流2,3小时，冷却后减压过滤，所得沉淀即为槲皮素，滤液保留作糖部分的鉴定，沉淀洗后再用95%乙醇重结晶一次，得黄色针状结晶，于70,80?干燥，称重，计算产率，即得精制槲皮素，测熔点。 (四)糖部分的鉴定—糖脎的制备 将水解母液小心地用40%NaOH水液中和至近中性，滤除棕红色沉淀物，直火加热浓缩至约50ml，过滤，滤液加1.5g盐酸苯肼，3g醋酸钠，于沸水浴上回流半小时，析出黄色混合糖脎，等冷却后，取出少量结晶，于显微镜下观察，鼠李糖脎为菊花形聚状针晶，葡萄糖脎为扫帚状聚针晶。滤取糖脎结晶，水洗干燥后，溶于丙酮中(约5,7ml)，过滤，滤液加水使成30%丙酮液，即析出葡萄糖脎，抽滤后结晶以少量丙酮重结晶一次，即得精制葡萄糖脎，测熔点(209?)。滤去葡萄糖脎后的母液再加水稀释，即析出鼠李糖脎，抽滤结晶，以稀乙醇重结晶得精制鼠李糖脎，测熔点(185?)。 (五)槲皮素五乙酰化物的制备 取槲皮素0.5g，溶于100m1无水吡啶中，于水浴上加温振摇，使其完全溶解，加人10m1醋酐，摇匀，于水浴上回流加热半小时，放冷。将反应液在搅拌下倒人冰水中，一直搅拌到油滴消失，白色固体沉淀析出为止，减压过滤，沉淀用蒸馏水洗至中性，于100?干燥，再用乙醇重结晶，得五乙酰基槲皮素无色针晶，测熔点(193,195?)。 (六)芦丁及其苷元的性质试验 1、对不同强度碱液的溶解试验 取四支小试管，每管中加人芦丁数毫克，分别加人稀氨水，5,碳酸氢钠，5,碳酸钠和1,氢氧化钠水液各l毫升，振摇后观察其溶解情况，溶解的溶液应呈黄色，再加数滴盐酸酸化，黄色褪去或变浅，并有沉淀析出或变混浊。 2、莫氏(Molish)反应 取芦丁和槲皮素各数毫克，分别置于两支小试管中，加0.5毫升乙醇溶解，再加入α-萘酚数毫克，振摇使之溶解，然后沿试管壁加浓硫酸约0.5毫升，静置，观察两液层界面变化，呈紫红色环者示分子中含糖结构。 3、菲林(Fehling)反应 取芦丁和槲皮素各数毫克，分别置于两支小试管中，加0.5毫升水加热使之溶解，加 。然后加菲林试剂2毫升，于水浴上加热，浓盐酸5滴加热5分钟，再加5%NaOH调至pH8 若产生砖红色或黄色沉淀者示有还原糖或其它还原物质。 4、盐酸-镁粉反应 取芦丁和槲皮素各数毫克，分别置于两支小试管中，加0.5毫升稀醇热溶，加镁粉少许，滴加浓盐酸，溶液由黄色逐渐变红者示有黄酮类化合物存在。 5、三氯化铁反应 取芦丁和槲皮素各数毫克，分别置于两支小试管中，加0.5毫升水或乙醇使之溶解，然后滴加1,三氯化铁乙醇液，观察颜色变化(比较芦丁与槲皮素的呈色反应)。 6、三氯化铝反应 取芦丁和槲皮素各数毫克，分别置于两支小试管中，加甲醇0.5毫升使之溶解，然后 15 滴加1,三氯化铝甲醇溶液数滴，黄酮类化合物应呈鲜黄色。 7、醋酸铅沉淀试验 取芦丁和槲皮素各数毫克，分别置于两支小试管中，加0.5毫升水或稀甲醇使之溶解， 加5%中性醋酸铅溶液数滴，观察有无沉淀产生，再加碱式醋酸铅饱和溶液数滴，观察有无 沉淀产生。 8、醋酸镁反应 取芦丁和槲皮素各数毫克，分别置于两支小试管中，加0.5毫升甲醇使之溶解，加入 1%醋酸镁甲醇溶液数滴，黄酮类化合物应呈黄色荧光。 (七)芦丁和槲皮素的纸层析鉴定 支持剂:新华层析滤纸，长30cm，宽酌情而定。 点 样:1、自制精制芦丁乙醇液 2、芦丁标准品乙醇液 3、自制精制槲皮素乙醇液 4、槲皮素标准品乙醇液 展开剂:1、正丁醇-醋酸-水(4:1:5)(上层)上行展开。 2、15%醋酸水溶液上行展开。 显 色:1、可见光下显黄色斑点，紫外光下观察荧光斑点。 2、用氨薰后再观察。 3、喷1%三氯化铝试液后再观察。 (八)芦丁和槲皮素的薄层层析鉴定 吸附剂:聚酰胺板。 点 样:1、自制精制芦丁乙醇液 2、芦丁标准品乙醇液 3、自制精制槲皮素乙醇液 4、槲皮素标准品乙醇液 展开剂:1、乙醇-水(3:2)。 2、80%乙醇。 显色剂:1、可见光下显黄色斑点，紫外光下观察荧光斑点。 2、用氨薰后再观察。 3、喷2%二氯氧化锆溶液后观察。 画出图谱，计算Rf值。 附:聚酰胺板的制备 甲酸法:称取聚酰胺颗粒(过20目筛)0.5克，加3毫升甲酸溶解，然后用滴管加入 70%乙醇1.5毫升搅匀，除尽气泡，置热水中保温，然后涂布在玻璃板上，放置在相对湿度 约为80%的环境中，自然晾干，尽量挥去甲酸后(或用水洗去甲酸晾干)待用(0.5克聚酰 胺颗粒约铺5cm×20cm板一块)。 四、思考题 1、从芦丁的结构出发，你考虑在提取分离中应注意些什么问题, 2、在本实验条件下，石灰水有何作用, 3、芦丁及槲皮素的各项性质试验的原理是什么, 16 实验五 葛根中黄酮类化合物的提取、分离及鉴定 葛根为豆科植物野葛(Pueraria lobata Willd Obwil)或甘葛根(P. thomsonii) 的干燥根。葛根味甘辛、性平，能解肌退热、生津止渴、发表透疹、止痢等。主治温病发热，头痛、项强、口渴、消渴、麻疹不透、热痢、泄泻、高血压项强痛等症。 葛根中主要含有黄酮类化合物，其中主要有葛根素(perarin)，大豆苷(daidzin)，大豆素(daidzein)，大豆素-7，4’-二葡萄糖苷( daidzein- 7，4‘-diglucoside)，木糖葛根素(perarin-xyloside)等。葛根总黄酮有增加冠状动脉血流量及降低心肌耗氧量等作用，同时也有降低血压作用。常用于治疗冠心病、心绞痛及高血压项背强痛以及突发性耳聋等。 葛根中主要化学成分及性质 1、葛根素(Puerarin)(葛根黄素):棱晶，mp.187?(分解)。易溶于乙醇，不与中性醋酸铅反应生成沉淀。 2、葛根苷(Xylopuerarin)(葛根素木糖苷):棱晶，易溶于乙醇，不与中性醋酸铅反应生成沉淀。 3、大豆黄酮(Daidzein):棱晶，mp.320?(分解)。易溶于乙醇，不与中性醋酸铅反应生成沉淀。 4、大豆黄酮苷(Daidzin):针晶，mp.236,237?(分解)。无荧光，易溶于乙醇，不与中性醋酸铅反应生成沉淀。 R1RRR231 OgluHH1R O2xylgluH2ORH3HH3 gluHHO4 一、实验目的要求 1、学习葛根中黄酮类化合物的提取分离方法。 2、熟悉铅盐沉淀法除去杂质或沉淀有效成分的一般原理及方法。 3、熟悉柱层析法在分离黄酮类化合物中的应用。 二、实验原理 葛根黄酮苷及其苷元均能溶于乙醇中，故用乙醇为溶剂，可提取葛根中的总黄酮，经铅盐法沉淀除去杂质，再利用各化合物结构的不同，而对同一吸附剂吸附能力的差异用氧化铝柱层析将其分离。 三、实验方法 (一)葛根总黄酮的提取 17 取葛根粗粉100g于1000ml圆底烧瓶中，加300ml95%乙醇回流提取2小时，过滤，残渣再用200ml乙醇回流提取一次(1小时)，过滤，合并二次醇提液，于水浴上回收乙醇至150ml，转移到烧杯中，加饱和中性醋酸铅溶液至不再有沉淀析出为止，过滤。滤液加饱和碱式醋酸铅至不再有沉淀析出为止，抽滤，沉淀用水洗二次后悬浮于150ml甲醇中，通入HS气体分解黄酮铅盐沉淀，而转为硫化铅沉淀，抽滤除去硫化铅沉淀，并用甲醇洗2,32 次，洗液与滤液合并，中和至pH6.5,7，于水浴上减压回收乙醇至30ml左右，转移到蒸发皿中蒸干，即得总黄酮，称重，计算产率。 (二)葛根总黄酮的分离 1、装柱:将适量中性氧化铝(100,200目)用水饱和的正丁醇混悬后，常规湿法装柱，混悬用溶剂体积V和装柱后放出溶剂体积V，计算柱中溶剂保留体积V。 12 V=V-V12 这样便于掌握流分的接受，溶剂的更换。 2、加样和洗脱:将葛根总黄酮用水饱和的正丁醇溶解后装入氧化铝柱上，待样品完全被氧化铝柱吸附后加入水饱和正丁醇开始洗脱，等色带到达柱底(用紫外光观察控制)，于紫外灯下可看到十种色带，由底至顶分别命名为a,j，其中c没有荧光，其它九个色带均显紫蓝色荧光，分段接收洗脱液，可使葛根总黄酮中各个化合物得以分离。 B流分减压回收溶剂，残渣用50%甲醇重结晶得大豆黄酮，c流分同法处理得大豆黄酮苷，e流分同法处理得葛根素，f流分为葛根素木糖苷。 (三)鉴定 1、纸层析 支持剂:新华层析滤纸，长30cm，宽酌情而定。 点样:取少量总黄酮用1ml乙醇溶解即为样品溶液。 展开剂:20%KOH乙醇溶液，上行展开。 显色:展开后用铅笔画下前沿，将滤纸在烘箱中烤干后(滤纸放入烘箱前须自然晾干)，于紫外灯下观察，划出荧光位置，求出Rf值。 附:据文献 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 ，大豆黄酮Rf0.04，大豆黄酮苷Rf0.23，葛根素Rf0.50。 2、薄层层析 吸附剂:硅胶G板，于110?烘半小时。 样 品:取少量总黄酮用1ml乙醇溶解即为样品溶液。 展开剂:氯仿-甲醇(83:17) 显色剂:三氯化铁-铁氰化钾试剂 划出各色点的位置，求出Rf值。 四、思考题 1、葛根中黄酮类化合物结构上有何特点, 2、本实验中，为什么中性醋酸铅不能沉淀葛根中的黄酮类化合物, 3、为什么中性氧化铝可用于葛根中黄酮类化合物的层析分离,试说明葛根素、葛根苷、大豆黄酮及大豆黄酮苷在氧化铝层析中被洗出先后顺序的理由。 18 实验六 黄夹苷的提取、精制及鉴定 黄夹苷是从夹竹桃科植物黄花夹竹桃(Thevetia peruviana (Pers) K. Schum)的果仁经发酵后提出的亲脂性次生苷的混合物，主要成分为黄夹次苷甲、黄夹次苷乙和单乙酰黄甲次苷乙，商品名为强心灵。 黄夹苷具有强心作用，主要用于因心脏病引起的心力衰竭，阵发性室上性心动过速、阵发性心房纤颤等症的治疗。 黄夹苷中主要化学成分的结构及性质 0 1、黄夹次苷甲(Peruvoside):菱形白色结晶(稀甲醇)，mp..161,164?，[α]-67.7D (甲醇)。在水中的溶解度为1:2500，易溶于氯仿和丙酮，微溶于甲醇和乙醇。 0 2、黄夹次苷乙(Nerrifolin):白色结晶(甲醇)，mp.203,207?，[α]-52.7(甲醇)。 D 0 3、单乙酰黄夹次苷乙(Cerberin):白色针状结晶(甲醇-水)，mp.215,218?，[α]-82.4D (甲醇)，有毒。可溶于乙醇、氯仿、乙酸及乙醚，几乎不溶于水。 黄夹苷主要为以上三个化合物的混合物，为白色结晶，无嗅，味极苦。易溶于乙醇、甲醇、氯仿、丙酮，微溶干乙醚、水，不溶于苯及石油醚。 O ORR1 1HCHO HRH2CH3 OCCHCH3HOH33HOOORO1CH3 CHO3 一、实验目的要求 1、学习黄夹苷的提取，精制方法及原理。 2、掌握强心苷的性质，定性鉴别反应，纸层析和薄层层析鉴定。 3、学习通过薄层层析检查酶解前后黄花夹竹桃果仁中所含成分之变化的方法。 二、实验原理 1、在黄花夹竹挑果仁中含有原生苷，同时还含有酶，在适宜的温度和湿度下，利用酶的活性可使原生苷水解为次级苷，然后用乙醇提取。 2、通过纸层析，薄层层析和颜色反应对黄夹苷进行检识和确认。 19 三、实验方法 (一)黄夹苷的提取和精制 1、原料处理:称取黄花夹竹桃坚果150克，除去硬壳，将所得果仁称重后置乳体中研成粗粉，称重。 2、脱脂:将研细的果仁粉末包在滤纸袋内置于沙氏提取器中，用苯脱脂。脱脂是否完全，可用滴管吸取沙氏提取器上部的萃液，滴在滤纸上若不留油迹，说明已脱脂完全。将脱脂果仁粉末干燥，称重。 3、酶解:将干燥后的脱脂果仁粉末置三角烧瓶中加40?的水适量以能完全湿润为度(约为果仁粉末的3,5倍量)，再加脱脂果仁粉末重量的2.5%的甲苯，加盖，并稍留有空隙，在35,40?的恒温箱中酶解24小时，观察发酵物的颜色及发酵液pH值的变化，并用薄层层析(TLC)检查酶解前后成分的变化情况。 检查方法:取脱脂粉末少许，加适量甲醇振摇10分钟，得甲醇提取液;另取少许发酵后的粉末加适量氯仿振摇10分钟，得氯仿提取液。将二样品液点于薄层板上进行层析分析。 吸附剂:中性氧化铝软板，200,300目，?级。 展开剂:氯仿—甲醇(97:3)。 显色剂:50,硫酸水液或乙醇液喷后于105?烤10分钟。 4、提取:于发酵后的粉末中加15倍量(相当于脱脂粉末重)95,乙醇，最于500ml三角烧瓶中，振摇10分钟，减压过滤，残渣再用5倍量乙醇振摇提取，减压过滤，抽于，残渣于布氏漏斗上用适量乙醇洗一次，合并提取液，减压回收乙醇至脱脂粉末的5倍量体积，加脱脂粉末的12.5倍量水放置，待析出沉淀，过滤，干燥，称重，得粗黄夹苷。 5、精制:取上述黄夹苷粗品加40倍量95,乙醇，加热回流10分钟，稍放冷，再加粗品量15,活性炭(脱色)加热回流10分钟，过滤，滤液减压浓缩至粗品5倍量体积，再缓缓加入浓缩液体积3倍量的蒸馏水，放置待析晶完全后，抽滤，结晶以少量乙醚洗净，于70?干燥，称重，即得黄夹苷精品，计算产率。 (二)黄夹苷的定性鉴别反应 1、3，5—二硝基苯甲酸(Kedde)反应 取少量样品于小试管中，加1ml乙醇溶解后加人4,氧氧化钠乙醇溶液2滴，再加2,3，5—二硝基苯甲酸甲醇溶液2滴，观察颜色变化(强心苷溶液应呈紫红色)。 2、碱性苦味酸(Baljet)反应 取少量样品于小试管中，加1ml乙醇溶解后再加2滴碱性苦味酸试剂，放置15分钟，观察现象(强心苷溶液应呈橙红色)。 3、三氯化铁—冰醋酸(Keller—Kiliani)反应 取少量样品置于小试管中，加入0.5,FeCl的冰醋酸溶液2ml使之溶解，然后沿管壁加人3 浓硫酸1m1，观察现象(若有α—去氧糖则两液界面呈棕色，渐变为浅兰色，最后冰醋酸层全呈现兰色)。 (三)黄夹苷的色谱鉴定 1、纸层析鉴定 (1)滤纸的处理:取28×4.5cm的层析用滤纸二条，使其均匀地通过盛有甲酰胺-丙酮(3:7)的溶液的平皿，然后置空气中风干15分钟后待用(可先将浸透甲酰胺-丙酮的层析滤纸于干净的普通滤纸中压干)。 (2)点样:取自制黄夹苷精品及黄夹苷标准品5mg溶于氯仿中，用于点样。 (3)展开剂:甲酰胺饱和的二甲苯一甲乙酮(1:1)的上层液。 (4)展析操作:将点样后的滤纸条置于层析筒中，以展开剂饱和半小时后，在室温中上 20 行展开，至溶剂前沿达约20cm时(约3小时)，取出纸条在空气中晾干后，置恒温箱中，于120?烤l小时(除尽滤纸上的甲酰胺)或于电炉上烤至无白烟，然后显色。 (5)显色:用Kedde试剂喷雾显色，试剂的组成为: A:2%3，5—二硝基苯甲酸甲醇溶液。 B:5,氢氧化钠乙醇溶液。 显色时分别在纸上喷以两种显色剂，强心苷应呈红色斑点，画下色点位置，计算Rf值。 2、薄层层析鉴定 (1)点样:取自制黄夹苷精品及黄夹苷标准品名5mg，分别溶于1ml甲醇中，用于点样。 (2)吸附剂:硅胶G硬板(含10,石膏的硅胶板)。 (3)展开剂:氯仿一甲醇(10:1)。 (4)显色:喷50,硫酸水溶液，于105?烤10分钟。 样品可呈现与标准品Rf值相同的一些斑点，其中主要有三个斑点，Rf值由小到太，顺次为黄甲次苷甲、黄甲次苷乙、单乙酰黄甲次苷乙。以黄夹次苷乙含量最高，在黄夹次苷甲和黄夹次苷乙之间，黄夹次苷乙和单乙酰黄夹次苷乙之间允许各有一个小而弱的强心苷斑点，靠近原点处，有时可出现另一个颜色极浅的斑点，除此之外，不应出现其它斑点。 四、思考题 1、本实验中进行酶解时应注意些什么问题,为什么要加甲苯, 2、纸层析展后，为什么要于120?烤1小时, 3、分析纸层析和薄层层析结果，哪个成分的Rf值应大,哪个成分的Rf值应小,为 什么, 21 实验七 薯蓣皂苷元的提取分离和鉴定 薯蓣皂苷属27碳甾体皂苷，水解后可得薯蓣皂苷元，薯蓣皂苷元因为是合成甾体激素类药物的主要原料而受到重视。 薯蓣皂苷主要存在于薯蓣科(Dioscoreaceae)植物中，我国薯蓣科植物有80多种，多数分布长江以南省区，其中可作为原料药的有12种3变种，均为薯蓣属根状茎组(Dioscorea，Sect. Stenophora)植物，重要的有盾叶薯蓣(D. zingiberensis)、黄山药(D. panthaica)、 穿山龙(D. nipponica)等。本实验采用穿山龙为原料提取薯蓣皂苷元。 穿山龙含多种甾体皂苷，其中薯蓣皂苷含量最高。这些皂苷水解后大多能生成薯蓣皂苷元，暮蓣皂苷元含量约2,。 主要化学成分的结构及性质 1、薯芋皂苷元(Diosgenin)(1):白色针状结晶(乙醇)，mp.204~207?。可溶于一般有机溶剂，不溶于水。 2、薯蓣皂苷(Dioscin)(2):白色针状结晶或粉末状(乙醇)，mp.275~ 280?。可溶于甲醇、乙醇，难溶于乙醚等低极性有机溶剂，不溶于水。 O RO H1 12rhaglu2 6rha1RO 一、实验目的要求 1、掌握从穿山龙中提取分离薯蓣皂苷元的原理和方法。 2、学习薯蓣皂苷元的鉴定方法。 二、实验原理 穿山龙中所含甾体皂苷经水解处理，裂解产物主要为薯蓣皂苷元和单糖等，利用薯蓣皂苷元不溶于水，可溶于有机溶剂的性质可将其用有机溶剂提取分离。 三、实验方法 (—)发酵和水解 将切成薄碎片的穿山龙生药50g置于500ml锥形瓶中，加水约l00ml，浸泡12小时后置于40?恒温水浴中自然发酵48小时。然后加入150ml水和20ml浓硫酸摇匀，小火加热保持微沸水解约2小时。倾出酸液，用10,氢氧化钠溶液将药渣搅匀洗至中性，再用水充 22 分洗涤药渣。抽干药渣，研碎后干燥至含水量小于10%即可。 附:可用黄山药、盾叶薯蓣替代穿山龙作实验材料。水解时应小火加热，保持微沸即可，以防止局部过热和泡沫溢出，特别是在开始水解时尤要注意。 (二)薯蓣皂苷元的提取 将干燥的药渣装在滤纸筒中，置于索氏提取器中，加石油醚约300ml，连续提取6~8小时。回收乙醚至约20,30ml，放置后析出结晶，等结晶析出完全后滤出结晶，用少量的石油醚快速洗涤结晶二次，干燥后即得薯蓣皂苷元粗品。 (三)薯蓣皂苷元的精制 将上述粗品置100ml圆底烧瓶中，加无水乙醇约20ml，水浴上回流至全溶，取下烧瓶，稍冷后加入0.05g,0.10g的活性炭，又继续回流约5分钟，趁热抽滤，用少许乙醇洗涤滤渣，滤液放冷后即析出白色针状结晶，滤出结晶，干燥，即得薯蓣皂苷元精制品，称重，计算产率。 (四)薯蓣皂苷元的鉴定 1、熔点测定 薯蓣皂苷元精制品的熔点应在204,207?之间。 2、显色反应 Liebermann—Burchard反应:取薯蓣皂苷元少许于白色反应瓷板上，加入乙酸酐5,8滴，沿壁滴入浓硫酸1,2滴，应在交界面出现红色，渐渐变为紫色~蓝色~污绿色者为阳性反应。 3、薄层层析 分别取薯蓣皂苷元标准品、自制品少许溶于乙醇配成约5mg/ml的标准液及样品液，点于同一块板上，上行展开后显色，样品应为单一色点，和标准品色泽一致，出现位置(Rf值)相同。 吸附剂:硅胶G板。 展开剂:环己烷—乙酸乙酯(7:3) 显色剂:5%磷钼酸乙醇溶液，喷雾后加热，薯蓣皂苷元显蓝色斑点。 四、思考题 1、预先发酵可能提高薯蓣皂苷元的得率，其原因可能是什么, 2、酸水解时应注意什么,为什么, 23 实验八 三七总皂苷的提取和精制 三七是云南著名地道特产中药材，其来源为五加科植物 (Panax notoginseng)的块根，主要化学成分为三萜皂苷，具有多方面的生理活性。在药材的加工过程中，除了主根以三七入药外，其绒根、剪口、筋条、地上部分均可用于提取三七总皂苷，其各部位总皂苷含量如表一所示。本实验用含量较高的剪口为原料。 表一 三七各部位总皂苷含量(%) 部位 三七 剪口 绒根 筋条 地上部分 含量 4,8 8,14 5,10 5,10 ,2 一、实验目的要求 1、掌握三七总皂苷的提取精制方法。 2、掌握三七总皂苷的检识鉴定方法。 二、实验原理 利用三七皂苷和共存物质极性大小、溶解特性的不同，用低极性有机溶剂萃取除去脂溶性物质;用树脂吸附法除去无机盐、氨基酸、糖等水溶性物质，从而制得纯度较高的三七总皂苷。 三、实验方法 (一)三七总皂苷的提取 三七剪口粗粉50g，以80%的乙醇回流提取二次，溶剂用量分别为150ml、100ml，回流时间依次为1.5小时、1小时，合并提取液，减压回收乙醇至提取液无醇味。 (二)三七总皂苷的精制 回收乙醇后的提取液以乙醚萃取二次以除去脂溶性物质，每次用乙醚30ml。乙醚层弃去，水层在水浴上挥去乙醚后供柱层析用。 经净化处理后的大孔树脂100g以蒸馏水浸润湿法装柱，柱内直径约2,3cm，长约50cm。将挥去乙醚后含三七皂苷的水溶液(约50ml)加入层析柱，以约1ml/分钟的流速缓缓通过此大孔树脂柱，使总皂苷完全吸附，然后依次用蒸馏水(50ml)、50%的乙醇(50ml)以大约1,1.5ml/分钟的流速洗脱以除去无机盐、氨基酸、糖等水溶性物质。最后用95%的乙醇约100ml洗脱三七总皂苷(流速为1ml/分钟)，收集此部分洗脱液，减压回收溶剂，真空干燥，即得精制三七总皂苷，称重，计算产率。 (三)三七总皂苷的检识 1、Liebermann—Burchard反应 取自制三七总皂苷少许于白色反应瓷板上，加入乙酸酐5,8滴溶解，沿壁滴入浓硫酸2滴，于交界面先出现红色，继而变为紫红色为阳性反应。 24 2、薄层层析 分别取三七总皂苷标准品和自制品少许溶于甲醇中，配成约1mg/ml的标准液及样品液，分别点于同一块板上，展开显色后二者应显示对应相同的斑点。 吸附剂:硅胶G板。 展开剂:正丁酸—乙酸乙酯—水(4:1:5)(上层) 显色剂:15%硫酸乙醇液，喷雾后烘烤显色。 25 实验九 茴香醚的提取分离和检识 八角茴香是木兰科植物Illicium verum的干燥成熟果实，为常用辛香调味科，其挥发油称八角茴香油。 八角茴香油主要含茴香醚(Anethole)、水芹烯(phellanadrene)、黄樟醚(safrole) 0等。八角茴香醚比重为0.928,0.988，折光率为1.5530,1.5600，旋光度为-2,+1。干燥的八角茴香出油率约为5,，其中又含茴香醚约85,左右，茴香醚在20?以下为白色结晶状物，从油中析出称为“脑”，23?以上熔化成油状液体。不溶于水，可溶于一般有机溶剂。 OCHO3 O 茴香醚 水芹烯 黄樟醚 一、实验目的要求 1、掌握挥发抽的水蒸汽蒸馏提取法。 2、掌握挥发油中“脑”的提取方法。 3、学习茴香醚的鉴定方法。 二、实验原理 利用挥发性成分能随水蒸汽蒸馏出来的性质提出挥发油，再利用挥发油和水不互溶的性质用盐析和溶剂萃取的方法分离挥发油，从油中用冷冻析脑的方法分离出茴香醚。 三、实验方法 (一)挥发油的提取 1、水蒸汽蒸馏 取八角茴香200g捣碎后置2000ml圆底烧瓶中，加水约1000ml浸润，然后用直火加热，进行水蒸汽蒸馏，直至馏出液不再有油滴为止(约2,3小时)。 2、盐析及萃取 将收集的馏出液加食盐使之饱和，每10m1馏出液加食盐约3 g，搅拌后放置1小时左右。将上述加食盐盐析后的馏出液小心转移到分液漏斗中，注意不要把食盐颗粒带入，以乙醚萃取三次，用量依次为40ml、40ml、30ml。合并乙醚层，加适量的无水硫酸钠，放置2小时。然后过滤，滤液于水浴上回收乙醚，即得八角茴香挥发抽，称重，计算产率，测其折光率、旋光度。 26 (二)茴香醚的分离 将所得的八角茴香油置冰箱中冷冻，即会有白色结晶析出，趁冷过滤后压干，即得茴香醚，称重，计算产率。 (三)茴香醚的鉴定 薄层层析:将茴香醚标准品和自制品、八角茴香油适量溶于乙酸乙酯中作供试液，分别点于同一块板上，展开后显色。自制茴香醚应显单一色点并和标准品色泽相同，Rf值一致。所提八角茴香油应在和标准品茴香醚相对应的地方有最大斑点，且色泽相同。 吸附剂:硅胶G。 展开剂:环己烷—乙酸乙酯(4:1) 显色剂:1%香夹兰醛硫酸溶液。 27 实验十 薄荷醇的提取分离和鉴定 薄荷为常用辛凉解表中药，来源为唇形科植物Mentha haplocalgx的全草，主要产我国长江以南省区，我国薄荷产量居世界第一位。 薄荷全草台挥发油1,以上，挥发油为无色或浅黄色液体，有强烈的薄荷香气，可溶于 0乙醇、乙醚、氯仿等有机溶剂，比重0.89,0.91，[α]-18,24 ，折光率1.458,1.471，D 沸点204,207?。 薄荷油的化学组分主要是单萜及其含氧衍生物，其中薄荷醇占75,85,，是最主要的 成分;其次尚含薄荷酮、乙酰薄荷酯等。薄荷油质量的优劣主要依据其中薄荷醇含量的高低而定，薄荷醇含量较高则质优。 0薄荷醇(Menthol):白色块状或针状结晶，mp. 41,43?，[α]-5。易溶于乙醇、乙D 醚及石油醚等，微溶于水。薄荷油经冷冻即可析出薄荷醇。 OOCCHOHO3 薄荷醇 乙酰薄荷酯 薄荷酮 一、实验目的要求 1、掌握挥发油的水蒸汽蒸馏提取法。 2、掌握挥发油中“脑”的提取方法。 3、学习薄荷醇的鉴定方法。 二、实验原理 利用挥发性成分能随水蒸汽蒸馏出来的性质提出挥发袖，再利用挥发油和水不互溶的性质用盐析和溶剂萃取的方法分离挥发油，从油中用冷冻析脑的方法分离出薄荷醇。 三、实验方法 (一)挥发油的提取 1、水蒸汽蒸馏 取阴干的薄荷全草300g切碎，置2000ml圆底烧瓶中，加水约1000ml，浸润片刻，装好挥发油提取器，小火直火加热，进行水蒸汽蒸馏，直至馏出液不再含油滴为止(约2小时)。 2、盐析及萃取 将收集的馏出液加食盐使之饱和，每10m1馏出液加食盐约3 g，搅拌后放置1小时左右。 28 3、萃取 将上述加食盐盐析后的馏出液小心转移到分液漏斗中，注意不要把食盐颗粒带入，以乙醚萃取三次，用量依次为40ml、40ml、30ml。合并乙醚层，加适量的无水硫酸钠，放置2小时。然后过滤，滤液于水浴上回收乙醚，即得薄荷挥发抽，称重，计算产率，测其折光率、旋光度。 (二)薄荷醇的分离 将所得的薄荷挥发油置冰箱中冷冻，即会有白色结晶析出，趁冷抽滤后压干，即得薄荷脑(主要成分为薄荷醇)。薄荷脑以适量乙醇重结晶，即得薄荷醇纯品，称重，计算产率，测熔点。 (三)薄荷醇的鉴定 薄层层析:将薄荷醇标准品和自制品、薄荷油适量溶于乙醇中作供试液，分别点于同一块板上，展开后显色。自制薄荷醇应显单一色点并和标准品出现在同样的位置(Rf值形同)，自制薄荷油应在和标准品薄荷醇相对应的地方有最大斑点，且色泽相同。 吸附剂:硅胶G。 展开剂:环己烷—乙酸乙酯(2:1) 显色剂:15%硫酸乙醇液，喷雾后烘烤显色。 29 实验十一 穿心莲内酯的提取分离和鉴定 穿心莲(Andrographis paniculata)是爵床科穿心莲属植物，又名榄核莲、一见喜，为一年生草本植物。性苦寒，具有清热、解毒、凉血、消肿的功效，临床用于治疗急性痢疾、胃肠炎、咽喉炎、扁桃体炎、感冒发热、疮疖肿毒及外伤感染等。 穿心莲的主要有效成分属于半日花烷型双环二萜的内酯类化合物类，主要有穿心莲内酯、新穿心莲内酯、去氧穿心莲内酯等。 1、穿心莲内酯(Andrographclide):无色四方形结晶，mp. 230,233?。易溶于丙酮、乙醇、甲醇，微溶于水、石油醚。 2、新穿心莲内酯(Neoandrographclide):无色柱状结晶，mp. 167,170?。易溶于甲醇、乙醇、丙酮，难溶于乙醚、氯仿，微溶于水。 3、去氧穿心莲内酯(Deoxyandrographclide):无色片状结晶，mp. 98,100?。易溶于甲醇、乙醇、丙酮、氯仿，可溶于苯、乙醚，不溶于水。 OOO OHOOO HOHHOHHOHCH2CHOglc2OHCH2 穿心莲内酯 新穿心莲内酯 去氧穿心莲内酯 一、实验目的要求 1、掌握溶剂法提取分离穿心莲内酯的原理和方法。 2、学习穿心莲内酯的鉴定方法。 二、实验原理 利用穿心莲内酯和共存物质在溶解性特点上的不同，用溶剂法提取分离穿心莲内酯。 三、实验方法 (一)穿心莲内酯的提取 取穿心莲茎叶粗粉100g，以约500ml95%乙醇分两次冷浸，每次24小时以上。合并两浸出液于1000ml圆底烧瓶中，加10g活性炭回流脱色30分钟左右，趁热抽滤。滤液回收乙醇至约25,30ml，转移到三角瓶中，缓缓滴加约7ml水，放置析晶，抽滤以少量的水洗涤，即得穿心莲内酯类化合物混合物。 (二)穿心莲内酯的分离 上述混合物加10倍量95%乙醇，加热使溶解，再加入溶液体积1%的活性炭回流30分钟，抽滤，滤液放置析晶，抽滤得穿心莲内酯粗品。 30 取粗品研碎，加入5倍量氯仿，冷浸放置1小时，过滤，不溶部分再同法处理二次，不溶部分即为穿心莲内酯。不溶部分以约15倍量的95%乙醇重结晶，即得精制穿心莲内酯，称重，计算产率。 (三)穿心莲内酯的鉴定 1、显色反应 浓硫酸反应:取穿心莲内酯少许于白色反应瓷板上，加入浓硫酸4滴，应显橙红色。 碱液反应:取穿心莲内酯少许于白色反应瓷板上，加50%氢氧化钾甲醇溶液5滴，应显紫红色。 Keddle反应:取穿心莲内酯少许于白色反应瓷板上，加乙醇数滴溶解，加Keddle试液2滴，应显紫色。 2、薄层层析 取穿心莲内酯标准品及自制品各少许，以乙醇溶解，配成约5mg/ml的供试液，点于同一块板上，展开显色后自制穿心莲内酯应显单一色点，斑点色泽和标准品一致且Rf相同。 吸附剂:硅胶G。 展开剂:氯仿—无水乙醇(20:1) 显色剂:10%硫酸乙醇液，喷雾后烘烤显色或用碘蒸气显色。 31 实验十二 中药化学成分的系统预试验 中药中所含的化学成分比较复杂，在研究某中药的化学成分之前，一般应先进行预试验，初步了解其中可能含有哪些类型的成份，以便对提取、分离工作提供有益的参考，预试验一般可分为两大类:一类是单项预试验，即可根据需要，重点检查某类化学成分的存在与否;另一类是系统预试验，即选用定性试验及薄层层析等方法，对中药中各类化学成分进行比较全面的检查，然后进行综合分析，初步判断有或无那些成分存在。 预试验的结果一般只能作为参考，这是由于有些定性试验不是某类化学成分的特效、专一反应，同时在进行试验时，几种化学成分之间会发生相互干扰，使反应结果呈假阳性，故常须对某些类型化学成分进一步做层析法(TLC或PC)检查，才能进一步作出较恰当的判断。 一、实验目的要求 1、学习中药化学成分的系统预试验原理及方法。 2、掌握中药化学成分的系统预试验程序及结果判断。 二、实验原理 根据中药中所含各类化学成分在不同极性的溶剂中溶解度不同。先选用不同极性的溶剂把溶解度相近的成分提取出来，分成极性不同的几个部分，即供试液;然后再选用各类成分的定性反应(包括沉淀反应和显色反应等)及层析法(TLC、PC等)检查，最后进行分析判断，初步确定有无哪几类化学成分。 三、实验方法 (一)预试验溶液的制备 1、水提取液 (1)冷水浸液:称取样品粗粉5 g，置于l00ml的三角烧瓶中，加蒸馏水50,60ml室温浸泡过夜。过滤出约20ml滤液供检查氢基酸、多肽、蛋白质用。 (2)热水提取液:将上述剩余的冷水浸泡液连同滤渣于水浴上60?左右热浸半小时，趁热过滤，滤液供检查糖、多糖、有机酸、皂苷、苷类、酚类、鞣质等成分用。 2、乙醇提取液 另称取样品粗粉l0g，置于250ml圆底烧瓶中，加95,乙醇l00ml，于水浴上加热回流一小时，稍冷后加入蒸馏水使其含醇量为70,，冷至室温，过滤，滤液转移至分液漏斗中;用l00ml石油醚(60,90?)分两次萃取，每次用石油醚50ml，以除去叶绿素等，分出下层乙醇提取液，浓缩至40~50ml，加95,乙醇50ml溶解后过滤，滤液供检查黄酮、蒽醌、香豆素、萜类、甾体化合物、内酯类化合物、强心苷、有机酸、酚类、鞣质等成分用。 3、酸性乙醇提取液 称取样品粗粉2g，加0.5%硫酸的乙醇溶液10ml，于水浴上加热回流10分钟，过滤，滤液供检查生物碱用。 4、石油醚提取液 称取样品粗粉1g，加入石油醚(60,90?)10ml，室温浸泡2~3小时，过滤，滤液供 32 检查挥发油、油脂、萜类、甾体化合物等成分用。 (二)各类成分的检查 1、检查生物碱类 取上述酸性乙醇提取液先用稀氨水调至中性，再于水浴上蒸干，残渣加5%硫酸5ml溶解后，过滤，滤液供以下实验用。 (1)碘化铋钾试验:取滤液1ml，加入碘化铋钾试剂1,2滴，如有桔红色沉淀产生，即表示可能有生物碱。 (2)碘化汞钾试验:取滤液1ml，加入碘化汞钾试剂1,2滴，如有浅黄色或白色沉淀产生，即表示可能有生物碱。 (3)硅钨酸试验:取滤液1ml，加入硅钨酸试剂1,2滴，如有浅黄色或灰白色沉淀产生，即表示可能有生物碱。 2、检查氨基酸、多肽和蛋白质类 (1)加热沉淀试验:取冷水浸液1ml，加热煮沸，如产生浑浊或沉淀，即表示可能有蛋白质。 (2)双缩脲试验:取冷水浸液1ml，加入10%氢氧化钠水溶液2滴，摇匀，再滴加0.5%硫酸铜水溶液1,滴，摇匀，如显红色、红紫色或紫色，即表示可能有多肽、蛋白质。 (3)茚三酮试验:取冷水浸液1ml，加入0.2%茚三酮乙醇溶液2,3滴，摇匀，于沸水浴中加热5分钟，冷却后，如显蓝色或蓝紫色，即表示可能有氨基酸、多肽、蛋白质。 (4)吲哚醌试验:取冷水浸液滴于滤纸片上，干燥后，喷洒吲哚醌试剂，于120?加热5分钟，若斑点显各种颜色，即表示可能有氨基酸。 3、检查还原糖、多糖和苷类 (1)菲林反应:取热水提取液1ml，加入新配制的菲林试剂4,5滴，在沸水浴上加热5分钟，如产生砖红色沉淀，即表示有还原糖或其它还原性物质。若现象不明显，可另取热水提取液4ml，加入10%盐酸1ml于水浴上加热10分钟使其水解，冷却后，若有沉淀应过滤，然后加入5%氢氧化钠水溶液调至中性，再加菲林试剂1ml，于沸水浴上加热5分钟，如产生砖红色沉淀，即表示可能有多糖或苷类。 (2)α-萘酚试验:取热水提取液1ml，加入5%α-萘酚乙醇液2,3滴，摇匀，沿试管壁缓缓加入浓硫酸1ml，如在试液与硫酸的交界面产生紫色或紫红色环，即表示有糖类、多糖或苷类。 (3)多糖的试验:取热水提取液5ml，于水浴上蒸发至1ml，再加95%乙醇5ml，若产生沉淀，过滤，用少量乙醇洗涤沉淀，再将沉淀溶于3ml水中，加入10%盐酸1ml，在水浴上加热10分钟使其水解，冷却后，加5%氢氧化钠水溶液调至中性，然后加入菲林试剂1ml，于沸水浴上加热5分钟，如产生砖红色沉淀，即表示有多糖。 4、检查皂苷类 (1)泡沫试验:取热水提取液1,2ml置于试管中，密塞，激烈振摇2分钟，如产生大量持续性泡沫，且放置10分钟以上，或加热，或加入乙醇泡沫均无明显地减少，即表示可能有皂苷。 (2)醋酐-浓硫酸反应:取热水提取液2ml，置于小瓷蒸发皿中，于水浴上蒸干，残留物加冰醋酸1ml溶解，再加醋酐1ml，浓硫酸1滴，如反应液颜色由黄?红?紫?蓝?污绿色，即表示可能有甾体皂苷，如反应液颜色由黄?红色不呈污绿色，即表示可能有三萜皂苷。 (3)溶血试验:取热水提取液滴于滤纸片上，等干燥后，喷洒红细胞悬浮液，数分钟后，在红色背景中如出现白色或淡黄色斑点，即表示可能有皂苷。 5、检查有机酸类 (1)pH试纸试验:取热水提取液及乙醇提取液，分别用pH试纸检查其pH值，如呈酸 33 性，即表示可能有游离羧酸或酚性化合物。 (2)溴酚蓝试验:取乙醇提取液滴于滤纸片上，待干燥后，喷洒0.1%溴酚蓝的70%乙酸溶液，如在蓝色背景上显黄色斑点，即表示可能有有机酸。若斑点不明显，可再喷洒氨水，然后暴露在盐酸蒸气中，背景逐渐由蓝色变黄色，而有机酸斑点仍显蓝色。溴酚蓝变色范围是:3.0(黄色),4.6(紫色)。 (3)溴甲酚绿试验:取乙醇提取液滴于滤纸片上，待干燥后，喷洒0.04%溴甲酚绿乙醇溶液，如蓝色背景上显黄色斑点，即表示可能有有机酸。溴甲酚绿变色范围是:3.8(黄色),5.4(蓝色)。 6、检查酚类化合物和鞣质类 (1)三氯化铁试验:取热水提取液及乙醇提取液各1ml，(若提取液为酸性，可直接进行检查，若为碱性应先加醋酸酸化)，加1%三氯化铁试剂1,2滴，如反应液呈绿色、蓝绿色、墨绿色、蓝紫色，即表示可能有酚类化合物或鞣质。 (2)三氯化铁—铁氰化钾反应:取热水提取液及乙醇提取液分别滴于滤纸片上，待干燥后，喷洒三氯化铁—铁氰化钾试剂，如斑点呈蓝色，即表示可能有酚类、鞣质或还原性化合物。 (3)香草醛—盐酸反应:取热水提取液及乙醇提取液分别滴于滤纸片上，待干燥后，喷洒香草醛—盐酸试剂，如斑点呈不同程度的红色，即表示有间苯二酚和间苯三酚化合物。 (4)明胶试验:取热水提取液1ml，加入氯化钠—明胶试剂2,3滴，如有沉淀产生，即表示可能有鞣质。 7、检查甾体及三萜类化合物 )醋酐-浓硫酸反应:取乙醇提取液2ml，置于小瓷蒸发皿中，于水浴上蒸干，残留 (1 物加冰醋酸1ml溶解，再加醋酐1ml，然后滴加浓硫酸1滴，如反应液颜色由黄?红?紫?蓝?污绿色，即表示可能有甾体化合物，如反应液颜色仅由黄?红?紫红色，即表示可能有三萜类化合物。 (2)氯仿-浓硫酸反应:取乙醇提取液2ml，置于小瓷蒸发皿中，于水浴上蒸干，残留物加氯仿1ml溶解，并转移至小试管中，沿管壁加入浓硫酸1ml，如氯仿层显红色或青色，硫酸层于紫外光灯下观察有绿色荧光，即表示可能有甾体化合物。 8、检查黄酮类化合物 (1)盐酸—镁粉反应:取乙醇提取液1ml，加入镁粉少许，再加入浓盐酸2,3滴(必要时水浴加热)，如反应液或产生的泡沫显红,紫红色，即表示可能有黄酮类化合物。 (2)三氯化铝反应:取乙醇提取液滴于滤纸片上，待干燥后，喷洒1%三氯化铝乙醇溶液，如斑点呈黄色，于紫外灯下检视呈明显的黄色或黄绿色荧光，即表示可能有黄酮类化合物。 (3)氨熏试验:取乙醇提取液滴于滤纸片上，待干燥后，置于浓氨水瓶上熏半分钟，如斑点显黄色或黄色加深，当滤纸片离开氨蒸气数分钟后，黄色减弱或消退;另将氨熏后的滤纸置于紫外光灯下检视，斑点呈黄色荧光，即表示可能有黄酮类化合物。 9、检查内酯、香豆素及其苷类 (1)荧光试验:取乙醇提取液滴于滤纸片上，待干燥后，于紫外灯下检视，如斑点呈蓝色荧光，喷洒1,氢氧化钾试剂后斑点有荧光颜色转变为黄绿色，即表示可能有香豆素及其苷类。 (2)重氮化反应:取乙醇提取液1ml，加3,碳酸钠水溶液1ml于沸水浴上加热3分钟，冷却后，加人新配制的重氮化试剂1,2滴，如显红色，即表示可能有香豆素及其苷类。 (3)异羟肟酸铁反应:取乙醇提取澈1m1，加7,盐酸羟胺甲醇液3,5滴和10%氢氧化钾甲醇液10滴，于水浴上加热至反应开始(有气泡产生)，冷却，再加人5,盐酸使成弱酸 34 性，加1,三氯化铁水溶液5滴，如反应液有橙红色或紫红色出现，即表示可能有酯类、内酯类、香豆素及其苷类。 10、检查强心苷类 (1)3，5一二硝基苯甲酸反应(Kedde反应):取乙醇提取液1m1，加3，5一二硝基苯甲酸试剂3,4滴，如反应液呈红色或紫色，即表示可能有强心苷。 (2)碱性苦味酸反应(Baljet反应):取乙醇提取液1ml，加碱性苦味酸试剂1,2滴，如反应液呈橙色或红色，即表示可能有强心苷。 (3)亚硝酰铁氰化钠反应(Legal反应):取乙醇提取液1ml，置于小瓷蒸发皿中，于水浴上蒸干，残留物加吡啶1ml溶解，再加0.3%亚硝酰铁氰化钠溶液4,5滴，混匀，再加入氧氧化钠溶液1,2滴，混匀，如反应液呈红色，且颜色又逐渐消退，即表示可能有强心苷。 11、检查蒽醌类 (1)碱液试验(Borntrager反应):取乙醇提取液lml，加入10,氢氧化钠水溶液1ml，如反应液呈红色，再加30,过氧化氢5滴，加热后，红色不消退，用5,盐酸酸化后，如红色消退，即表示有蒽醌及其苷类。 (2)醋酸镁反应:取乙醇提取液1ml，加1,醋酸镁甲醇溶液1,2滴，如反应液呈红色，即表示有蒽醌及其苷类。 (3)硼酸溶液试验:取乙醇提取液滴于滤纸片上，待干燥后，喷洒1%硼酸水溶液，如斑点呈橙黄色或红色，且于紫外灯下检视有荧光，即表示有蒽醌及其苷类。 12、检查挥发油、油脂类 (1)油斑试验:取石油醚提取液滴于滤纸片上，如油斑在室温下可挥发不留痕迹，即表示可能有挥发油;如油斑不消失，即表示有油脂类。 (2)磷钼酸试验:取石油醚提取液滴于滤纸片上，喷洒25%磷钼酸乙醇液，115,118?加热2分钟，如斑点呈蓝色，背景为黄绿色或藏青色，即表示有油脂、三萜及甾醇类。 (3)香草醛—硫酸试验:取石油醚提取液滴于滤纸片上，喷洒香草醛—6%硫酸试剂，如斑点呈红、蓝、紫等各种颜色，即表示可能有挥发油、萜类和甾醇类。 (三)圆型滤纸层析法 取一张圆型滤纸，在距圆心1.0,1.5cm周围用毛细管点加样品，一张滤纸可同时点6,8个样品，待点样溶剂挥发后，在滤纸圆心处穿入一滤纸芯，然后放在合适的培养皿中，使纸芯与培养皿中的展开剂接触，于圆型滤纸上加盖培养皿盖，进行层析。当溶剂前沿接近培养皿边缘时，取出滤纸，挥干溶剂后显色，根据样品斑点颜色，可确定样品中的成分。 1、检查有机酸类 展开剂:95%乙醇 样品:? 热水提取液 ? 乙醇提取液 ? 柠檬酸乙醇溶液(对照品) 显色剂:0.1%溴酚蓝试剂，有机酸斑点呈黄色。 2、检查挥发油类 展开剂:95%乙醇 样品:? 乙醇提取液 ? 石油醚提取液 显色剂:先观察滤纸上有无油迹斑点，如有油迹斑点，可将滤纸加温烘烤，若油斑消失，则表示有挥发油存在。 (四)各类成分的层析检查 中药化学成分的预试验除用上述的定性反应外，还可用层析法进行，它不仅可以减少 35 成分间的相互干扰，展析结果容易判断，还可以根据层析所用的条件加展开剂的组成，层析 种类以及色斑的比较值(Rf值)，初步判断样品中所含化学成分的极性大小和溶解性能，甚 至可以通过和标准样品对照，初步确定样品中含有何种化合物。 用层析法预试各类化学成分的参考层析条件如下: 1、生物碱类: (1)氧化铝层析(中性、碱性) 展开剂:氯仿—甲醇(9:1) 苯—乙醇(8:2) 显色剂:改良碘化铋钾试剂 (2)硅胶G层析 展开剂:环己烷—二乙胺(9:1) 氯仿—丙酮—二乙胺(5:4:1) 二甲苯—正丁醇—甲醇—二乙胺(40:40:6:2) 显色剂:改良碘化铋钾试剂 2、氨基酸类 (1)纸层析 移动相:正丁醇—醋酸—水(4:1:5)上层 显色剂:茚三酮试剂 (2)硅胶G层析 展开剂:正丁醇—醋酸—水(4:1:1) 显色剂:茚三酮试剂 3、糖类 (1)纸层析 移动相:乙酸乙酯—吡啶—水(2:1:2) 显色剂:茴香胺—邻苯二甲酸试剂 (2)硅胶G层析 展开剂:丁酮—醋酸—水(6:1:3) 乙酸乙酯—甲醇—醋酸—水(12:3:3:2) 显色剂:茴香胺—硫酸试剂 4、皂苷类 (1)硅胶G层析 展开剂:正丁醇—乙醇—25%氨水(7:2:5) 氯仿—甲醇—水(65:35:10) 显色剂:喷雾10%硫酸乙醇液后于100?左右加热数分钟 (2)氧化铝层析 展开剂:己烷—乙酸乙酯(7:3) 苯—乙酸乙酯(7:3) 显色剂: 5、有机酸类 (1)纸层析 移动相:正丁醇—醋酸—水(4:1:5)上层 显色剂:喷雾0.1%溴酚蓝乙醇液后于110?加热数分钟 (2)硅胶G层析 展开剂:苯—甲醇—醋酸(79:14:7) 36 显色剂:喷雾0.1%溴酚蓝乙醇液后于110?加热数分钟 6、酚类、鞣质 (1)纸层析 移动相:正丁醇—醋酸—水(4:1:5)上层 显色剂:1%三氯化铁乙醇溶液 (2)硅胶CMC—Na层析 丙酮(9:1) 展开剂:氯仿— 显色剂:1%三氯化铁乙醇溶液 7、黄酮类化合物 (1)聚酰胺层析 展开剂:水—乙醇—乙酰丙酮(4:2:1) 显色剂:于紫外灯下检视，? 氨熏，? 1%三氯化铝乙醇溶液 (2)纸层析 移动相:正丁醇—醋酸—水(4:1:5)上层 显色剂:于紫外灯下检视，? 氨熏，? 1%三氯化铝乙醇溶液 (3)硅胶G层析 展开剂:乙酸乙酯—丁酮—甲酸—水(5:3:1:1) 显色剂:于紫外灯下检视，? 氨熏，? 1%三氯化铝乙醇溶液 8、香豆素类 (1)硅胶G层析 展开剂:甲苯—甲酸乙酯—甲酸(5:4:1) 石油醚—乙酸乙酯(5:1) 显色剂:于紫外灯下检视，重氮化试剂 (2)纸层析 移动相:正丁醇—醋酸—水(4:1:5)上层 显色剂:于紫外灯下检视，重氮化试剂 9、强心苷类 (1)硅胶G层析 展开剂:乙酸乙酯—吡啶—水(5:1:4) 二氯甲烷—甲醇—甲酰胺(80:19:1) 显色剂:碱性3，5-二硝基苯甲酸试剂 (2)纸层析 移动相:氯仿—四氢呋喃—甲酰胺(50:50:6.5) 二氯甲烷—甲醇—甲酰胺(50:50:4) 显色剂:碱性3，5-二硝基苯甲酸试剂 10、蒽醌类 (1)硅胶CMC—Na层析 展开剂:苯—乙酸乙酯(8:2) 石油醚—甲酸乙酯—甲酸(15:5:1) 显色剂:? 氨熏，? 5%氢氧化钾乙醇溶液 (2)纸层析 移动相:正丁醇—醋酸—水(4:1:5)上层 甲苯—醋酸—水(5:5:1) 显色剂:? 氨熏，? 5%氢氧化钾乙醇溶液 37 11、挥发油类 (1)硅胶G层析 展开剂:石油醚 正己烷 石油醚—乙酸乙酯(95:5) 正己烷—乙酸乙酯(85:15) 显色剂:喷雾茴香醛—硫酸试剂后于105?加热数分钟 38 附录A 常用显色剂配制 1、改良碘化铋钾(Dragendorff)试剂:溶液a、0.85g次硝酸铋溶于10ml冰醋酸，加水40ml。b、8g碘化钾溶于20ml水中，将a和b以等体积混合即得。如作喷雾剂，取混合液1ml，冰醋酸2ml，水10ml混合即得。 2、碘化汞钾(Mayer)试剂:氯化汞1.36g和碘化钾5g各溶于20ml水中，混合后加水稀释至100ml。 3、硅钨酸试剂:5g硅钨酸溶于100ml水中，加盐酸少量至pH2左右。 4、双缩脲(Biuret)试剂:等量的1%硫酸铜溶液和40%氢氧化钠液混合。 5、茚三酮试剂:0.3g茚三酮溶于正丁醇100ml中，加醋酸3ml(或0.2g茚三酮溶于100ml乙醇或丙酮中)。 6、吲哚醌试剂: 7、菲林(Fehling)试剂: a、结晶硫酸铜6.23g，加水至100ml。b、酒石酸甲钠34.6g，及氢氧化钠10g，加水至100ml。将a和b等量的混合即可。 8、α-萘酚(Molisch)试剂:a、α-萘酚1g，加75%乙醇至10ml。b、浓硫酸。 9、三氯化铁冰醋酸(Keller-Killiani)试剂:a、1%三氯化铁溶液0.5ml，加冰醋酸至100ml。b、浓硫酸。 10、三氯化铁-铁氰化钾试剂:a、2%三氯化铁水溶液。b、1%铁氰化钾水溶液。应用时将a和b等体积的混合或分别滴加。 11、明胶试剂:10g氯化钠，1g明胶，加水至100ml。 12、重氮化试剂:a、对硝基苯胺0.35g，溶于浓盐酸5ml中，加水至50ml。b、亚硝酸钠5g，加水至50ml。应用时将a和b等量在冰水浴中混合后，方可使用，并应临时配制。 13、异羟肟酸铁试剂:a、新鲜配制的1mol/L羟胺盐酸盐(M=69.5)的甲醇液。b、1.1mlo/L氢氧化钾(M=56.1)的甲醇液。c、三氯化铁溶于1%盐酸中的浓度1%的溶液。应用时将a、b和c液体按序滴加，或将a、b混合后再滴加c液。 14、3，5-二硝基苯甲酸(Kedde)试剂:a、2%3，5-二硝基苯甲酸甲醇液。b、1mlo/L氢氧化钾甲醇溶液活5%氢氧化钠乙醇液。应用时将a和b等量混合即可。 15、碱性苦味酸试剂:a、1%苦味酸水溶液。b、10%氢氧化钠溶液。 16、亚硝酰铁氰化钠-氢氧化钠(Legal)试剂:a、吡啶。b、0.5%亚硝酰铁氰化钠溶液。c、10%氢氧化钠溶液。 17、香草醛-浓硫酸试剂:5%香草醛浓硫酸液(0.5g香草醛溶于100ml硫酸-乙醇(4:1)中)。 39 中药化学习题集 第一章 绪 论 第二章 中药化学成分的一般研究方法 1、简述中药化学研究在发展中医药中的作用。 2、简述中药化学成分常见已知重要类型的溶解性特点。 3、试论“相似相溶”原理及其在中药化学中的应用。 4、何为溶剂提取法,比较几种溶剂提取法的特点和适用范围。 5、试析水蒸汽蒸馏的原理和应用。 6、如何消除液一液萃取中的乳化现象。 7、试论层析法的原理及其在中药化学上的应用。 第三章 糖和苷类化合物 !、什么是苷,什么是苷元,什么是α一苷,什么是β一苷, 2、苷由哪几部分组成?苷键是怎样形式的一种结构? 3、指出下列化合物的苷健类型，并比较每组苷类酸水解的难易顺序，简述理由((结 构式见讲义) (1) A、毛茛苷 B、天麻苷 C、芦荟苷 D、巴豆苷 E、黑芥子苷 F、苦杏仁苷 (2) A、β—D一葡萄糖苷 B、 α—L一鼠李糖苷 C、α―L一阿拉伯糖 苷(苷元相同) 4、简述苷类结构研究的一般程序。 5、确定苷键构型的一般方法有哪几种? 6、如何确定糖和糖之间、糖和苷元之间的连接位置及糖和糖之间的连接顺序? 7、多食苦杏仁为什么会中毒? 8、硫苷的分子结构有何特点, 9、在提取原生苷和次级苷时应注意哪些问题? 10、比较下列化合物在进行纸层析时的Rf值大小: 层析条件:支持剂为层析滤纸(溶剂系统为正丁醇―醋酸一水(4:1:5)上层( A、葡萄糖 B、鼠李糖 C、葡萄糖醛酸 D、果糖 第四章 醌类化合物 1、按化学结构蒽醌可分为哪几类,它们的结构特点是什么? 2、写出下列化合物的结构式，并指出它们所属的结构类型: 40 (1) 大黄酚 (2) 大黄素 (3) 大黄素甲醚 (4) 芦荟大黄素 (5) 大黄酸 (6)α一羟基蒽醒 (7)β一羟基蒽醌 (8) 番泻苷 (9) 茜草素 (10) 芦荟苷 3、比较下列各组化合物的酸性强弱，简述理由。 (1) A 、1一羟基蒽醌 B、 l，8一二羟基蒽醒 C、 l，5一二羟基蒽醌 D、 1(4-二羟基蒽醌 (2) A 、2一羟基蒽醌 B、1，5一二羟基蒽醌 C、α一羟基葸醒 ，6一二羟基蒽醌 E、1 2—二羟基蒽醌 F、大黄酸 D 、2 (3) A、 1，2一二羟基蒽醒 B、2一羟基蒽醌 4、如何检识药材中有蒽醌类成分存在? 5、什么是pH梯度萃取法,用pH梯度萃取法分离蒽醌衍生物的原理是什么? 6、蒽醌和蒽酮在结构上有什么区别,它的之间有何关系,用什么方法可以区别它 们, 7、用化学方法鉴别下列各组化台物: (1) A、1，8一二羟基蒽酮 B 、1，8一二羟基蒽醌(大黄酚) (2) A 、1，8一二羟基蒽醌(大黄酚) B、 1，2一二羟基蒽醌(茜草素) (3) A、蒽酚 B、芦荟大黄素 (4) A 、1，5一二羟基蒽醌 B、 1，4一二羟基蒽醌 8、比较下列化合物进行薄层层析时的Rf值大小: 层析条件:吸附剂为硅胶CMC—Na，展开剂为环已烷一乙酸乙酯一甲醇一甲酸一水 (3:2:1:1:2)上层( A、大黄素 B、大黄酸 c、大黄酚 D、大黄索甲醚 E、芦荟大黄素(结构式 见讲义)， 9、中药大黄中含有下列化合物，请 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 一个合理流程，将它们提取出来完全分离 开，并简述理由: A、二蒽酮苷 B、蒽醌单糖苷 c、蒽醌二葡萄苷 D、大黄素 E、大黄酸 F、大黄酚 G、大黄素甲醚 H、芦荟大黄素 10、从中药大黄中得到一蒽醌苷，分子式CHO，用酸水解后，生成芦荟大黄素 212010KBr―1―1及D一葡萄糖，苷的IRV:1626cm，1674cm，苷的完全甲基化物经甲醇解后得maxKBr―1―1到的多甲基化苷元的IRV: 1665crn，3480cm，苷的全甲基化物HNMR: max δ4. 8ppm(双峰,J=7(2Hz)，根据以上信息，写出蒽醌苷的结构式，并简述理由。 第五章 苯丙素类化合物 1、什么是香豆素,香豆素分哪几类,各类的基本结构是什么? 2、判断下列论述是否正确，如有错误，请予改正。 (1) 小分子香豆素及其苷类，多有香味，有挥发性和升华性。 (2) 游离的香豆素未与糖形成苷，所以极性低，难溶于水。 (3) 香豆素与浓碱长时间共沸，则可能转变为稳定的邻羟基桂皮酸盐。 (4) 中药提取物若对异羟肟酸铁反应呈阳性，则其中必含有香豆素类化合物。 (5)香豆素母核上引入7一OH后即有强烈的蓝色荧光。所以7，8一二OH香豆素也显 蓝色荧光。 (6)检查香豆素6位是否有取代时应先进行Gibbs反应和Emcrson反应，若呈阴性反应， 41 再进行水解后进行Gibbs反应和Emcrson反应，此时呈阳性表示6位无取代，若仍呈阴性则表明6位有取代。 3、香豆素的异羟肟酸铁反应的机理是什么,用反应式加以说明。 4、用碱溶酸沉淀法提取香豆素及其苷类的原理是什么,操作时应注意什么问题? 5.、简述从秦皮中提取分离秦皮甲素，秦皮乙素的原理。 6、以硅胶G板对下列成分进行TLc，试比较Rf值顺序。简述理由。 1:1) 展开剂:氯仿一醋酸一水(4: (A)、8一OCH香豆素((B)、7一OH香豆素 (C)、7, 8一二OH香豆素 3 (D)、7一OH，6—O—glu香豆素。 7、什么是木脂素,木脂素分哪几类,木脂素有哪些物理化学性质,怎样提取，分离 它们? 第六章 黄酮类化合物 1、什么是黄酮类化合物,其分类依据是什么,写出其主要类型的母核结构。 2、填空: (1) 游离的黄酮类化舍物一般难溶或不溶于___________。可溶于______、________、 _________、________等有机溶剂及________溶液中，其中_______、________、_______等系,,,型分子，很难溶于水。而,,,,和,,,,等系,,,,型分子，在水中的溶解度稍大;花色素因以,,,,型存在(具有,,,,的通性，故水溶度较,,,。 (2) 与HCI—Mg粉作用可被氢化还原而显红到紫色的有,,,、,,,、,,,; 黄酮类化合物如,,,位没有羟基或虽有羟基但糖苷化，则反应不明显;,,,、,,,、,,,类为负反应。 (3) 黄酮类化合物大多具有,,,可被聚酰胺吸附(而与不含,,,,,的成分分离， 也可用,,,、,,,等层析法分离。 (4) 在中药的醇提取液中加饱和的中性醋酸铅水溶液，可使具有,,,或,,,的黄 酮类化合物沉淀析出。 3、试比较黄酮类(二氢黄酮类及花色素类的溶解性。 4、羟基位置与黄酮类化合物的酸性有何关系,为什么7,4ˊ-二羟基黄酮的酸性最强 (含一COOH者除外)(而5一OH黄酮的酸性最弱, 5、比较下例化合物的酸性强弱，并用pH梯度法将其分组。 OOHOCH3 OOOHHO OHOHOOHOOHO (A) (B) (C) OOHOOHOHOH OOHgluO HOOCHCOOH3 OHOOOHO (D) (E) (F) 42 6、怎样鉴别C一OH黄酮和C一OH黄酮,写出反应式加以说明。 35 7、简述“碱溶酸沉法”提取黄酮类化合物的原理，操作时应注意哪些问题, 8、在芦丁提取过程中，将药物放人沸水中的目的何在,能否用冷水慢慢加热,为什么, 加适量硼砂的目的何在? 9、黄芩中黄芩苷的结构特点是什么,它为何不易被稀酸水解? 10、黄芩饮片变绿的原因是什么,如何防止, 11、黄酮类化合物在进行聚酰胺层析时，Rf值与溶剂系统及结构有何关系? 12、黄酮类化合物及其苷类，在进行纸层析时，Rf值与溶剂系统及结构有何关系? 13、某金丝桃属植物中提取得到的总黄酮类成分含有下例三种化台物:槲皮素、异槲皮素苷及芦丁(结构式见教材)(若用聚酰胺层析分离它们，请推测在用甲醇洗脱时(醇的浓度由低至高)，它们流出的先后顺序，并说明原因。 14、从黄芩中提取得到的总黄酮已知含有黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素(结构式见教材)，若用纤维素薄层层析分离，用展开剂n—BuOH—HAC—H0 (6:1 5:2 5)展开，2 试推测它们Rf值大小顺序。 第七章 萜类和挥发油 1、试述萜类概念的发展及其意义。 2、试述萜类分类的基本原则。 3、举例说明几种重要单萜化合物的用途及其主要植物资源。 4、完成从松节油制取樟脑的化学过程。 5、简述环烯醚萜的结构特点和主要性质。 6、完成从穿心莲中提取分离穿心莲内酯的方法。 7、写出下列化合物的结构式，并指明所属类型:异戊二烯、α一柠檬醛、薄荷醇、桉油精、莰烷、樟脑、龙脑、桅子苷、α—桉叶醇、穿心莲内酯。 8、什么是挥发油,简述其性质特点，化学组成, 9、比较几种挥发油提取、分离方法的特点。 10、什么是生源的异戊二烯法则, 11、举例说明硅胶—硝酸银层析在挥发油组分分离中的应用。 第八章 三萜及皂苷 1、什么是皂苷,皂苷分为哪几类,皂苷中糖的部分有何特点? 2、写出皂苷中具有环戊烷骈多氢菲基本母核的各种皂苷元的基本结构。 3、皂苷有哪些特殊性质,如何检识一种药材中是否含有皂苷, 4、甾体皂苷与强心苷在结构上有何区别,如何用化学方法区分二者? 5、根据皂苷的溶解性，在提取皂苷时应选择哪些溶剂,常见的提取方法有几种,分 离纯化的方法有哪些? 6、皂苷与甾醇形成分子复合物有何规律,有何应用? 7、获得真正的皂苷元可用哪些方法,试举一例。皂苷加酸水解得苷元时，应注意什么问题? 8、用化学方法区别下列各组化合物: 43 (1) 游离三萜类，三萜皂苷类 (2) 甾体皂苷，三萜皂苷 9、某植物中分离出皂苷(A)CHO熔点262?一264?(d)，经下述试验( 416611 (1)A+醋酐一浓硫酸(呈粉红色 (2) A，7,硫酸水溶液，加热5小时，以氯仿提取，自氯仿部分得苷元，经测定为羽扇豆醇，水检液经PC检出有D一葡萄糖醛酸及L一阿拉伯糖。以定量测定示苷元含量为58,(糖部分为42,，水解液中葡萄糖醛酸与阿拉伯糖之分子数比为l:1。 (3) A+1,HSO~-MeOH室温放置5天，加水稀释，正丁醇提取，自正丁醇部分得24 单体(B)，水解液以PC检出仅有L-阿拉伯糖，将B再以7,硫酸水溶液加热数小时，得羽扇豆醇及葡萄糖醛酸。 (4) A、B分别经以下处理: Et-CHN LiAlH CHI,AgO 室温放 22232 MeoH Et0—THF DMF 置48小时。 2 HOAc—HCI—H0反应产物进行气相层析，自A的反应产物GC检出2、3、6---三甲2 氧基一D一葡萄糖及2(3、5一三甲氧基一L一阿拉伯糖，自B的反应产物GC检出2、3、4、6一四甲氧基一D一葡萄糖。 B (5)A淀粉酶水解 水解液检出阿拉伯糖 (6) 测得A的2分子比旋度,M,一132?，羽扇豆醇分子比旋度[M]+140 58"C(已DD αα知:D一葡萄糖甲苷,M,，308?6?，L一阿拉伯糖甲苷,M,-205?。 DD 根据以上结果，回答问题: 简要说明A中苷元与糖的连接顺序(糖与糖连接位置。 ? ? 写出A的结构式(糖部分以Haworth表示)。 ? 确定苷鍵构型的方法有几种?本题根据哪几个实验,怎样判断该皂苷中苷键的构型? 实验(4)各步反应产物是什么(以文字说明)( ? 10、人参有效成分一皂苷，迄今已清楚结构的有多少种,按苷元结构划分几种类型 (写出结构式)?各类型的苷元名称是什么, 第九章 甾体类化合物 1、什么是强心苷,强心苷苷元的基本结构特征是什么,强心苷分为哪几类,写出各类 的基本结。 2、强心苷元命名中的“别”、“异”、“表”字分别代表什么含义? 3、影响强心苷溶解性的因素有哪些?是如何影响的? 4、强心苷的水解反应包括哪些内容,简要说明各种水解法的水解部份及其水解反应 产物。 5、分别写出强心苷的颜色反应中作用于甾体母核，α、β—不饱和内酯环及作用于α—去氧糖的两个反应所需的试剂及其反应颜色。 6、用多种方法鉴别下列化台物:A(加拿大麻苷，B、绿海葱苷(结构见教材)( 44 O OO O CHOHCH2OHCOH3 OOOOHOHOH HOOOHOCH3OH A、加拿大麻苷 B、绿海葱苷 7、比较下列强心苷的毒性。 A(毒毛旋花子苷元一D一加拿大麻糖 B(毒毛旋花子苷元 C(二氢毒毛旋花子苷元 D(毒毛旋花子苷元一D—加拿大麻糖一D一葡萄糖 E(毒毛旋花子苷元—D—加拿大麻糖一(D一葡萄糖) 2 8、写出甲、乙型强心苷在碱性醇溶液中发生的反应式。 9、提取强心苷(原生苷、次生苷)时应注意哪几方面的因素,从黄花夹竹桃果仁中提取分离黄夹苷的原理是什么,(提取流程参见教材)。 10、已知黄花夹竹桃果仁中含有下例七种强心苷(黄夹苷A，B;黄夹次苷A、B、 1)C、D及单乙酰黄夹次苷B(结构式见教材)，若以中性氧化铝为吸附剂，氯仿:甲醇(9:为展开剂，进行TLC，其Rf值顺序如何? 11、某中药成分?Legal反应，Kedde反应均呈红色，?无强心作用:?Borntrager反应呈红色(该成分可能为哪类化合物?如何解释现象, 12、胆汁酸类成分的基本结构是什么, 13、什么反应均可使胆汁酸类成分显色,写出反应所需的试剂及产生的颜色。 14、胆汁酸类成分甾环上酮基的还原反应这一化学性质在医药上有何意义? 15、比较牛黄与熊胆中胆汁酸类成分的异同并写出结构式。 16、蟾酥中所含主要成分有哪些,具有强心作用的成分如何检识, 17、蟾毒配基和乙型强心苷元化学结构上有区别吗,用什么方法可以区别结合型蟾蜍甾二烯类和乙型强心苷类, 第十章 生物碱 1、什么是生物碱, 2、写出下列杂环衍生物类生物碱的基本母校:(1) 吡啶类 (2) 双稠吡定类(喹诺里西啶类)(3)吲哚类 (4)吡咯类 (5)1―苄基异喹啉 (6)吲哚里西啶类 (7) 莨菪烷类 (8) 喹啉类 (9) 咪唑类 (10) 异喹啉类 (11)吖啶酮类 (12) 吡咯里西啶类 (13) 苄基异喹啉类原小檗碱型 3、生物碱为什么具有碱性,其碱性强弱受哪些因素的影响? 4、试述生物碱及其盐类的溶解性，比较吗啡和可待因的溶解性。 5、哪些类型的生物碱经碱化后仍不易被亲脂性有机溶剂提取出来, 6、指出下列生物碱的酸碱性(强碱性、中强碱性、弱碱性、中性或酸碱两性)。 45 (1)黄连碱 (2)秋水仙碱 (3)槟榔次碱 (4)益母草碱 (5)麻黄碱 (6)吗啡 (7) 石榴皮碱 (8)咖啡碱 (9)利血平 (10)小檗碱(结构式见讲义) 7、什么是生物碱沉淀试剂,应用生物碱沉淀试剂检识生物碱时应注意什么问题, 8、试述溶剂法提取生物碱时，各种溶剂的适用范围。 9、用离子交换树脂法分离生物碱的原理是什么? 10、从洋金花中提出的茛菪碱和东莨菪碱可采用哪些方法分离,各种分离方法的原理 是什么? 11、比较下列各组生物碱的碱性强弱。并说明原因((结构式见讲义) (1) A、罂粟碱 B、萨苏里丁 (2) A、可待因 B、吗啡 (3) A、麻黄碱 B、伪麻黄碱 (4) A、阿托品 B、樟柳碱 B、山茛菪碱 (5) A、苯丙胺 B、去甲麻黄碱 (6) A、顺式10一羟基二氧去氧可待因 B、反式10一羟基二氢去氧可待因 (7) A、巴马汀 B、四氢巴马汀 (8) A、小檗碱 B、麻黄碱 C、番术鳖碱(士的宁) D、伪番术鳖碱(伪士的 宁) E、秋水仙碱 12、比较下列各组化合物在下述层析条件下的Rf值:(结构式见讲义) (1) 层析条件:硅胶G TLC，氯仿一丙酮一二乙胺 A、阿马林 B、蛇根碱 C、利血平 Na TLC(氯仿一甲醇一氨水 (2) 层析条件:硅胶CMC— A、苦参碱 B、氧化苦参碱 C、羟基苦参碱 l 3、选用适当有溶剂或试剂分离下列各组化合物:(结构式见讲义) (1) A、汉防已甲素 B、汉防已乙素 (2) A、阿托品 B、樟柳碱 (3) A、吗啡 B、可待因 (4) A、金鸡宁 B、中性硫酸奎宁 (5) A、麻黄碱 B、伪麻黄碱 14、用层析法检识生物碱时，可选用哪些层析方法? 15、用吸附薄层层析法检识生物碱时，常选用哪些吸附剂、展开剂和显色剂, 16、麻黄生物碱的哪些特殊结构可用于检识麻黄碱的存在?如何检识? 17、乌头中有毒成分是什么?其结构有何特点?怎样处理可降低其毒性, 18、制备延胡索乙素(d1一四氢巴马汀)可用哪些药材做原料,如何将所得的巴马汀 制成延胡索乙索? 19、从药材中提取分离小檗碱的原理是什么,如何检识小檗碱的存在? 20、什么是生物碱显色试剂,应用生物碱显色反应检识生物碱时应注意什么问题, 21、写出下列化合物的结构式，并指出所属结构类型。 (1) 莨菪碱 (2) 东茛菪碱 (3) 山茛菪碱 (4) 樟柳碱 (5) 小檗碱 (6) 巴 马汀 (7) 延胡索乙素 (8) 麻黄碱 (9) 伪麻黄碱 (10) 汉防已甲素 (11) 汉防已乙素 (12)苦参碱 (13)士的宁 (14)乌头碱 (15)吗啡 第十一章 鞣质 46 1、 何为鞣质,鞣质分为哪几类, 2、简述鞣质类化合物的生理活性。 3、在中药制剂中如何除去视为杂质的鞣质类成分, 4、简述鞣质的一般理化性质。 5、设计一种方法初步判断某植物中是否含有鞣质类化合物。 第十二章 其它成分 1、常见生物大分子有哪几类,简述其结构特点及检识方法。 2、简述氨基酸和蛋白质的一般提取分离方法和检识方法。 4(简述多数蛋白质和酶的一般溶解行为。 5、采用水提法提取氨基酸时，怎样去除共存的蛋白质和多糖等杂质, 6、简述中药有效成分研究的途径方法( 47 参考文献 [1] 《中华人民共和国药典》1990年版，二部，P430。 [2] 冀春茹、王浴铭等编，《中药化学实验技术与实验》，P430，河南科学技术出版社，1986。 [3] 四川医学院药学系，《中草药化学实验教学资料》，1975，P90。 ):38;1977，(2):39。 [4] 中草药通讯，1977，(1 [5] 《中华人民共和国药典》1990年版，一部，P177。 [6] 冀春茹、王浴铭等编，《中药化学实验技术与实验》，P230，河南科学技术出版社，1986。 [7] 阚铭、黄泰康等编，《中药化学实验操作技术》，P133，中国医药科技出版社，1988。 [8] 沙世炎、徐礼焱等编，《中草药有效成分分析法》，P21，人民卫生出版社，1985。 [9] 阚铭、黄泰康等编，《中药化学实验操作技术》，P146，中国医药科技出版社，1988。 [10] 《中华人民共和国药典》1990年版，一部，P15。 [11] Tetrahedron Lett，1975，42:3625。 [12] 中草药，1981，12(8):41;12(9):37。 [13] 冀春茹、王浴铭等编，《中药化学实验技术与实验》，P353，河南科学技术出版社，1986。 [14] 林启寿编，《纸上色谱及其在中草药成分分析中的应用》，科学出版社，1982。 [15] 阚铭、黄泰康等编，《中药化学实验操作技术》，P209，中国医药科技出版社，1988。 [16] 林启寿编，《中草药成分化学》，科学出版社，1977。 [17] 中国科学院上海药物研究所编，《中草药有效成分提取与分离》，上海科学出版社，1983。 [18] 阚铭等编，《中药化学实验操作技术》，中国医药科技出版社，1988。 [19] 冀春茹、王浴铭等编，《中药化学实验技术与实验》，河南科学技术出版社，1986。 [20] 曹治权编，《层析显色试剂手册》，中国商业出版社，1986。 [21] 杨云、冯卫生编，《中药化学成分提取分离手册》，中国中医药出版社，1998。 [22] 孙文基主编，《天然药物成分提取分离与制备》，中国医药科技出版社，1999。 48