病毒性出血症疫苗免疫剂量对幼兔血清抗体效价的影响江苏农业学报2006310

病毒性出血症疫苗免疫剂量对幼兔血清抗体效价的影响 杨龙圣1  薛家宾2  王芳2  徐为中2  胡元亮1 （1 南京农业大学动物医学院，江苏 南京 210095；2 江苏省农科院兽医研究所，江苏 南京 210014） 摘要：选择35、40、45三种日龄新西兰家兔各30只，每个日龄兔随机均分为5组，对照组注射生理盐水，4个试验组分别注射4种剂量（1ml、2ml、3ml、4ml）的兔病毒性出血症疫苗，分别于免疫前及免疫后1～7周内采血测定血清抗体效价的动态变化。结果 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明，各日龄兔的2ml、3 ml、4 ml剂量组的抗体上升速度和有效抗体维持时间均显著大于同日龄的1 ml剂量组；35日龄兔的2 ml、3 ml、4 ml剂量组的抗体峰值显著高于1 ml剂量组。提示35日龄兔注射剂量2 ml为最佳免疫程序。 关键词：兔病毒性出血症（RHD）；免疫剂量；抗体效价 兔病毒性出血症（rabbit hemorrhagic disease，RHD）又称兔瘟，是由兔出血症病毒（RHD virus，RHDV）引起的一种急性和高度接触性家兔传染病,常出现爆发性流行，发病率和死亡率极高，给养兔业造成极大的经济损失[1~3]。早期观察发现，青年、成年兔对RHD易感，2月龄以下幼兔一般不感染[1,4,5]。但是，近年来幼兔感染RHD逐渐增多[6,7]。RHD目前尚无有效的治疗药物，主要通过疫苗免疫进行防制。现行规程规定的常规免疫剂量为1ml，然而由于幼兔免疫系统发育不成熟和母源抗体的影响，仅按常规免疫程序免疫难以取得理想的效果[8]。因此，探索合理的免疫程序具有重要的临床意义。我们已经测定了RHDV抗体效价与保护率之间的关系，证明半数保护效价为2 log 2，有效保护效价为3 log 2，同时观察了免疫日龄对抗体效价的影响。本试验拟进一步观察免疫剂量对抗体效价的影响，以期为制定合理的免疫程序提供理论依据。 1 材料与方法 1.1  材料 新西兰兔、兔病毒性出血症组织灭活疫苗（批号20041201）、兔出血症病毒（RHDV，皖阜株）、RHDV阳性血清和RHDV阴性血清，均由江苏省农业科学院兽医研究所提供；人“O”型红细胞，由南京军区总医院提供。 TGL-16G台式高速离心机，由上海医用分析仪器厂生产；WMK-2型37℃恒温箱为南京试验仪器厂产品；100μl移液枪为eppendorf公司产品；50孔U型血凝板为北京市斯科易得试验器材有限公司产品。 1.2  动物分组与处理 分别取35、40、45日龄幼兔各30只，每个日龄兔随机均分为5组，对照组（0ml）和4个剂量（1ml、2ml、3ml、4ml）组。0ml组不免疫，注射生理盐水1ml/只；1ml、2ml、3ml、4ml组分别颈部皮下注射4种剂量的兔瘟疫苗，分别于免疫前和免疫后7周内每周耳静脉或心脏采血，分离上清，56℃水浴灭活30min，测定抗体效价。 1.3  抗体效价的测定 用微量血凝抑制试验（HI）方法 [9]。取50 μl待检血清用等量生理盐水进行倍比稀释6个梯度，分别在每孔加入等量的4单位血凝病毒，37℃感作30min，加入等量的1％人O型红细胞，4℃感作30min,观察结果。同时设阳性血清和阴性血清作为对照。结果以平均数± 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 差表示，用SPSS软件进行统计分析。 2  结果 2.1  35日龄兔不同剂量组抗体效价的变化 表1显示，免疫前各剂量组抗体效价无显著差异，处于半数保护效价2 log2。免疫后各剂量组的抗体效价，1ml组第1周上升至峰值3.25，有效保护效价（3 log2）维持2周；剂量2ml、3ml、4ml组一直高于剂量1ml组，免疫后2周开始与1ml组差异均达到显著水平（P<0.05），免疫后4周达到峰值，分别为5.67、5.50、5.83 log2，免疫后7周时仍高于有效保护效价。对照组抗体效价在免疫后七周内一直低于有效保护抗体效价，且持续下降，免疫后6周下降到0（表1）。 表1  35日龄兔不同剂量组的抗体效价  (log2) Table 1  The antibody titer of every dose group in 35 day-old rabbits 剂量Dose（ml） 免疫前 Before injection 免疫后After injection（周weeks） 1 2 3 4 5 6 7 1 2.50±0.41a 3.25±0.50a 3.00±0.82b 2.38±0.48b 2.00±0.00c 1.00±0.00c 0.75±0.50c 0.00±0.00c 2 2.00±1.00 a 4.00±0.00a 4.66±0.58a 5.50±0.71a 5.67±0.58a 5.00±0.71b 4.50±0.73ab 4.50±0.53a 3 2.00±1.00 a 4.00±1.00a 4.33±0.58a 5.33±0.58a 5.50±0.00b 5.25±0.35ab 4.25±0.23b 4.00±0.34b 4 2.33±0.58 a 4.00±1.00a 4.33±0.58a 5.33±0.58a 5.83±0.29a 5.50±0.00a 4.75±0.56a 4.33±0.26ab 0（CK） 2.50±0.41 a 1.25±0.95b 1.00±0.82c 0.75±0.96c 0.25±0.50d 0.25±0.50d 0.00±0.00d 0.00±0.00c                   同列数据标有不同字母者差异显著（P<0.05）。 Data within a column with different superscripts differentiated significantly (P<0.05). 2.2  40日龄兔不同剂量组抗体效价的变化 免疫前各剂量组抗体效价无显著差异，均低于半数保护效价。免疫后，4个剂量组的抗体效价均在第1周时达到或高于有效保护效价，第2周达到峰值，尔后开始下降；剂量1ml组有效保护效价维持至免疫后5周，免疫后4周后显著低于其余3个剂量组（P<0.05）；免疫后7周时剂量2ml、3ml、4ml组的抗体效价仍高于有效保护效价。对照组的抗体效价在免疫后的7周内一直低于半数保护抗体效价，免疫后5周开始下降到0（表2）。 表2  40日龄兔不同剂量组的抗体效价  (log2) Table 2  The antibody titer of every dose group in 40 day-old rabbits 剂量Dose（ml） 免疫前 Before injection 免疫后After injection（周weeks） 1 2 3 4 5 6 7 1 1.25±0.96a 3.00±0.82a 5.75±1.71a 5.00±1.83a 3.75±0.96b 3.00±0.82b 2.13±0.50b 1.83±0.58b 2 1.33±0.58a 4.33±1.15a 5.83±0.29a 5.17±0.29a 5.33±0.58a 5.33±0.58a 5.00±0.00a 4.50±0.00a 3 1.27±0.58a 4.00±1.00a 5.50±0.50a 5.17±0.29a 5.00±1.00a 5.00±0.58a 5.00±0.29a 4.50±0.00a 4 1.33±0.58a 4.33±0.58a 5.83±0.29a 5.17±0.35a 5.33±0.58a 5.00±0.00a 5.00±0.35a 4.50±0.29a 0（CK） 1.25±0.58a 1.00±0.82b 0.75±0.96b 0.25±0.50b 0.20±0.50c 0.00±0.00c 0.00±0.00c 0.00±0.00c                   同列数据标有不同字母者差异显著（P<0.05）。 Data within a column with different superscripts differentiated significantly (P<0.05). 2.3  45日龄兔不同剂量组抗体效价的变化 表3显示，免疫前各剂量组的抗体效价无显著差异，均低于半数保护效价。免疫后各组的抗体效价，4个剂量组抗体效价均在第1周时达到或高于有效保护效价，第2～4周达到峰值，尔后开始下降；剂量1ml组有效保护效价维持至免疫后5周，免疫后5周开始显著低于其余3个剂量组（P<0.05）；剂量2ml、3ml、4ml组免疫后7周的抗体效价仍高于有效保护效价。对照组的抗体效价在免疫后7周内一直低于半数保护抗体效价，免疫后4周开始下降到0（表3）。 表3  45日龄兔不同剂量组的抗体效价  (log2) Table 3  The antibody titer of every dose group in 45 day-old rabbits 剂量Dose（ml） 免疫前 Before injection 免疫后After injection（周weeks） 1 2 3 4 5 6 7 1 2.00±0.82a 3.25±1.26a 5.25±0.96a 5.50±1.29a 3.75±0.96b 3.25±1.26b 2.38±1.79b 2.00±1.41b 2 1.00±0.00ab 4.00±1.00a 5.17±0.58a 5.13±0.29b 5.50±0.76ab 5.10±0.45a 5.10±0.00a 4.75±0.59a 3 1.00±1.00ab 4.47±0.50a 5.25±1.06a 5.50±0.00a 5.75±0.35a 5.25±1.06a 5.00±0.50a 4.50±0.56a 4 0.85±0.58b 4.33±0.58a 5.50±0.00a 5.50±0.00a 5.25±0.35ab 5.25±0.35a 5.00±0.50a 4.50±0.36a 0（CK） 1.00±0.57ab 0.80±0.96b 0.35±0.50b 0.25±0.50c 0.00±0.00c 0.00±0.00c 0.00±0.00c 0.00±0.00c                   3  讨论 有关幼兔病毒性出血症疫苗免疫剂量的研究，目前尚未见报道。多数学者把研究重点放在免疫日龄上，但是如果按常规剂量注射疫苗时，能够很好产生抗体的日龄可能早已是易感日龄，这就使得幼兔很容易感染病毒性出血症[6，7，10]。本研究选择3个日龄兔、4个剂量组进行试验，结果表明，抗体的产生与免疫剂量和日龄之间确实存在一定的关系。在3种日龄兔中，剂量1ml在各时间点的抗体效价、抗体峰值和有效抗体维持时间均显著小于剂量2ml、3ml、4ml，因此不能作为最佳剂量；而后3个剂量组之间多数没有显著差异，鉴于剂量2ml在3个剂量中最小，无论从降低免疫成本还是从方便临床操作考虑，剂量2可作为首选剂量。