实验3 种子生活力的测定

实验3  种子生活力的测定 目的要求 用化学试剂测定种子生活力，可以在短时间内评定种子质量。特别是对于有些树种种子的休眠期长，难于进行发芽测定，采用此法测定种子的生活力就具有明显的优越性。通过实验要求了解测定种子生活力的基本原理，并学会其操作程序。 一、 氯化三苯基四氮唑（TTC）法 【原理】 凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的种胚则无此反应。当TTC溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH或NADPH）还原时，可产生红色的三苯基甲  （TTF），胚便染成红色。当种胚生活力下降时，呼吸作用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，胚的颜色变化不明显，故可由染色的程度推知种子的生活力强弱。TTC还原反应如下： TTC（无色）                          TTF（红色） 【仪器与用具】 培养皿2套；镊子１把；单面刀片１片；垫板（切种子用）１块；烧杯１个；棕色试剂瓶；解剖针１把；搪瓷盘１个；pH试纸。 【试剂】 TTC溶液的配制：取1g TTC溶于１L蒸馏水或冷开水中，配制成0.1％的TTC溶液。药液pＨ应在6.5～7.5，以pH试纸试之（如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后再加水）。 【方法】 1.将玉米、小麦等作物的新种子、陈种子或死种子，用温水（30℃）浸泡2～6h，使种子充分吸胀。 2.随机取种子2份，每份50粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。 3.把切好的种子分别放在培养皿中，加TTC溶液，以浸没种子为度。 4.放入30～35℃的恒温箱内保温30min.也可在20℃左右的室温下放置40～60min. 5.保温后，倾出药液，用自来水冲洗2～3次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力，把判断结果记入表32-1内。 表32-1  染色法测定种子生活力记载表 方法 种子名称 供试粒数 有生活力种子粒数 无生活力 种子粒数 有生活力种子 占供式粒数的%             【注意事项】 1.TTC溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。 2.染色温度一般以25～35℃为宜。 3.判断有生活力的种子应具备：胚发育良好、完整、整个胚染成鲜红色；子叶有小部分坏死，其部位不是胚中轴和子叶连接处；胚根尖虽有小部分坏死，但其它部位完好。 4.判断无生活力的种子应具备：胚全部或大部分不染色；胚根不染色部分不限于根尖；子叶不染色或丧失机能的组织超过1/2；胚染成很淡的紫红色或淡灰红色；子叶与胚中轴的连接处或在胚根上有坏死的部分；胚根受伤以及发育不良的未成熟的种子。 5.不同作物种子生活力的测定，所需试剂浓度、浸泡时间、染色时间不同。现将主要作物种子生活力测定所需条件列入表。 TTC法测定主要作物种子生活力要点 作 物 种子准备 TTC浓度(%) 在35℃下 染色时间(h) 水 稻 去壳纵切 0.1 2～3 高粱、玉米及麦类作物 纵切 0.1 0.5～1 棉花、荞麦、蓖麻 剥去种皮 1.0 2～3 花生 甜菜 大麻 向日葵 剥去种皮 0.1 3～4 大豆 菜豆 亚麻 二叶草 无须准备 1.0 3～4         二、红墨水（酸性大红Ｇ）染色法 【原理】 有生活力的种子其胚细胞的原生质具有半透性，有选择吸收外界物质能力，某些染料如红墨水中的酸性大红Ｇ不能进入细胞内，胚部不染色。而丧失活力的种子其胚部细胞原生质膜丧失了选择吸收的能力，染料进入细胞内使胚部染色，所以可根据种子胚部是否染色来判断种子的生活力。 【仪器与用具】 与TTC法相同。 【试剂】 红墨水溶液的配制：取市售红墨水稀释20倍（1份红墨水加19份自来水）作为染色剂。 【方法】 1.先将待测种子用水浸泡3～4h，待充分吸胀后取出一部分种子，在沸水中煮沸3～5min，作为死种子。 2.取浸好的新种子、陈种子和死种子各50粒，如为小麦和玉米，则用单面刀片沿胚部中线纵切成两半，其中一半用于测定。 3.将备好的种子分别放在培养皿内，加入红墨水溶液，以浸没种子为度。 4.染色10～20min后倾出溶液，用自来水反复冲洗种子， 直到所染颜色不再洗出为止。 5.对比观察冲洗后的新种子、陈种子和死种子胚部着色情况。凡胚部不着色或略带浅红色者，即具有生活力的种子，若胚部染成与胚乳相同的红色，则为死种子，把测定结果记入表（同TTC法）。 【思考题】 TTC法和红墨水法测定种子生活力有何不同? 实验四 种子水分测定标准法和电子仪器速测法 ㈠实验目的 1.了解电烘箱的结构、原理及使用方法。 2.掌握烘干法测定水分的方法及操作技术。 ㈡主要内容 1.低恒温烘干法(103土2℃烘箱法) 2.高恒温烘干法(130～133℃烘箱法) 3.水分快速测试仪法(电阻式、电容式) （三）．材料  小麦种子 （四）、用具 烘箱、天平、粉碎器、称量盒、干燥器、水分仪 （五）、方法、步骤 高恒温烘干箱 称取净种子样品30.0g→磨碎混匀→称烘盒重（M1）准确称取磨碎样品5.000g×2→分别置于烘盒内妨如放入烘箱内（130∽133℃，1h）→烘干后取出置干燥器中，冷却10分钟后称重（M3）→相对允许误差（≤0.2%）→计算平均值，精确度0.1% 种子水分（%）=M2—M3/ M2—M1×100 M1——样品盒和盖的重量（g） M2——样品盒和盖及样品的烘前重量（g） M3——样品盒和盖及样品的烘后重量（g） 思考问题： 高恒温烘干箱原理 种子发芽试验 一， 实验目的与要求 通过本实验掌握水稻，小麦，玉米，油菜，大豆等种子的发芽条件，学习标准发芽试验的方法。 二， 实验材料与用具 1. 材料  水稻，小麦，大卖，玉米，油菜，大豆等作物种子。 2. 用具  发芽箱，出糙机，透明塑料发芽盒，玻璃培养皿，发芽纸或滤纸，砂，镊子，标签，数种仪（板）等。 三， 试验方法与步骤 （一）标准发芽试验 1发压床的选用  一般大粒种子（玉米，大豆等）用砂床（0.05~0.8mm的细砂），中粒种子（水稻，小麦，大卖）用砂床或纸床，小粒种子（油菜，芝麻等）用纸床。 2.发芽床的准备  取塑料发芽盒或发芽皿4套。将砂（石英砂或河砂）用0.8mm筛孔的钢丝网筛进行筛理，经洗涤后与玻璃培养皿等一起进行高温消毒（160℃，2h或120℃，4h）。然后在发芽皿中放入4层发芽纸（或滤纸）并加水湿透，或放入消毒砂（每100g加水约20ml）。 3.试样的数取  取经净度检验的净种子400粒（水稻种子需要预先在30℃温水中浸泡种24h），没重复100粒，播于纸床或砂床中。播种时种子分布要均匀，彼此之间保留一定的距离，用砂床时应将种子轻轻压入砂中，种子与砂相平，然后加盖。 4.贴标签  将发芽盒或发芽皿贴上标签，注明品种名称，重复号，处理温度，置床日期，测定人姓名等，并登记在发芽试验记载表上。 5.培养  将发芽盒或发芽皿放入规定的温度和光照的发芽箱内发芽。可根据农作物种子的发芽技术规定选择恒温或变温处理，以后每日检查温度和水分。水分不足时补充，并保持发芽箱内温度和水分要求一致。 6.管理  发芽床上如有种子表面生霉，可取出用清水洗涤或再放回发芽床上；如已经霉烂，则应从发芽床上取出并登记。如霉烂种子达5%以上，应更换发芽床或进行种子消毒或重新试验。 7.幼苗鉴定  每株幼苗都必须按标准进行鉴定，鉴定要在幼苗主要构造发育到一定时期进行。每个种的试验持续时间详见表4-1。到达初次计数天数，计数正常幼苗，并将发育良好的正常幼苗从发芽床中拣出；对可疑或损伤，畸形或不均衡的幼苗，通常到末次计数。严重腐烂的幼苗应从发芽床中除去，并随时增加计数。末次计数时，按正常幼苗，不正常幼苗，新鲜不发发芽的种子或硬实和死种子分别计数和记载。 如果样品在规定时间内有几粒种子开始发芽，则试验时间可延长7d，或延长规定时间的一半，则该试验可提前结束。 8.结果与计算  根据试验记录分别计算正常幼苗，不正常幼苗，新鲜不发芽种子或硬实，死种子百分率。如果一个试验的四次重复正常幼苗百分率在最大容许差距范围内，则其平均值表示试验样品的发芽率。其余的成分的百分率按四次重复平均数计算。