土壤酸性磷酸酶的测定方法
1. 称取1g新鲜土样(<2mm)(相当于0.3g干土)于10mL离心管中;
2. 加入4mL 40mmol/L的pH6.5的醋酸-醋酸钠缓冲(pH6.5)，然后加入2 mL，15mmol/L的对硝基苯磷酸二钠(PNP)，摇匀后在37?水浴中保温1h;
3. 立即加入1 mL 1mol/L的NaOH终止反应，过滤后在400nm处比色。
4. 同时做空白对照:1g新鲜土样+4mL缓冲液+1 mLNaOH 摇匀，然后加入2 mL PNP，过滤。 对硝基苯酚标线的配制:
将对硝基苯酚标液稀释100倍，再取稀释后的标液0、1、2、3、4和5mL于10mL离心管中(分别含0mg、0.01 mg、0.02 mg、0.03 mg、0.04 mg和0.05 mg对硝基苯酚)，分别用水调至5mL，再加入2 mL 1mol/L的NaOH，轻摇几秒钟后过滤，400nm处比色。 结果计算:w,(m/m)*1000 12
-1-1W----单位时间内对硝基苯酚的产生量mg*kgh
M---试样中对硝基苯酚的质量mg 1
m----样品质量g 2
试剂配制:
1. 40 mmol/L的pH6.5的醋酸-醋酸钠缓冲液:
40 mmol/L醋酸钠:称取3.282g无水醋酸钠溶于1000mL水中;
40 mmol/L醋酸:吸取1.2mL冰醋酸与水混合定容至500mL;
40 mmol/L的pH6.5的醋酸-醋酸钠缓冲液:800mL40 mmol/L醋酸钠+200mL 40 mmol/L醋酸，用NaOH调节pH至6.5。
2. 15mmol/L的对硝基苯磷酸二钠(PNP):称取0.5552g对硝基苯磷酸二钠溶于1L水中，低温储存备用。
3. 1mol/L的NaOH:20 gNaOH溶于500mL水中。
4. 对硝基苯酚(139.1)标液:1g对硝基苯酚溶于1L水中，低温保存。
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