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放射免疫技术- OA@35|老板签批系统 第十九章 放射免疫技术 Chapter 19 Radioimmunoassay 第一部分 教学内容和要求 一、目的要求 ?掌握:放射免疫分析和免疫放射分析的原理、方法学评价及应用;熟悉:免疫复合物分离技术;了解: 放射性标记物制备和鉴定、免疫复合物分离技术。 二、教学内容 1。概述:放射性核素标记物的制备，抗体选用(亲和常数、特异性、效价)，免疫复合物分离技术，核射 线探测仪器结构及其探测原理。 2。放射免疫分析:原理，技术要点，方法学评价。 3。免疫放射分析:原理，技术要点，方法学评价。 4(放射免疫技术的应用:激素的测定，药理学方面，其他。 第二部分 测 试题 中考模拟试题doc幼小衔接 数学试题 下载云南高中历年会考数学试题下载N4真题下载党史题库下载 一、选择题 (一)单项选择题(A型题) 1.放射免疫分析的创建者和创建时间 A.Coons于1941年创建 B.Berson 和 Yallow于1959年创建 C.Nakene和Pierce于1966年创建 D.Miles 和 Hales于1968年创建 E.Engrall和Perlmann于1971年创建 2.放射性核素的选择原则不包括 A.高比活度 B.适宜半衰期 C.对抗原或抗体活性没有影响 D.容易标记 E.标记物易于保存 3.最理想且临床最常用的放射性核素为 12551603131A.I B.Cr C.Co D.H E.I 4. 释放β射线核素 12551603131A.I B.Cr C.Co D.H E.I 31255.H标记放射免疫技术比I标记放射免疫技术优越的是 A.标记方法简便 B.放射性测量方法简便，效率高 C.易获得高比放射性标记物 D.标记物保存期较长 E.放射性废弃物处理较易 6.下列关于抗体质量指标K值的描述，正确的是 A.抗体K值越小，放射免疫分析的灵敏度、精确度和准确度越佳 B.抗体K值越大，放射免疫分析的灵敏度、精确度越佳，但准确度越差 C.抗体K值越大，放射免疫分析的准确度越佳，但灵敏度和精确度越差 69D.K值达到10―10mol/L，才适用于放射免疫技术。 E.放射性标记物、待测抗原和 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 品对同一抗体应具有完全相同的K值，否则测定结果将失真 7.直接标记法制备放射性标记结合物时，常用的氧化剂为 A.氯胺T B.乳过氧化物酶 C.N-溴代琥珀酰亚胺 D.HO E.SHPP 22 8.关于直接法制备放射性标记结合物，下列说法正确的是 125A.通过小分子载体使I与蛋白结合 B.能标记所有蛋白质或多肽 125C.I标记对蛋白质的活性无影响 D.常用的氧化剂是氯胺T 125E.I标记物的比放射性较低 9.有关放射性标记物的放射化学纯度的描述，正确的是 A.是指结合于抗原上的放射强度占总放射强度的百分率 B.是指单位质量标记物的放射强度 C.是指标记抗原结合于抗体的放射强度占总放射强度的百分率 D.放射化学纯度测定方法是加10倍量抗体和标记抗原反应，测算出B/B+F的百分率 E.标记后放射性标记物的分离纯化程度不影响其放射化学纯度 10.有关放射免疫分析原理的描述，正确是 A.Ag和Ag*与相应Ab的结合能力相同 B.Ag*为限量，待测Ag竞争性抑制Ag*与Ab的结合 C.Ag*Ab复合物量与待测Ag量成正比 D.反应平衡时，游离放射性强度(F)与待测Ag量成正比 E.标记抗体为过量 11. 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 示抗体的特异性指标是 A.免疫活性 B.亲和常数(常用K值来表示) C.效价 D.交叉反应率 E.比放射性 12.反映抗体与相应抗原结合的能力的指标是 A.免疫活性 B.亲和常数(常用K值来表示) C.效价 D.交叉反应率 E.放射化学纯度 13.反映标记抗原结合于抗体的放射强度占总放射强度的百分率的指标是 A.放射化学纯度 B.免疫活性 C.比放射性 D.交叉反应率 E.亲和常数 14.表示单位质量标记物的放射强度的指标是 A.放射化学纯度 B.免疫活性 C.比放射性 D.交叉反应率 E.亲和常数 15.融合了特异性和非特异性B/F分离技术特点的方法是 A.活性炭吸附法 B.双抗体法 C.固相分离法 D.PR试剂法 E.化学沉淀法 16.关于放射免疫分析中分离方法的选择要求，下列描述错误的是 A.分离应彻底、迅速 B.操作应简便，重复性好 C.分离过程应不影响免疫复合物的形成 D.分离效果应受反应介质影响 E.试剂来源容易，价格低廉 17.在放射免疫分析中，制作标准曲线形状不受放射性标记物的衰变影响的反应参数是 A.B/F B.B/T C.F/B D.B/BE.B 0 18.为使放射免疫分析的标准曲线直线化，实验数据进行转化应采用的方法是 A.半对数法 B.双对数法 C.二元三次方程法 D.联结法 E.log-logit方式进行数据转化法 19.在放射免疫分析中，使标准曲线呈正比例双曲线，横坐标是测定物标准品浓度，纵坐标是 A.B/F B.B/T C.F/B D.B/B E.B 0 20.免疫放射分析方法创建者为 A.Coons于1941年创建 B.Berson 和 Yallow于1959年创建 C.Nakene和Pierce于1966年创建 D.Miles 和 Hales于1968年创建 E.Engrall和Perlmann于1971年创建 21.与放射免疫分析相比，免疫放射分析最显著特点是 A.使用单克隆抗体 B.采用固相分离法 C.反应属于非竞争性结合 D.可以测定大分子和小分子抗原 E.灵敏度较高 22.关于免疫放射分析的描述，正确的是 A.反应体系中，相对于抗原，标记抗体是过量的 B.单位点和双位点IRMA均采用固相抗体作分离 C.抗原与抗体的结合属于竞争性结合 D.反应平衡时，游离标记物量与待测抗原量成正比 *E.反应平衡时，待测抗原量与结合的Ag-Ab成反比 23.为提高放射免疫分析的检测灵敏度，方法学 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 时应注意避免 A.制备高比放射性的标记物 B.增加抗体的用量 C.选用顺序饱和法实验 流程 快递问题件怎么处理流程河南自建厂房流程下载关于规范招聘需求审批流程制作流程表下载邮件下载流程设计 D.筛选高亲和力的抗体 E.选用特异性B/F分离方法 24.与RIA比较，IRMA最突出的特点是 A.IRMA的反应速度更慢 B.非竞争结合，使IRMA灵敏度更高 C.抗体用量较少，但对K值要求更高 D.反应参数与待测抗原含量成反比 E.单位点IRMA采用固相抗体分离法 25.放射性活度是指 A.单位时间内的核衰变数，即每秒衰变次数，用贝可勒尔(Becquerel，Bq)表示 B.单位质量样品中所含放射性活度，以Bq/g或Bq/mmol表示 C.单位体积溶液中所含放射性活度，以Bq/m1表示 D.结合于抗原上的放射强度占总放射强度的百分率;即碘化蛋白质的放射强度占总放射强度的百分率 E.单位质量标记物的放射强度，单位为Bq/,g (二)多项选择题(X型题) 1.释放γ射线的核素包括 1255160143A.I B. Cr C.Co D. C E. H 2.放射免疫技术中所使用的抗体要求 A.高亲和常数 B.交叉反应率低 C.抗体滴度高 D.IgM类 E.单克隆抗体 3.用于放射性标记的抗原要求 A.抗原纯度高 B.足够或完整的免疫活性 C.完全抗原 D.抗原稳定性 E.基因重组多肽 4.用于放射性标记的抗原或抗体的质量主要影响方法学的 A.灵敏度 B.特异性 C.准确度 D.线性范围 E.精确度 12535.I标记放射免疫技术在下列哪方面优于H标记放射免疫技术 A.标记方法简便，易获得高比放射性标记物 B.放射性测量方法简便，效率高 C.对标记化合物影响较少，不影响抗原免疫学活性 D.标记物保存期较长 E.放射性废弃物处理较易 1256.关于间接标记法标记I的描述，正确的是 A.避免氧化剂和蛋白质直接接触，对蛋白质活性影响较小 125B.I 通过SHPP连接到蛋白质分子表面赖氨酸残基的氨基或蛋白质的活性中心，蛋白质生物活性影响较少 C.在蛋白质分子内载体分子引起位阻效应，影响其生物活性，对分子量小的蛋白质影响更明显 D.由于标记过程分两步进行，故碘标记蛋白质的比放射性和碘的利用率较直接标记法低 E.常用的氧化剂是氯胺T 7.放射性标记物的质量指标有 A.放射化学纯度 B.比放射性 C.免疫活性 D.特异性 E.放射性活度 8. 影响放射性标记物化学纯度的因素有 A.被标记物不纯 B.标记抗原的比放射性过高 C.标记后分离纯化不完全 D.放射性核素的放射性活度过低 E.标记化合物贮存过程中碘脱落 9.理想的分离技术应具备 A.简便易行，适于大批量样品分析 B.分离完全，快速，非特异结合低 C.试剂来源容易，价格低廉，稳定性好，可长期保存 D.不受外界因素和样品中其他组分的干扰，对标准品和待测抗原分离效果相同 E.适合自动化分析的要求 10.放射免疫分析中，B/F的分离方法有 A.吸附法 B.双抗体法 C.固相分离法 D.PR试剂法 E.化学沉淀法 11.属于特异性B/F分离技术的是 A.吸附法 B.双抗体法 C.固相分离法 D.PR试剂法 E.化学沉淀法 12.IRMA的优点是 A.敏感度高 B.特异性强 C.准确性好 D.结果稳定 E.用血量少 13.RIA标准曲线制作时，纵坐标的反应参数有 A.B/F B. B/T C.F/B D. B/B E.B 0 14.关于RIA标准曲线，为使标准曲线呈反比例双曲线，横坐标是测定物标准品浓度，纵坐标是 A.B/F B. B/T C.F/B D. B/B E.B 0 15. 免疫放射分析与放射免疫分析的不同是 A.IRMA的反应速度更快 B.采用固相分离法 C.反应属于非竞争性结合，使IRMA灵敏度更高 D.可以测定大分子和小分子抗原 E.抗体用量大，但对K值要求不高 二、填空题 1.放射免疫技术类型主要包括__________和__________。 __________和__________。 2.免疫放射性核素的放射量单位有__________、 3.放射性核素选择原则是__________、__________、__________和__________。 4.放射性标记物制备时，常用的标记方法有__________和__________。 5.放射性标记物纯化常用的方法有__________、__________、__________、__________和__________。 6.放射免疫技术试剂盒主要组成试剂有__________、__________和__________。 7.RIA的基本操作可分为__________、__________、__________和__________四个步骤。 8.核射线探测仪器由__________和__________两部分组成。 9.根据加样顺序不同，RIA分为 和 两个类型。 10.IRMA主要有__________和__________两种类型。 11.RIA的优点有__________、__________和__________，缺点有__________和__________。 三、名词解释 1.放射免疫分析(radioimmunoassay，RIA ) 2.放射度量分析(immunoradiometric assay，IRMA) 3.放射性活度(radioactivity live degree) 4.放射性比活度(radioactivity specific activity degree) 5.放射性浓度(radioactivity concentration) 6.放射化学纯度 (radiochemistry purity) 7.比放射性(ratio radioactivity) 8.免疫活性(immunity activity) 四、问答题 1.放射性标记物制备的常用方法有哪些,各有何优缺点, 2.评价RIA中常用的B/F分离技术。 3.比较RIA和IRMA的特点并进行方法学评价。 第三部分 参考答案与题解 一、选择题 (一)单项选择题(A型题) 1.B 2.E 3.A 4.D 5.D 6.E 7.A 8.D 9.A 10.D 11.D 12.B 13.B 14.C 15.D 16.D 17.D 18.E 19.C 20.D 21.C 22.A 23.B 24.B 25.A (二)多项选择题(X型题) 1.ABC 2.ABC 3.ABD 4.AB 5.ABCE 6.ABCD 7.ABC 8.ACE 9.ABCDE 10.ABCDE 11.BCD 12.ABD 13.ABCDE 14.ABDE 15.ABCDE 二、填空题 1.RIA IRMA 2.放射性活度 放射性比活度 放射性浓度 3.高比活度 适宜半衰期 对抗原或抗体没损害 容易标记 4.直接法 间接法 5.葡聚糖凝胶过滤法 薄层层析法 纸层析法 电泳法 高效液相层析法 6.放射性标记物 抗体 B/F分离剂 7.抗原抗体分离 B/F分离 放射性强度测定 数据处理 8.射线探测器 后续电子学单元 9.平衡法 顺序饱和法 10.单位点法 双位点法 11.敏感度高 特异性强 准确性好 污染 试剂有效期短 三、名词解释 1.RIA:即放射免疫分析，是以放射性核素标记抗原和待测抗原竞争结合一定量的特异性抗体，待测抗原量与抗原抗体复合物放射性强度呈反比，用来测定待测抗原含量的一种竞争免疫学方法。 2.IRMA:即免疫放射分析，是以放射性核素标记的抗体与待测抗原发生非竞争性结合反应，待测抗原量与抗原抗体复合物放射性强度呈正比，从而测定待测抗原含量的一种非竞争免疫学方法。 3.放射性活度:指单位时间内的核衰变数，即每秒衰变次数，用贝勒尔表示。 4.放射性比活度:指单位质量样品所含放射性活度，以Bq/g或Bq/mmol表示。 5.放射性浓度:指单位体积溶液中所含放射性活度，以Bq/ml表示。 6.放射化学纯度:指结合于抗原上的放射强度占总放射强度的百分率，即碘化蛋白质的放射强度占总放射强度的百分率。 7.比放射性又称放射性比度:指单位质量标记物的放射强度，单位为Bq/μg。标记抗原的比放射性越高，所需标记抗原量越少，实验系统的敏感度越高。 8.免疫活性:指标记抗原结合于抗体的放射强度占总放射强度的百分率，用于检查标记后免疫活性损失情况。 四、问答题 1251.有直接标记法和间接标记法。(1)直接标记法:是将I直接结合在蛋白质侧链的酪氨酸残基苯环上，形成单碘酪氨酸或双碘酪氨酸。常用的氧化剂是氯胺T。氯胺T是一种温和的氧化剂，在水溶液中产125-生次氯酸，使I氧化。优点:操作简便、迅速、高效且重复性好。氧化剂还有应用乳过氧化物酶、N-溴代琥珀酰亚胺等。缺点:只能标记含酪氨酸的化合物，有时可能会损害蛋白质的活性。 (2)间接标记法:亦称联结标记法，是先将放射性碘连接到一个小分子载体上，再将这个小分子载体与蛋白质结合。具有代表性的方法是Bolton-Hunter法，使用的载体分子是N-琥珀酰亚胺3-(4-羟基苯)-丙酸(SHPP)。标记方法分两步，先用氯胺T法使SHPP碘化，再将碘化SHPP分子偶联到蛋白质分子上。优点:?避免氧化剂和蛋白质直接接触，对蛋白质活性影响较小; ?SHPP主要连接到蛋白质分子表面赖氨酸残基的氨基或蛋白质的活性中心，不影响蛋白质活性。缺点: ?在蛋白质分子内载体分子引起位阻效应，影响其生物活性，对分子量小的蛋白质影响更明显; ?标记过程分两步，故碘标记蛋白质的比放射性和碘利用率较直接标记法低。 ※※2.(1)吸附法:是用吸附剂吸附小分子游离的Ag(F)，离心沉淀，大分子的结合物Ag-Ab(B)留在上清中，以达到分离目的。如用葡聚糖包被活性炭颗粒，效果更好。优点:方法简便、分离迅速、分离完全、价廉，尤其适用于小分子抗原和半抗原的分离;缺点:分离效果和重复性常受吸附剂、相对表面积、被吸附抗原分子大小、电荷分布及其作用时间、温度、离子强度、pH值等因素影响。 (2)化学沉淀法:RIA反应条件接近抗体的等电点，加入聚乙二醇等蛋白质沉淀剂可破坏蛋白分子表面的水化层而使蛋白沉淀，从而分离B与F。优点:方法快速、简便、沉淀完全;缺点:非特异沉淀游离标记物较多，受温度和pH影响较大。 ※(3)双抗体法:利用抗抗体和Ag-Ab复合物中的抗体结合，形成更大免疫复合物，离心沉淀即可分离B与F。优点:特异性强，非特异结合少，操作方便，可重复性好;缺点:反应时间长，沉淀物较少，抗抗体用量大。 (4)PR试剂:将双抗体法和PEG结合起来的沉淀法，可弥补各自的不足，分离效果好，适用范围广。 (5)固相分离法:将抗体或抗原结合在固相载体上，利用固相抗体或抗原分离B和F，具有简便、快速、适合于自动化分析等特点，已逐步取代传统的液相分离方法。 3.(1)IRMA与RIA的区别: IRMA RIA 标记物质 抗体 抗原 标记物用量 过量 限量 反应方式 直接结合 竞争性结合 B、F分离方法 固相抗体法等 第二抗体法等 (2)方法学评价: ?RIA:优点是敏感度高，能测到μg/L，甚至可测到ng/L或pg/水平;特异性强，与结构类似物质间的交叉反应少;准确性好，重复性好，批间批内误差低;用血量少。缺点是放射性核素对环境和实验室污染;放射性核素易衰变以及放射性标记物不稳定，导致试剂有效期短。 ?IRMA:优点是敏感性高;特异性强;标记物稳定，标记容易;结果稳定。缺点是抗体用量偏多，且抗体的特异性纯化较难，如用单克隆抗体可克服这些缺点。 (陶志华 张文辉)