GPC原理

nullnull 第一节 色谱分析方法导论20 世纪中期，大量采用一些经典的分离方法：沉淀、蒸馏和萃取现代分析中，大量采用色谱和电泳分离方法。迄今为止，色谱方法是最为有效的分离手段！其应用涉及每个科学领域。 50年代，色谱发展最快（一些新型色谱技术的发展；复杂组分分析发展的要求。 1937-1972年，15年中有12个Nobel奖是有关色谱研究的！null 第一节 色谱分析方法导论null 第一节 色谱分析方法导论色谱分离基本原理： 使用外力使含有样品的流动相（气体、液体或超临界流体）通过一固定于柱或平板上、与流动相互不相溶的固定相 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 面。样品中各组份在两相中进行不同程度的作用。与固定相作用强的组份随流动相流出的速度慢，反之，与固定相作用弱的组份随流动相流出的速度快。由于流出的速度的差异，使得混合组份最终形成各个单组份的“带(band)”或“区(zone)”，对依次流出的各个单组份物质可分别进行定性、定量分析。 null 第一节 色谱分析方法导论色谱分类方法： 1. 按固定相外形分： 柱色谱（填充柱、空心柱）、平板色谱（薄层色谱和纸色谱。 2. 按组份在固定相上的分离机理分： 吸附色谱：不同组份在固定相的吸附作用不同； 分配色谱：不同组份在固定相上的溶解能力不同； 离子交换色谱：不同组份在固定相（离子交换剂）上的亲和力不同； 凝胶色谱（尺寸排阻色谱）不同尺寸分子在固定相上的渗透作用。 null 3. 按两相状态分第一节 色谱分析方法导论null 第一节 色谱分析方法导论色谱流出曲线（色谱图）混合组分的分离过程及检测器对各组份在不同阶段的响应null第一节 色谱分析方法导论色谱术语： 1）基线：在实验条件下，色谱柱后仅有纯流动相进入检测器时的流出曲线称为基线，S/N大的、稳定的基线为水平直线。 2）峰高：色谱峰顶点与基线的距离。 3）保留值(Retention value, R) a. 死时间(Dead time, t0) ：不与固定相作用的物质从进样到出现峰极大值时的时间，它与色谱柱的空隙体积成正比。由于该物质不与固定相作用，因此，其流速与流动相的流速相近。null 第一节 色谱分析方法导论 b. 保留时间tr：试样从进样到出现峰极大值时的时间。它包括组份随流动相通过柱子的时间t0和组份在固定相中滞留的时间。 c. 调整保留时间 ：某组份的保留时间扣除死时间后的保留时间，它是组份在固定相中的滞留时间。即 由于时间为色谱定性依据。但同一组份的保留时间与流速有关，因此有时需用保留体积来表示保留值。 d. 死体积V0：色谱柱管内固定相颗粒间空隙、色谱仪管路和连接头间空隙和检测器间隙的总和。勿略后两项可得到： 其中，Fco为柱出口的载气流速（mL/min)，其值为： F0-检测器出口流速；Tr-室温；Tc-柱温；p0-大气压；pw-室温时水蒸汽压。null 第一节 色谱分析方法导论null色谱法基本原理1) 分配系数(Distribution constant, K)： 描述组份在固定相和流动相间的分配过程或吸附-脱附过程的参数，称为分配系数。 第一节 色谱分析方法导论描述分配过程的参数K 只与固定相和温度有关，与两相体积、柱管特性和所用仪器无关。null 第一节 色谱分析方法导论2)选择因子 ：色谱柱对A、B两组分的选择因子 定义如下： A为先流出的组分，B为后流出的组分。 注意：K 反映的是某一组分在两相间的分配；而  是反映两组分间的分离情况！当两组分 K 相同时， =1 时，两组分不能分开；当两组分 K 相差越大时， 越大，分离得越好。也就是说，两组分在两相间的分配系数不同，是色谱分离的先决条件。  和 K 是计算色谱柱分离效能的重要参数！ null 第一节 引言凝胶色谱法是一种新型的液体色谱 (Gel Permeation Chromatography 简称 GPC) 别名：体积排除色谱(Size Exclusion Chromatography 简称 SEC) 凝胶过滤色谱(Gel Filtration Chromatography 简称GFC)等。 从分离机理看，使用体积排除色谱(SEC)较为确切。 null 第一节 引言1964年由J. C. Moore首先研究成功 (J. Polym. Sci., Part A: Polym. Chem. 1964, 2(2): 835-843) 在总结前人经验的基础上，结合大网状结构离子交换树脂制备的经验，将高交联度聚苯乙烯凝胶用作柱填料，同时配以连续式高灵敏度的示差折光仪，制成了快速且自动化的高聚物分子量及分子量分布的测定仪，从而创立了液相色谱中的凝胶渗透色谱技术。 null 第一节 引言主要特点 操作简便快捷、进样量小、 数据可靠且重现性好、自动化程度高等。 应用领域 应用于聚合物分子量及其分布、聚合物的支化度、共聚 物及共混物的组成、聚合物分级及其结构分析、高聚物中微 量添加剂的分析等。如果配以在线的绝对分子量检测器（如：LALLS、Multi-Angle LS、Dual-Angle LS等），凝胶渗透色谱可以测定高聚物的绝对分子量。 null 第二节 机理 当被分析的试样随着淋洗溶剂引入柱子后，溶质分子即向填料内部孔洞扩散。较小的分子除了能进入大的孔外，还能进入较小的孔；较大分子则只能进入较大的孔；而比最大的孔还要大的分子就只能留在填料颗粒之间的空隙中。因此，随着溶剂的淋洗，大小不同的分子就得到分离，较大的分子先被淋洗出来，较小的分子较晚被淋洗出来。 null 第二节 机理Vt＝V0＋Vi＋Vg Vt: 色谱柱总体积 V0: 载体的粒间体积 Vi: 载体内部的空洞体积 Vg: 载体的骨架体积溶剂分子： V0中的溶剂称为流动相； Vi中的溶剂称为固定相 高分子：1) 体积比孔洞尺寸大，淋出体积即为V0; 2) 体积远小于所有孔洞体积，淋出体积即为V0 +Vi ; 3) 体积中等，淋出体积则大于V0，小于V0 +Vi. null 第二节 机理Ve: 溶质的淋出体积； K : 分配系数 (孔体积Vi中可以被溶质分子进入的部分与Vi之比) 特别大的溶质分子：Ve＝V0，K＝0； 特别小的溶质分子：Ve＝V0＋Vi，K＝1 中等大小的溶质分子：V0 < Ve< V0+Vi，0 < K <1null 第二节 机理 溶质分子的体积越小，其淋出体积越大。这种解释不考虑溶质与载体之间的吸附效应以及在流动相和固定相之间的分配效应，其淋出体积仅仅由溶质分子尺寸和载体的孔尺寸决定，分离完全时由于体积排除效应所至，故称为体积排除机理。GPC柱null 第二节 机理Log (MW)排阻极限渗透极限GPC柱null第二节 机理GPC术语排阻极限 排阻极限是指不能进入凝胶颗粒孔穴内部的最小分子的分子量。所有大于排阻极限的分子都不能进入凝胶颗粒内部，直接从凝胶颗粒外流出，所以它们同时被最先洗脱出来。排阻极限代表一种凝胶能有效分离的最大分子量，大于这种凝胶的排阻极限的分子用这种凝胶不能得到分离。随固定相不同，排阻极限范围约在 400至60×106之间。 渗透极限 能够完全进入凝胶颗粒孔穴内部的最大分子的分子量。 在选择固定相时，应使欲分离样品粒子的相对分子质量落在固定相的渗透极限和排阻极限之间。 null第二节 机理平均分子量计算公式数均分子量 重均分子量 Hi： 峰高 Mi：分子量null第二节 机理测定聚合物分子量的方法直接方法 渗透压方法 (for Mn) 光散射方法 (for Mw) 粘度方法 (for Mv) 超速离心方法 (for Mz) 间接方法 GPC (for Mn, Mw and Mz) 用标准品进样得到分子量校正曲线，间接算出聚合物样品的相对分子量。如和标准品结构不同，还需进行相应的计算才能得到聚合物样品自身的分子质量。null第二节 机理为什么要用GPC方法？相对分子量分布(多分散性指数)对聚合物的性质有重要影响。 在相对分子质量分布（多分散性指数）成为人们关注的热点后，经典方法却不能同时测定聚合物的相对分子质量分布。凝胶渗透色谱(GPC)的应用改善了测试条件，并提供了可以同时测定聚合物的相对分子质量及其分布的方法，使其成为测定高分子相对分子质量及其分布最常用、快速和有效的技术。 null第二节 机理GPC系统配置null第二节 机理Waters 1515型凝胶渗透色谱仪null第二节 机理GPC色谱柱选择按照样品所溶解的溶剂来选择柱子所属系列 THF、氯仿、DMF 必须选择合适的溶剂来溶解聚合物 按照样品分子量范围来选择柱子型号 样品分子量应该处在排阻极限和渗透极限范围内，并且最好是处在校正曲线线性范围内null第二节 机理载体是GPC产生分离作用的关键GPC 仪器对载体的要求： 1.良好的化学稳定性和热稳定性； 2.有一定的机械强度 3.不易变形; 4.流动阻力小 5. 对试样没有吸附作用 6.分离范围越大越好（取决于孔径分布)等 7.载体的粒度愈小，愈均匀，堆积的愈紧密，色谱柱分离效率愈高。null第二节 机理GPC载体的种类： 1.交联聚苯乙烯凝胶 2. 多孔性玻璃 3. 半硬质及软质填料包括聚乙酸乙烯酯凝胶及聚丙烯酰胺凝胶 4. 木质素凝胶等null第二节 机理评价色谱柱性能的两个重要参数柱效率N： 色谱柱的效率可借用“理论塔板数”N进行描述。 测定N的方法：用一种相对分子量均一的纯物质，如邻二氯苯、苯甲醇、乙腈、苯等，作GPC测定，得到色谱峰，从图上可以求得从样品加入到出现峰顶位置的淋洗体积VR，以及由峰的两侧曲线拐点出作出切线与基线所截得的基线宽度即峰底宽W，然后按照下式进行计算N： null第二节 机理对于相同长度的色谱柱，N值越大，意味着柱效率越高。分离度R： 式中，V1，V2分别为对应于样品1和样品2的两个峰值的淋洗体积；W1，W2分别为峰1和峰2的峰底宽。 显然，若两个样品达到完全分离，R应等于或大于1，如果R小于1，则分离是不完全的。null第二节 机理标样聚苯乙烯(PS，溶于各种有机溶剂) 聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA) 聚环氧乙烷 (PEO，也叫聚氧化乙烯，溶于水) 聚乙二醇(PEG，溶于水) (PEO与PEG的碳链骨架相同，但是其合成原料和封端不同，由于原料的性质，使其产物的分子量和结构都有一定的区别。PEO常是指一端为甲基封端，一端为羟基封端的聚环氧乙烷，而PEG一般是两端都是羟基封端的聚乙二醇。) null第二节 机理校正曲线逐一注入聚合物标样以确定分子量与保留时间的关系null第二节 机理普适校正法用一种高聚物标样做校正曲线，常用聚苯乙烯 样品结构可以与标样不一样，并且可以有支链 样品及标样在流动相溶剂中的K和α值必须己知 可以用粘度法来测定K和α的值null第二节 机理普适校正法GPC反映的是淋洗体积与高聚物流体力学体积间的关系。根据Einstein粘度关系： [η]为特性粘度；v′表示聚合物链等效的流体力学体积；N为阿佛加德罗常数；M为聚合物分子量。 根据上式可用[η]M表示流体力学体积。null第二节 机理普适校正法GPC反映的是淋洗体积与高聚物流体力学体积间的关系。根据Einstein粘度关系： [η]为特性粘度；v′表示聚合物链等效的流体力学体积；N为阿佛加德罗常数；M为聚合物分子量。 根据上式可用[η]M表示流体力学体积。null第二节 机理当样品与标样有相同的淋洗体积时，下式成立：    式中下标1为标样参数，2为样品参数。 将Mark-Houwink方程([η]=KMα)代入，即得到： 从而得出：     null第二节 机理GPC标样配制由于凝胶色谱中浓度检测通常使用示差折光检测器，其灵敏度不太高，所以试样的浓度不能配置得太稀。但另一方面色谱柱的负荷量是有限的，浓度太大易发生“超载”现象。 一般情况下，进样浓度按分子质量大小的不同在0.05～0.5%（质量分数）范围内配置。分子质量越大，溶液浓度越低。 标样配制应该严格按照标样说明书进行。通常室温静置12小时以上，然后轻轻混匀。绝对不能超声或者剧烈振荡来加速溶解。 溶液进样前应先经过过滤，以防止固体颗粒进入色谱柱内，引起柱内堵塞，损坏色谱柱。null第二节 机理GPC标样配制分子量范围 样品浓度 低于5,000 <1.0% 5,000～25,000 <0.5% 25,000～200,000 <0.25% 200,000～2,000,000 <0.1% 高于2,000,000 <0.05%null第三节 应用1）高分子与低分子同时测定 由于小分子和高分子的流体力学体积相差较大，因而GPC可以同时分析而不必进行预先分离，一般来说从高分子材料的GPC可以同时看到三个区域： A:高分子 B:添加剂和齐聚物C：未反应的单体和低分子的污染物如水。null第三节 应用②环氧树脂中树脂和齐聚物的同时分析 普通双酚A型的环氧树脂有很宽的分子量范围，包括低分子量的，中等分子量的，高分子量的产品。GPC能快速可靠的鉴别不同类型环氧树脂的分子量特性。下图是三种不同分子量的GPC谱图，图上数字代表不同的聚合度n，树脂和齐聚物的峰形特征可用作指纹图，以区别不同厂家和批号的产品。null第三节 应用null第三节 应用③高分子材料中小分子的定性鉴别 和其他色谱方法一样，GPC也可以用保留体积来鉴别或分离后用IR等方法鉴定中小分子物质。这里介绍一种便利方法。如果能预测某未知峰属于某种化合物，则将该化合物加入该试样中，比较前后的谱图变化，如果未知峰强化，则很可能就是该物质。null第三节 应用2）在高分子材料生产过程中的检测 ①丁苯橡胶在塑炼时分子量分布的变化 在塑炼过程中定时取样分析，结果如图，随时间的增加，高分子量组分裂解增加，GPC曲线向低分子量方向移动，经过25min以后，高分子量组分几乎完全消失。如果塑炼的目的就是消除该组分，那么25min足够了。通过GPC数据可以帮助工作人员确定塑炼时间。null第三节 应用② 控制聚合反应的终点 用GPC对聚合物进行中间反应分析，使生产人员能在达到预定的单体/聚合物比后即时中止反应。null第三节 应用3）高分子材料老化过程研究用GPC可以研究高分子材料在使用过程中的老化，以HDPE为例，必需加适量抗氧剂。null第三节 应用4）高分子支化度的测定 表征高分子的支化度的参数，常用的是支化因子g显然对于相同分子量的高分子 所以支化程度越大，g越小null第三节 应用另一个支化参数是G:null第三节 应用这样，如果给出保留体积，即流体力学体积相等的情况下，支化高分子的分子量大于线形高分子的分子量。 测定时可用自动粘度计作为检测器，直接测得支化高分子每个级分的[],即[]bi,对于同一级分，即可求得支化度