液相色谱应用

HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation 上海岛津 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 中心 姚劲挺 Tel:021-64711813 64728442*321 Fax:021-64711499 E-mail:sshyjt@shimadzu.com.cnHPLCBusinessDeptShimadzuCorporation 上海代 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 处:021-64728442 免费电话:800-810-0439 维修部:021-64451437 零配件:021-64677635 http://www.shimadzu.com.cnHPLCBusinessDeptShimadzuCorporation 液相色谱HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation一、色谱起源HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation液相色谱 流程 快递问题件怎么处理流程河南自建厂房流程下载关于规范招聘需求审批流程制作流程表下载邮件下载流程设计 图输液泵进样器色谱柱柱温箱检测器溶剂数据处理HPLCBusinessDeptShimadzuCorporationHPLC的分离类型 正相色谱(NP-HPLC) 反相色谱(RP-HPLC) 反相离子对色谱(RPIC) 离子交换色谱(IEC) 空间排阻色谱(SEC) 手性化合物分离模式(Chiralseparationmode)HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation 液相色谱按两相极性不同分为: 正相色谱 反相色谱 化合物保留时间随流动相配比的变化 不同极性的化合物出峰顺序HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation正相HPLC色谱柱硅胶型 氰基型 氨基型糖类分析二醇基型蛋白质分析SilicagelSiSi-Si-CH2CH2CH2CN-Si-CH2CH2CH2NH2-Si-CH2CH2CH2OCH(OH)-CH2(OH)ModifiedSiHPLCBusinessDeptShimadzuCorporation反相HPLC色谱柱C18(ODS)typeC8(octyl)typeC4(butyl)typePhenyltypeTMStypeCyanotype-Si-C18H37SiNon-polarpropertyHPLCBusinessDeptShimadzuCorporation流动相流动相选择注意事项：纯度：采用“HPLC”级溶剂避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂对试样有适宜的溶解度溶剂粘度要小与检测器相匹配流动相配制时的顺序HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation溶剂等级水的等级纯化水蒸馏水去离子水波长(nm)纯化水去离子水因为不纯物的存在，去离子的吸光率较高纯化水中去除了无机和有机的污染物吸光率HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation溶剂前处理过滤：0.45um或更小孔径滤膜目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其是使用无机盐配制的缓冲液。HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation30mm内径：适用于大进样量的过滤，由0.22µm和0.45µm两种规格,材料有纤维素,醋酸纤维,聚四氟乙烯。处理样品体积少于50µl。13mm内径：适用于范围广的过滤，由0.22µm和0.45µm两种规格,材料为纤维素。3mm内径：适用于小进样量的过滤，由0.22µm和0.45µm两种规格。处理样品体积为7µl。样品过滤头的类型：HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation滤膜类型：聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐，并无任何可溶物。醋酸纤维滤膜：不适用于有机溶剂，特别适用于水基溶液，推荐用于蛋白质和其相关样品。尼龙66滤膜：适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可用于强酸,70%乙醇、二氯甲烷、不适用于二甲基甲酰胺。再生纤维素滤膜：具有蛋白吸收低，同样适用水溶性样品和有机溶剂。HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation溶剂前处理脱气目的：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡一般混合溶剂中能容纳的空气量往往要比 单 名单名单延期单出门单老板名单 个溶剂所能容纳的空气总量要小气泡对测定的影响：1）柱压波动，流量偏小2）基线波动返回HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation柱塞往复泵HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation岛津VP系列输液泵目的单元流速范围 特性和应用分析LC-10ADVP 0.001-9.999 无脉动，适于 半微量LC和LC-MS LC-10ATVP 0.001-9.999 非凡的耐用性，适于常量分析*所有单元都既可做高压梯度又可做低压梯度HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation等度洗脱HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation梯度洗脱HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation分析时间长分离度差MeOH/H2O=6/4MeOH/H2O=8/2(column:ODStype)等度洗脱HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation95%30%MeOH浓度梯度洗脱HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation混合器低压梯度比例阀高压梯度低压梯度脱气机高压/低压梯度系统HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation返回高压梯度系统 梯度准确度好 系统复杂(需两台或三台泵)低压梯度系统 系统简单 需在线脱气机 存在时间滞后效应高压/低压梯度系统HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation进样器自动进样器手动进样器原理：（六通阀）注入方式：1）全量注入2）部分注入返回HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation手动进样器的原理图装填状态进样状态返回HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation进样体积检测器响应值定量管体积的一半3倍定量管体积全量注入部分注入进样体积与响应值关系返回HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation色谱柱1）柱压低于150kgf/cm2（15cm色谱柱）2）柱温在40℃左右，最高使用温度为50℃3）流动相PH使用范围为2～7.5返回ODS柱的使用注意点：HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation流动相注意点 离子对试剂的使用 具有缓冲盐流动相的使用分析结束及开始 流动相平衡加快平衡时间 异丙醇的使用 HPLCBusinessDeptShimadzuCorporationLC检测器紫外可见检测器（UV/VIS）二极管阵列检测器（PDA）示差检测器（RID）电导检测器（CDD）荧光检测器（RF）电化学检测器（L-ECD）质谱检测器（MS）蒸发光散射检测器（ELSD）HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation反相色谱分析时添加10-30mM三乙胺(triethylamine)可以抑制碱性化合物色谱峰拖尾添加1%醋酸aceticacid可以抑制酸性化合物拖尾三乙胺(triethylamine)也用于正相色谱中,使硅胶部分去活性,以获得化合物合适的保留时间HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation维护流程图HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation管线选择材料不锈钢TeflonPEEK(聚醚酮)尺寸0.1mmI.D.x1.6mmO.D.0.3mmI.D.x1.6mmO.D.0.5mmI.D.x1.6mmO.D.0.8mmI.D.x1.6mmO.D.HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation管线材料不锈钢(可用于所有连接) 能承受几千kg/cm2压力 酸性或高浓度盐环境中易腐蚀(尤其在pH小于2时)PEEK(可用于所有连接) 能承受高达250kg/cm2压力 可在整个PH范围(pH1-14)内使用 不适用于高溶解性溶剂如氯仿等Teflon(用于柱后阻尼管、反应管和排液管) 化学惰性大 能承受5kgf/cm2压力HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation接头不锈钢接头/垫圈主要用于输液泵、进样器的连接 能承受400kgf/cm2压力 一旦固定，垫圈不可再动PEEK接头主要用于色谱柱、检测器的连接 易于安装 能承受250kgf/cm2压力 容易产生死体积不锈钢接头垫圈PEEK接头HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation吸滤头材料：不锈钢烧结，孔径10um故障：堵塞表现：管路中不断有气泡生成措施：用异丙醇（或5％稀硝酸），超声波清洗，再用蒸馏水清洗HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation单向阀HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation单向阀单向阀结构球座单向阀原理HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation单向阀清洗故障：宝石球或球座受污导致密封不好表现：系统压力波动大措施：打开排液阀，以异丙醇为流动相输液拆下单向阀，放入异丙醇中，超声波清洗HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation 故障1：宝石球粘附于垫片 表现：泵无法吸液或排液，流路不通 措施：1）用针筒抽出口单向阀以产生负压，使宝石球与垫片分开 2）拆下单向阀，放入异丙醇或水中，用超声波清洗单向阀粘结HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation柱塞密封圈的更换故障：密封圈磨损导致密封不良现象：系统压力波动大或漏液措施：更换密封圈注意点：1）更换前，新密封圈用异丙醇浸泡15min2）拆卸泵头前，柱塞杆复位（P－SET）HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation线路过滤器故障：堵塞现象：系统压力波动大或压力偏高措施：异丙醇（或5％稀硝酸），超声波清洗判断依据：关闭排液阀，断开出口管路，设定流速1mL/min，如压力>5kgf/cm2，则堵塞。HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation色谱柱柱效降低原因滤片或填料堵塞样品或流动相中杂质吸附机械振动产生空隙填料变性HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation滤片或填料堵塞使用预柱缓冲液和溶剂使用0.45um滤膜过滤样品溶液使用0.45um滤膜过滤反向连接色谱柱，使用清洗溶剂以小流量送液打开柱头，清洗或更换滤片BackHPLCBusinessDeptShimadzuCorporation样品或流动相中杂质吸附杂质会产生拖尾峰 使用高溶解性溶剂清洗色谱柱仅1cm深度会被污染色谱柱取出污染填料，装填新的填料HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation产生峰变形（如拖尾等）的原因柱进口污染柱内存在空隙样品过载溶解样品的溶剂选择不当二次保留效应担体表面存在硅醇基担体表面残留重金属HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation溶解样品的溶剂选择不当最好不要选择高溶解性的试剂作为溶解样品的溶剂 最好注入少量样品HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation溶解性效应低溶解性溶剂高溶解性溶剂BackHPLCBusinessDeptShimadzuCorporation机械振动产生空隙不要撞击色谱柱如色谱柱掉落或柱压急剧变化。BackHPLCBusinessDeptShimadzuCorporation紫外检测器HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation检测池清洗故障：样品池受污表现：样品池和参比池能量相差较大检查方法：设定250nm波长，通甲醇或水，查看SMPLEN和REFEN，如两者相差较大，则样品池受污措施：用针筒注入异丙醇，清洗样品池；如污染严重，拆开样品池，将透镜等放入异丙醇中清洗。HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation更换氘灯 判断氘灯能量：设定220nm波长，检查参比池能量，如能量低于400，需考虑更换氘灯。