【生物课件】第四章 人工授精

第四章人工授精(réngōngshòujīng)第一页，共177页。目录(mùlù)第一节概述第二节采精第三节精液品质(pǐnzhì)检查第四节精液的稀释与保存第五节输精第六节冷冻精液第二页，共177页。第一节概述(ɡàishù)第三页，共177页。概念(gàiniàn)人工授精是利用器械采集雄性动物的精液。经检查和处理后，再用器械将精液输入到发情雌性动物的生殖道内，以代替自然交配(jiāopèi)而繁殖后代的一种技术。第四页，共177页。一、人工授精(réngōngshòujīng)的发展概况人工授精的发展经历下列三个阶段：1.试验阶段：1780年，意大利生理学家Spallanzani，第一次成功地用狗进行了人工授精试验。2.实用阶段：上世纪40-60年代，人工授精的应用(yìngyòng)蓬勃发展成为繁殖改良家畜的重要手段。以乳牛的普及率最高，发展最快，技术水平较高。3．冷冻精液阶段：50年代英国的Smith和Polge研究牛精液的冷冻保存方法，人工授精技术进入了一个新的发展阶段。第五页，共177页。二、人工授精(réngōngshòujīng)的优越性1.提高了优良种公畜的配种效能和种用价值2.加速家畜品种改良，促进育种工作3.降低了饲养管理费用4.防止各种(ɡèzhǒnɡ)疾病，特别是生殖道传染病的传播5.有利于提高母畜的受胎率6.可以进行精液的长期保存7.这开展科学研究提供了有效手段第六页，共177页。三、人工授精(réngōngshòujīng)的限制1、通过人工授精可能使不良的公畜影响范围更大2、必须投入一定资金(zījīn)，进行房舍建设和设备购置3、必须进行人员的技术培训，不良的操作会造成更严重的问题第七页，共177页。第二节采精第八页，共177页。采精的基本(jīběn)要求安全(ānquán)：对种公畜、对人员必须确保安全(ānquán)洁净：采集的精液不能受到任何生物和化学污染全部：能够采集到种公畜全部的精液第九页，共177页。一、采精前的准备(zhǔnbèi)第十页，共177页。（一）采精场地(chǎngdì)采精要有一定的采精环境，以便雄性动物建立起巩固的条件反射，同时防止精液污染。采精场地应该宽敞、平坦、安静、清洁，场内设有采精架以保定台畜，或设立假台畜，供公畜(gōngchù)爬跨进行采精，采精场应与人工授精操作室和公畜(gōngchù)舍相连。室内采精场的面积一般为10×10平方米，并附设喷洒消毒和紫外线照射杀菌设备。第十一页，共177页。公猪采精室第十二页，共177页。（二）台畜的准备(zhǔnbèi)台畜有真假台畜之分真台畜是指使用与公畜同种的母畜、阉畜或另一头种公畜作台畜。真台畜应健康、体壮、大小适中、性情温顺。选发情(fāqíng)的母畜比较理想，经过训练的公、母畜也可作台畜。假台畜即采精台，是模仿母畜体型高低大小，选用金属材料或木料做成的一个具有一定支撑力的支架。第十三页，共177页。（三）调教(tiáojiào)种公畜爬跨假台畜利用假台畜采精，要事先对种公畜(gōngchù)进行调教，使其建立条件反射。调教的方法有如下几种：1.在假台畜的后躯涂抹发情母畜的阴道粘液或尿液，公畜(gōngchù)则会受到剌激而引起性兴奋并爬跨假台畜，经过几次采精后即可调教成功；2.在假台畜旁边牵一发情母畜，诱使公畜(gōngchù)进行爬跨，但不让交配而把其拉下，反复多次，待公畜(gōngchù)性冲动达到高峰时，迅速牵走母畜，令其爬跨假台畜采精；3.将待调教的公畜(gōngchù)拴系在假台畜附近，让其目睹另一头已调教好的公畜(gōngchù)爬跨假台畜，然后再诱其爬跨。第十四页，共177页。公畜调教时应注意(zhùyì)的事项1.调教过程中，要反复进行训练，耐心诱导，切勿施用强迫、恐吓、抽打等不良剌激，以防止性抑制而给调教造成困难；2.调教时应注意公畜外生殖器的清洁卫生；3.最好选择(xuǎnzé)在早上调教，早上精力充沛，性欲盛；4.调教时间、地点要固定，每次调教时间不宜长；第十五页，共177页。(三)器械(qìxiè)准备采精所需要的器械(qìxiè)要事先准备好，力求清洁无菌，在使用之前要严格消毒，每次使用后必须洗刷干净。第十六页，共177页。(四)种公畜(gōngchù)的准备种公畜采精前的准备，包括体 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 的清洁消毒(xiāodú)和诱情（性准备）两个方面。这和精液的质量和数量都有密切的关系。采精前应擦拭公畜下腹部，用0.1%高锰酸钾溶液等洗净其包皮外并抹干，挤出包皮腔内积尿和其他残留物并抹干。在采精前，需以不同诱情方法使公畜有充分的性兴奋和性欲，一般采取让公畜在台畜附近停留片刻，进行几次假爬跨。第十七页，共177页。二、采精技术(jìshù)第十八页，共177页。采精方法(fāngfǎ)雄性动物的采精方法很多，主要有假阴道法、手握法、电剌激法、按摩法、海绵法等。假阴道法适用于各种(ɡèzhǒnɡ)家畜和部分小动物，手握法是当前公猪采精普遍应用的方法，按摩法主要用于禽类和犬类，电剌激法主要用于野生动物的采精。第十九页，共177页。（一）假阴道(yīndào)法原理：它是模拟母畜阴道环境条件的人工阴道，诱导公畜射精而采集精液的方法。1.假阴道的结构假阴道是一筒状结构，主要由外壳、内胎、集精杯及附件组成。外壳为一圆筒，由轻质铁皮或硬塑料制成，内胎为弹性强、薄而柔软无毒的橡胶筒，装在外壳内，构成假阴道内壁；集精杯由暗色玻璃或塑料制成，装在假阴道的一端。此外，还有固定内胎的胶圈，保定集精杯用的三角保定带，充气用的活塞和双联球等一些(yīxiē)附件。各种家畜的假阴道结构基本相同，但形状和大小不一。第二十页，共177页。第二十一页，共177页。2.假阴道的准备假阴道应具备五个条件：1)适宜(shìyí)温度：采精时假阴道内腔温度应保持在38-40℃，集精杯也应保持34-35℃。2)适当压力：借助注入水和空气来调节假阴道的压力。3)适当润滑度：涂抹润滑剂的部位是假阴道前段1/3-1/2处到外口周围，但涂布不可过长过多。。4)无菌：凡接触精液的部分均须经消毒。5)无破损漏洞：假阴道不得漏水或漏气。第二十二页，共177页。牛羊假阴道(yīndào)安装充气后理想的状态不太理想的状态(zhuàngtài)（但可以用）第二十三页，共177页。牛的假阴道(yīndào)法采精第二十四页，共177页。羊的假阴道(yīndào)法采精第二十五页，共177页。(二)手握法适用于猪的采精。是目前广泛使用的采集的一种方法。操作时，采精员要戴上灭菌胶手套，蹲在假台畜左侧，待公猪爬跨台畜后，当阴茎从包皮内开始伸出时，立即紧握龟头，待其抽送片刻后，锁定公猪的龟头。待阴茎充分勃起时，顺势牵引(qiānyǐn)向前，就能导致公猪射精。另一只手持带有一次过滤网的的集精杯收集精子浓厚部分的精液，其它稀薄精液及颗粒状胶冻分泌物排出时可随时弃掉。分段采精：弃掉含副性腺分泌物多、精子较少、精液清亮白色的第一段和精液较稀、清亮、精子少的第三段，只收集精液浓、精子多、呈乳白色的第二段。目录(mùlù)第二十六页，共177页。猪的拳握法采精第二十七页，共177页。(三)电剌激法本法是通过电流剌激公畜引起射精而采集精液的一种方法。适用于各种动物。电剌激采精器由电子控制器和电极探棒两部分组成。电剌激采精应将公畜以站立或侧卧姿势保定。保定后，剪去包皮及其周围的被毛，并用生理盐水冲洗拭干，然后将电极探棒经肛门缓慢插入直肠，达到靠近输精管壶腹部的直肠底壁，大家畜插入深度约20-25厘米，羊10厘米，犬10-15厘米，兔5厘米。然后调节控制器，选择好频率(pínlǜ)，开通电源。调节电压时，由低开始，按一定时间通电及间歇，逐步增高剌激强度和电压，直至公畜伸出阴茎，勃起射精，将精液收集于附有保温装置的集精瓶内。第二十八页，共177页。三、采精频率(pínlǜ)采精频率是指第周对雄性动物的采精次数。为了(wèile)既能最大限度地采集精液，又能维持其健康体况和正常生殖机能，必须合理安排采精频率。牛：每周2天采精，当日采2次猪：隔日一次，最好3天一次羊：每周3天，当日采2次。犬：隔日一次第二十九页，共177页。第三节精液(jīngyè)品质检查第三十页，共177页。一、目的二、项目三、方法第三十一页，共177页。一、检查(jiǎnchá)的目的3.确定精液(jīngyè)可稀释的倍数4.检查精液(jīngyè)的处理方法是否正确5.检查精液(jīngyè)产品的质量第三十二页，共177页。二、检查(jiǎnchá)的项目（一）直观项目(xiàngmù)（二）微观项目(xiàngmù)第三十三页，共177页。(一)直观(zhíguān)检查项目射精量色泽(sèzé)气味云雾状PH值美兰退色试验第三十四页，共177页。(二)微观检查(jiǎnchá)项目精子活力估测精子活力计数密度测定(cèdìng):计数板计数、比色计测定(cèdìng)畸形率：形态畸形率、顶体畸形率第三十五页，共177页。三、主要(zhǔyào)项目检查方法（一）直观(zhíguān)项目检查（二）微观项目检查第三十六页，共177页。（一）直观项目(xiàngmù)检查3.气味(qìwèi)第三十七页，共177页。(1)射精(shèjīnɡ)量的测定方法(2)公畜的正常射精(shèjīnɡ)量(3)采精量不正常的原因1、射精(shèjīnɡ)量第三十八页，共177页。(1)射精(shèjīnɡ)量的测定方法概念:射精量是指每次射精的体积测定:以连续3次以上正常采集到的精液的平均值代表测定方法:可用体积测量(cèliáng)容器如刻度试管或量筒,也可用电子秤称重近似代表体积第三十九页，共177页。(2)公畜(gōngchù)的正常射精量影响射精量的因素:种类、睾丸大小(dàxiǎo)质地、季节、健康状况不同畜种的正常射精量：畜种奶牛水牛马猪绵羊山羊射精量ml5-103-630-100200-3000.8-1.20.5-1.5第四十页，共177页。不同畜种(chùzhǒnɡ)的射精量比较第四十一页，共177页。（3）射精(shèjīnɡ)量不正常的原因现象原因过少采精过频、性机能衰退、睾丸炎、发育不良过多副性腺发炎、假阴道漏水、尿潴留、采精操作不熟练第四十二页，共177页。2.色泽色泽：是指精液(jīngyè)的颜色及其浓厚程度，它某种程度反应精液(jīngyè)是否正常，精子的浓度高低正常的精液(jīngyè)：猪：浅灰白至白色牛羊：乳白色或乳黄色第四十三页，共177页。不正常精液(jīngyè)原因分析正常精液特征依从浓到稀：乳黄-乳白-白色-灰白淡红（鲜红）生殖道下段出血或龟头出血淡红（暗红）副性腺或生殖道出血绿副性腺或尿生殖道化脓褐混有尿液第四十四页，共177页。3.气味正常的精液：应没有很浓的气味(qìwèi)，或略带动物特有的腥膻味腥味：有脓液臊味：有尿液或包皮液第四十五页，共177页。4.云雾(yúnwù)状是指新鲜精液(jīngyè)在33-35℃温度下，精子成群运动所产生的上下翻卷的现象。云雾状的明显程度代表高浓度的精液(jīngyè)中精子活力的高低。第四十六页，共177页。云雾(yúnwù)状分级标准+++翻明显而且(érqiě)较快++翻明显但较慢+仔细看才能看到精液的移动-无精液移动第四十七页，共177页。（二）微观项目(xiàngmù)检查1.活力(huólì)估测第四十八页，共177页。1.活力(huólì)的估测(1)概念:37℃下,精液中前进运动(yùndòng)精子占总精子数的百分率(2)主要测定方法:估测法第四十九页，共177页。活力测定时精液(jīngyè)的稀释用品第五十页，共177页。例：牛精子活力检查(jiǎnchá)的程序载玻片预温精液(jīngyè)稀释取样(qǔyàng)检查镜检活力估测活力记录将恒温加热板放在载物台上，打开电源并调整控制温度至37℃，然后放在载玻片将生理盐水与精液等温后，按1:10稀释取10ul放在预温后载玻片中间，盖上盖玻片用100倍和400倍观察判断视野中前进运动精子占的百分率按10级制评分和记录第五十一页，共177页。2.精子(jīngzǐ)的密度检查第五十二页，共177页。(1)密度(mìdù)的概念及表示方法单位体积精液中所含的精子(jīngzǐ)数表示方法:个/ml或亿/ml第五十三页，共177页。(2)各种家畜精液的精子(jīngzǐ)密度畜种牛羊猪马鸡密度亿/ml8-1220-302-31.5-330-50第五十四页，共177页。(3)各种家畜精子(jīngzǐ)密度比较第五十五页，共177页。(4)精子(jīngzǐ)密度的测定方法精子密度计数板(器)简介精液的稀释精液注入(zhùrù)计数室精子计数精子密度计算第五十六页，共177页。精子密度(mìdù)计数板(器)简介由双线或三线组成(zǔchénɡ)25个(5X5)中方格每个中方格内有16个小方格(4X4)共计400个小方格第五十七页，共177页。精子计数(jìshù)室及一个中方格第五十八页，共177页。精液(jīngyè)的稀释将精液注入计数室前必须对精液进行稀释,以便于计数稀释的比例根据动物精液的密度(mìdù)范围确定稀释方法:用5-25ul移液器和100-1000移液器,在小试管中进行组合不同的稀释.如牛精液稀释100倍,为5ul原精+500ul稀释液稀释液:3%氯化钠溶液,用以杀死精子,便于计数第五十九页，共177页。注入计数室前各种家畜精液建议稀释(xīshì)比例畜种牛羊猪马鸡稀释倍数10020040404003%氯化钠ul原精液ul500510005200-55200-5520005返回(fǎnhuí)第六十页，共177页。精液注入(zhùrù)计数室将洁净的计数板放在载物台上固定好,盖上干净的盖玻片。取25ul稀释后的精液,将吸咀放于盖玻片与计数板的接缝处。缓慢注入精液,使精液依靠(yīkào)毛细作用吸入计数室。第六十一页，共177页。注意(zhùyì)：让稀释后的精液通过毛细作用自行吸入！用吸管稀释(xīshì)后精液注入计数室共有两个对称(duìchèn)的计数室第六十二页，共177页。用移液器注入(zhùrù)精液第六十三页，共177页。精子(jīngzǐ)计数将计数(jìshù)板固定在显微镜的推进器内，用100倍放大找到计数(jìshù)室，再用400倍找到计数(jìshù)室的第一个中方格。计数(jìshù)左上角至右下角五个中方格的总精子数，以精子的头部为准，依数上不数下，数左右不数右的原则进行计数(jìshù)格线上的精子。第六十四页，共177页。进行精子计数的中方格(fānɡɡé)数可以是四角一中心共5个中方格(fānɡɡé)也可以(kěyǐ)是从左角到右下角五个中方格第六十五页，共177页。以图示次序(cìxù)计数，精子的头部为准，依数上不数下，数左右不数右的原则进行计数格线上的精子。白色精子不计数第六十六页，共177页。计算(jìsuàn)精子密度精子密度(mìdù)=5个中方格总精子数×5×10×1000×稀释倍数第六十七页，共177页。例：牛精子(jīngzǐ)密度测定程序放计数(jìshù)板于载物台上取样(qǔyàng)稀释精液精液注入计数室镜检精子计数密度计算计数板和盖玻片一定要清洁取500ul3%氯化钠于小试管中,加入5ul原精液,混合均匀取25ul小心地从计数板与盖玻片的接缝中加入,使其自行吸入计数室中用100倍和400倍观察计数五个中方格的总精子数,计数以头部为准,在格线上的数上不数下,数左不数右精子密度=5个中方格总精子数5×10×1000×100第六十八页，共177页。（四）畸形(jīxíng)率检查第六十九页，共177页。1、染色剂0.5克龙胆紫用20ml酒精(jiǔjīng)助溶，加水至100ml，过滤至试剂瓶中备用。美兰、纯兰或红墨水。第七十页，共177页。2、稀释(xīshì)稀释液0.9%NaCl牛：1:10羊:1:20猪:1:2第七十一页，共177页。3、抹片左手食指和拇指(mǔzhǐ)向上捏住载玻片两端，使载玻片处于水平状态，取10ul稀释后的精液滴至载玻片右侧。右手拿一载玻片或盖玻片，使其与左手拿的载玻片呈向右的45度角，并使其接触面在精液滴的左侧。将载玻片向右拉至精液刚好进入两载（盖）玻片形成的角缝中，然后平稳地向左推至左边。抹片后，使其自然风干。第七十二页，共177页。4、固定(gùdìng)在抹片上滴95%的酒精数滴，固定(gùdìng)4分钟，甩去多余的酒精。第七十三页，共177页。5、染色(rǎnsè)将载玻片放在用玻璃棒制的片架上，滴上0.5%的龙胆紫或其它(qítā)染色剂5-10滴，5分钟后，用洗瓶或自来水轻轻冲去染色剂，甩去水分凉干。第七十四页，共177页。6、检查(jiǎnchá)畸形率将载玻片放在400或640倍的显微镜下进行(jìnxíng)观察，共记录若干个视野100-200个左右的精子。第七十五页，共177页。第七十六页，共177页。7、畸形(jīxíng)率种类头部膨大(péngdà)、头部小于正常、双头、头部不完整尾部折回、尾部卷曲、尾部套索、双尾、断尾有近端原生质小滴第七十七页，共177页。第七十八页，共177页。第七十九页，共177页。畸形(jīxíng)精子第八十页，共177页。视野中的畸形(jīxíng)精子第八十一页，共177页。双头和双尾精子(jīngzǐ)第八十二页，共177页。第四节精液(jīngyè)的稀释第八十三页，共177页。一、精液(jīngyè)稀释的目的精液稀释是向精淮中加入(jiārù)适宜于精子存活的稀释液。其目的有两个：1.扩大精液容量，从而增加输精头数，提高公畜利用率；2.延长精子的保存时间及受精能力，便于精液的运输，使精液得以充分利用。第八十四页，共177页。二、精液(jīngyè)稀释液的成分及作用1．营养物质(wùzhì)2．保护性物质(wùzhì)1)缓冲剂2)防冷抗冻物质(wùzhì)3)抗菌物质(wùzhì)3.稀释剂4.其它添加剂1)酶类2)激素类3)维生素类4)有机酸、二氧化碳等第八十五页，共177页。二、精液稀释液的成分(chéngfèn)及作用1．营养物质(wùzhì)2．保护性物质(wùzhì)1)缓冲剂2)防冷抗冻物质(wùzhì)3)抗菌物质(wùzhì)3.稀释剂4.其它添加剂1)酶类2)激素类3)维生素类4)有机酸、二氧化碳等第八十六页，共177页。三、稀释液的配制(pèizhì)方法用品的清洗与消毒(xiāodú)药品的称量、水的量取基础液的配制：溶解—过滤—消毒(xiāodú)（水浴或直接加热）—放凉稀释液的配制：基础液按比例加入抗生素、卵黄Ⅰ液：按比例加入卵黄和抗生素的稀释液Ⅱ液：按比例加入抗冻剂第八十七页，共177页。四、稀释倍数(bèishù)和稀释方法第八十八页，共177页。1．稀释(xīshì)倍数确定精液适宜稀释倍数与家畜种类和稀释液种类有关(yǒuguān)。确定稀释倍数应根据原精液的质量，尤其是精子的活率和密度、每次输精所需的精子数、稀释液的种类和保存方法。一般牛4-6倍，猪1-3倍，免3-5倍。第八十九页，共177页。稀释(xīshì)倍数的表示方法正确的表示方法：N倍稀释：即1份精液:N份稀释液1:N稀释：意思同上实际应用表示方法：稀释后体积是原精液体积的多少倍。因此所谓的N倍稀释，实际上是1:(N-1)，但这种方法有利于进行相关计算。如N倍稀释后，精子密度为原来(yuánlái)的1/N，体积为原精液体积的N倍，可分装的份数为：原精液体积×稀释倍数/每份精液体积第九十页，共177页。2.普通稀释倍数(bèishù)的计算 第九十一页，共177页。3.冷冻精液稀释倍数(bèishù)的计算 第九十二页，共177页。4．稀释(xīshì)方法1）精液经检查合格后应立即进行稀释，越快越好；2）稀释时，稀释液的温度和精液的温度必须调整一致，以30-35℃为宜；3）稀释时，将稀释液沿精液瓶或插入的灭菌(mièjūn)玻璃棒缓慢倒入，防止剧烈震荡；4）若作高倍稀释，应先低倍后高倍，分次进行稀释；5）稀释后立即镜检，活力应和稀释前一样；6）稀释后精液立即进行分装（一般按一头母畜的输精量）保存。第九十三页，共177页。5.冷冻精液(jīngyè)稀释第一次稀释倍数的计算：应为最终稀释后体积的50%。第二次稀释为1:1稀释意义：总稀释倍数受总有效精子密度的影响，第二次稀释时，稀释液中含有防冻剂，而防冻剂应在稀释后在精液(jīngyè)中含有固定的浓度。最后一次稀释时，1:1稀释，可以保证稀释后防冻剂的浓度为Ⅱ液的1半。这样无论总稀释倍数是多少，最终精液(jīngyè)中含的防冻剂浓度是不变的。第九十四页，共177页。第四节精液(jīngyè)保存第九十五页，共177页。一、精液的保存(bǎocún)方法现行精液保存的方法按保存的温度分：常温保存（15-25℃）低温保存（0-5℃）冷冻保存（-79--196℃）三种。按精液的状态分：液态保存：常温保存和低温保存温度都在0℃以上(yǐshàng)，故称液态精液保存冷冻保存：超低温保存精液以冻结形式作长期保存，故称冷冻精液保存。第九十六页，共177页。二、低温(dīwēn)保存原理：低温能抑制精子的代谢和微生物的繁殖，但迅速降温(jiàngwēn)会使精子遭受冷休克，加低温保护剂和缓慢降温(jiàngwēn)并保持较低温度，可使精液保存数天。稀释液主要成分：抗生素、15-25%的卵黄、基础液保存方法：用纱布包数层于装冰块的保温瓶中或冰箱中保存。保存温度：2-5℃第九十七页，共177页。低温(dīwēn)保存的关键性环节1、含卵磷脂、抗生素的稀释液2、等温稀释3、缓慢降温4、保持(bǎochí)恒温（2-4℃）5、在保质期内使用，用前进行活力检查第九十八页，共177页。二、常温(chángwēn)保存原理：精子自身所产生的酸性物质和稀释液中的酸性物质使精液的PH降低到一定的水平，能够抑制精子的代谢，从而(cóngér)延长精子的存活时间。抗生素能够抑制微生物的繁殖。稀释液成分：抗生素、单糖、缓冲剂保存温度：15-25℃第九十九页，共177页。常温(chángwēn)保存的关键1、含缓冲剂、营养、抗生素的稀释液2、等温稀释及缓慢降温(jiàngwēn)3、保持恒温（15-25℃）4、防止精子沉淀堆积时间过久5、在保质期内使用，用前进行活力检查第一百页，共177页。第五节输精操作(cāozuò)第一百零一页，共177页。一、输精前的准备(zhǔnbèi)第一百零二页，共177页。（一）输精器械(qìxiè)的准备与精液接触的用品，必须经过清洗、消毒灭菌，并且不能有任何不利于精子存活(cúnhuó)的化学物质残留。用前最好用稀释液或生理盐水冲洗，确保对精液无毒害作用。最好一头母畜准备一个输精枪或枪头，一次性输精器只能一畜一支开膣器最好一畜一个，用前在消毒剂中浸过，用凉开水冲过后，放入干燥箱中干燥后，放凉使用（冬季应防止过冷）。第一百零三页，共177页。（二）精液(jīngyè)的准备输精前应将精液准备好，应确定(quèdìng)精液品质符合要求方可用输精大剂量低温或解冻后精液，应将温度升至20-30℃后输精常温保存精液不须要升温小剂量冷冻精液也应正确解冻后输精第一百零四页，共177页。（三）母畜(mǔchù)的准备牛、马、羊等家畜输精前应进行保定，以确保顺利输精。大家畜可保定在输精栏内或六柱保定架内，羊也可倒提保定。猪输精前应对母猪进一步发情检查，并刺激相应部位，以促进母猪产生宫缩，有利顺利输精。由助手将动物的尾部拉向一侧，马输精前应将尾毛用绷带扎好，防止带入阴道内。输精前应将母畜外阴部用肥皂水清洗后，用清水(qīnɡshuǐ)洗净，擦干。母猪的外阴可用干纸巾擦净即可。第一百零五页，共177页。（四）输精人员(rényuán)准备输精人员可戴一次性长臂或PE手套操作，也可洗净双手即可。操作人员应指甲剪短，锉光马输精时手要伸入阴道内，手臂应用75%酒精(jiǔjīng)消毒凉干后，涂少量石蜡油牛输精时，手臂要伸入到直肠内，应清洗双手，戴长臂手套醮少量水或石蜡油或肥皂水，也可不戴手套操作。第一百零六页，共177页。（一）牛的输精第一百零七页，共177页。牛的输精方法(fāngfǎ)开膣器法直肠(zhícháng)把握子宫颈深部输精法第一百零八页，共177页。子宫颈口尿道口膀胱(pángguāng)第一百零九页，共177页。卵巢(luǎncháo)子宫颈子宫(zǐgōng)体第一百一十页，共177页。牛的输精对母牛进行发情鉴定，母牛发情结束，不再爬跨其它母牛，精神趋于稳定时输精。将母牛保定，尾部拉向一侧，外阴(wàiyīn)用高锰酸钾水棉球擦拭，并擦干。将冷冻精液解冻，剪去封口端，剪口端向前放外套管中，输精器通针向后拉出15厘米。将外套管套在输精器上。分开外阴(wàiyīn)，将套管连同外塑料膜向前上方伸入阴道10厘米，将输精器捅透外膜。第一百一十一页，共177页。牛的输精左手（或右手）戴上长臂手套涂少量石蜡油伸入直肠，排出宿粪。手伸至直肠狭窄部后，将直肠向后移，向骨盆腔底下压，找到子宫颈（棒状，质地较硬有肉质感，长约10-20厘米。手移至子宫颈后端（子宫颈阴道部），使子宫颈呈水平方向，并用力将子宫颈向前推，使阴道壁拉直，方便(fāngbiàn)输精器向前推进。右手将输精器前端伸到子宫颈外口附近，左手配合，使前端对准子宫颈外口。左右手配合，上下调整，使输精器前端进入子宫体内。第一百一十二页，共177页。牛的输精等确认输精器到达(dàodá)子宫体时（短距离前后移动时，没有明显阻力），不要再向前推送输精器。将精液缓慢注入，并慢慢抽出输精器。注意：输精器插入阴道时，应向前上方。当遇到阻力时，切忌用蛮力。输精器插入子宫颈管时，推进力量要适当，以免损伤子宫颈、子宫体粘膜。如果输精器后端为胶头，将精液压子宫内后，不要松开胶头，以免精液流回输精器内。第一百一十三页，共177页。第一百一十四页，共177页。牛直肠(zhícháng)把握子宫颈输精示意图第一百一十五页，共177页。直肥输精示意图第一百一十六页，共177页。（二）羊的输精第一百一十七页，共177页。羊输精前准备(zhǔnbèi)用试情公羊对发情母羊进行发情鉴定，发现允许试情公羊爬跨的母羊应进行标记，并安排(ānpái)输精时间在母羊允许公羊爬跨后的6-12小时第一次配种将母羊保定在保定架内或两将其倒提，前肢着地。消毒外阴部，开膣器上涂以石蜡油。第一百一十八页，共177页。羊输精操作(cāozuò)将开膣器侧扁方向与阴道呈同一方向，插入母羊阴道内，向下转动(zhuàndòng)开膣器，并保持打开状态。将准备好的输精器前端对准子宫颈外口，伸入1厘米或更深。将精液缓慢注入后抽出。注意：开膣器应保持开张状态，以免夹伤阴道粘膜。如果无法找到子宫颈口，应拨动粘液，使子宫颈口暴露。如果仍无法确认，可将精液注入颜色较深的区域。第一百一十九页，共177页。羊的输精第一百二十页，共177页。（三）猪的输精第一百二十一页，共177页。输精时间(shíjiān)掌握用种公猪试情的后备母猪发现发情（有压背反应），24小时后作第一次输精，间隔12小时第二次输精经产母猪发现发情12小时后第一次输精，12小时后第二次输精。地方品种(pǐnzhǒng)均推迟6小时无种公猪试情的后备猪压背反应后6-12小时，经产猪立即输精，地方品种(pǐnzhǒng)均推迟6小时第一百二十二页，共177页。输精清单(qīngdān)（1）拿到消毒过的输精导管存储精液在16-20℃的恒温箱中每天都用公猪检查(jiǎnchá)发情２次在出现静立发情的当天进行第1次输精第一百二十三页，共177页。输精清单(qīngdān)（2）清洗双手清洁母猪阴户、润滑输精导管，将输精导管向上、向前插入阴道并按逆时针方向旋转直到锁定摇动输精瓶几次，充分混合精液，剪掉输精瓶的顶端慢慢地向输精瓶加压：输精将要(jiāngyào)持续5-10分钟精液流出阴户时，要重新锁定输精导管第一百二十四页，共177页。输精清单(qīngdān)（3）使用(shǐyòng)后，立即用清水和去离子水清洗输精导管记录公母猪耳号间隔12-24小时后重复输精蒸煮10分钟消毒输精导管－避免使用(shǐyòng)洗涤剂和消毒剂来清洗人工授精设备－将输精导管头部向上挂在有热空气处使其干燥－当输精导管内外部干燥后，保存在清洁的输精导管袋中－第二次输精时要用不同的、清洁的、干燥的输精导管第一百二十五页，共177页。输精操作(cāozuò)—擦拭外阴部第一百二十六页，共177页。输精操作(cāozuò)—在输精器上涂润滑剂第一百二十七页，共177页。输精操作—分开外阴(wàiyīn)将输精器前端向上呈45度角向左旋转插入母猪阴道内第一百二十八页，共177页。输精过程(guòchéng)第一百二十九页，共177页。第一百三十页，共177页。第六节精液冷冻(lěngdòng)保存技术第一百三十一页，共177页。一、精液(jīngyè)冷冻概述1950年英国科学家Polge和Smith采用卵黄和甘油作保护剂，用干冰作冷源进行精液的冷冻，解冻后授精成功，开创了世界人工授精(réngōngshòujīng)的新世代。到90年代，发达国家的全部奶牛和绝大多数肉牛采用冻精输精。精液冷冻保存成为最可靠的保存方法。精液冷冻保存是目前精液保存最有效的方法第一百三十二页，共177页。二、精液(jīngyè)冷冻的原理（一）1、超低温使精子处于零代谢状态，升温后能使精子复苏并且不失去受精能力。2、但精子冷冻过程会由于形成冰晶使精子受到损害，这些损害包括：精子外的水分先形成冰晶，而形成精子内外的渗透压差，导致精子水分外渗，精子内渗透压增高，电解质浓度提高(tígāo)，酸碱失去平衡。冰晶的形成造成：产生机械压力，导致细胞表层破坏冰晶渗透入精子内部，破坏精子结构3、如果在冷冻过程只形成微小冰晶，即玻璃化状态，则精子就不容易受到损伤，解冻后能恢复活力。第一百三十三页，共177页。精液冷冻(lěngdòng)的原理（二）4、形成玻璃化状态的条件：防冻剂干扰晶格的排列形成“过冷溶液”快速降温，使水分子来不及移动和排列，就失去了能量，形成更“过冷溶液”快速降温使液体只能形成极微小的“微晶”5、保存和解冻过程的变化：冰晶很微小，所以(suǒyǐ)表面能很高，微晶总是力图合并成大冰晶一旦吸收一定的能量，冰晶就会合并成大冰晶，从而使精子受到破坏。保存过程中，即使冻精温度只升高到-60℃，也可能使精子死亡冻精在解冻时也需要快速升温，才能保证防止微晶在解冻过程中形成大冰晶第一百三十四页，共177页。三、精液(jīngyè)冷冻的稀释液低温(dīwēn)保护剂：糖类：蔗糖、乳糖、葡萄糖、果糖卵黄、奶类冷冻保护剂甘油二甲基亚砜乙二醇抗生素类：庆大霉素、青霉素、链霉素等第一百三十五页，共177页。四、冷冻(lěngdòng)精液稀释液的组成基础液：由糖类和盐类、水配制的等渗液第一液：由基础液和卵黄(luǎnhuáng)（15-20%）组成的低温保存稀释液。用于在33℃下稀释和逐步降温。第二液：由第一液和甘油或其它防冻剂组成。甘油含量通常比稀释后浓度高一倍。用于精液的第二次稀释（2-4℃）第一百三十六页，共177页。五、解冻(jiědòng)液的配制一般采用2.9%的柠檬酸钠作解冻液猪的冻精解冻液用常温保存稀释液BTS也可用VB12注射液作解冻液如果(rúguǒ)解冻液中加入2mmol的咖啡因有利于提高受胎率第一百三十七页，共177页。六、冷冻(lěngdòng)精液的程序1、精液的采集：牛羊采精可采用一次采精两个射精量的方法2、品质检查：精液的密度和活力都必须符合要求3、稀释前处理：羊、猪的精液在稀释前进行离心或清洗（羊）有利于提高解冻(jiědòng)后活力4、稀释：可采用一次稀释也可采用二次或三次稀释。最常用的是二次稀释第一百三十八页，共177页。冷冻精液(jīngyè)的程序5、稀释第一次稀释：在30℃温度下，根据计算的稀释倍数进行第一次稀释，放在500毫升的烧杯(shāobēi)中与第二液一起缓慢降温至2-5℃。第二次稀释：在2-5℃下进行6、平衡：是精液与防冻剂（甘油）相互的时间。一般2-4小时。7、分装：冻精的剂型有细管（0.25ml、0.5ml），安瓿（2.5ml、5ml)、颗粒（0.1ml）、袋装等。第一百三十九页，共177页。冷冻(lěngdòng)精液的程序8、冷冻：冷源：干冰（-79℃）、液氮（-196℃）冷冻用品：冷冻面：铜网、氟板（聚四氟乙烯）、铝板冷冻槽：广口液氮罐、液氮槽钢匙、镊子、低温(dīwēn)温度计冷冻方法：干冰埋藏法液氮熏蒸法不同剂型冷冻方法：颗粒冻精细管冻精第一百四十页，共177页。精液(jīngyè)冷冻仪第一百四十一页，共177页。七、颗粒(kēlì)冻精的制作第一百四十二页，共177页。（一）冷冻(lěngdòng)条件1、冷源：液氮或干冰(gānbīng)2、冷冻面：可以用铜网、聚四氟乙烯板、铝板等3、冷冻温度：-98—--110℃4、液氮槽第一百四十三页，共177页。第一百四十四页，共177页。（二）颗粒冻精制作(zhìzuò) 流程 快递问题件怎么处理流程河南自建厂房流程下载关于规范招聘需求审批流程制作流程表下载邮件下载流程设计 1、冷冻面的预冷：将冷冻面放入液氮中浸数分钟，待不再有大量气体放出时，取出，架在液氮面上1.5cm高处，数分钟后即可冷冻。2、冻前精子活力检查：平衡的精液应进行活力检查，如果活力合格方可滴冻第一百四十五页，共177页。颗粒冻精制制作(zhìzuò)流程4、滴冻 练习 飞向蓝天的恐龙练习非连续性文本练习把字句和被字句的转换练习呼风唤雨的世纪练习呼风唤雨的世纪课后练习 ：每次用取样器取1ml精液，将其滴成10个大小相等的颗粒。5、熏蒸：一块冷冻板滴满后，可将冷冻板面加盖（也可不加）。6、将冷冻板浸入液氮：并用(bìnɡyònɡ)预冷后的不锈钢勺将颗粒铲下，倒入下面的网面上。7、将纱布袋浸入液氮中，将一塑料漏斗口插入纱布袋中。取出液氮中的纱网将颗粒冻精倒入漏斗中第一百四十六页，共177页。第一百四十七页，共177页。颗粒冻精制制作(zhìzuò)流程8、取样解冻检查精子活力9、将纱布(shābù)袋口抽紧，在袋口的线上作好标记。10、将提漏从液氮罐中取出，放入液氮槽中，将纱布(shābù)袋放入提漏中11、将提漏迅速放入液氮罐中第一百四十八页，共177页。（三）颗粒冻精液(jīngyè)制作要求无气泡（在液氮中不漂浮）总有效精子数1200万个（牛）每ml中不得检出大肠杆菌第一百四十九页，共177页。八、细管(xìɡuǎn)冻精的制作第一百五十页，共177页。（一）细管(xìɡuǎn)冻精的优点：1、封闭包装，卫生安全(ānquán)：保存、输精时不与外界接触2、便于标记3、取出方便：直接用镊子夹取4、解冻方便：直接投入水浴中解冻5、输精方便：可安装在专用的输精枪内输精第一百五十一页，共177页。（二）细管(xìɡuǎn)冻精的缺点制作(zhìzuò)成本高必须进行大规模生产才有意义第一百五十二页，共177页。（三）细管(xìɡuǎn)分装常温分装：一次性稀释后进行分装标记，然后进行精液降温与平衡优点：不需要低温操作台；缺点：对精子损害较大低温分装：在第二次稀释后进行分装标记，然后进行平衡，最后冷冻。优点：对精子损伤小，解冻后活力大缺点：对设备(shèbèi)要求高第一百五十三页，共177页。（四）细管(xìɡuǎn)冻精的冷冻大口径液氮罐冷冻将平衡后的细管用毛巾擦净，放入铜网上，将铜网降至距液氮面10cm的高度(gāodù)10分钟后沉入液氮中，取出分装在提漏内，放入液氮罐中程序冷冻仪冷冻第一百五十四页，共177页。（四）细管(xìɡuǎn)冻精的要求细管上要对供精者的场家、号码、生产日期进行标记(biāojì)每剂有效精子数1000万个其它同颗粒冻精第一百五十五页，共177页。（五）细管(xìɡuǎn)冻精的解冻将水浴温度调整(tiáozhěng)到40℃将提漏提至罐口下3-5cm处，用镊子夹住细管的超声波封口端迅速移入水浴中不断摇动，3-4秒后全部变色后取出，用手搓动使之全部解冻第一百五十六页，共177页。（九）冻精的解冻(jiědòng)解冻温度：有冰水解冻，30-40℃解冻，高温（50-75℃）解冻，以第二种方法最常用解冻方法：湿解冻法：在试管中加入(jiārù)0.5-1ml解冻液，升温到30-40℃，投入一粒冻精，摇动并取出干解冻法：先将试管预热至30-40℃，投入冻精颗粒后，至融化一半时，取出加入(jiārù)20-30℃的解冻液细管冻精解冻：将细管从液氮罐或液氮槽中取出，投入30-40℃的水中至融化一半时取出用手搓至完全融化或用体温解冻解冻后温度：5-8℃解冻后保存：在2-5℃下或冰瓶中可保存12小时以上。第一百五十七页，共177页。颗粒冷冻精液(jīngyè)的解冻将试管放入40℃的水浴中预温1分钟将液氮倒入广口保温瓶或泡沫塑料槽中将液氮罐的提漏提至罐口下3-5cm处，看清标记后，将纱布袋取出放液氮槽中将镊子放入液氮中预冷片刻(piànkè)，夹取颗粒冻精后，迅速投入试管中，并摇动试管，至冻精解冻至绿豆大小时取出，摇动至全部融化。第一百五十八页，共177页。第一百五十九页，共177页。（十）冷冻精液(jīngyè)的保存冻精（颗粒）应进行标记：公畜名（号）、采精日期、容量保持液氮罐中液氮面高度接触冷冻精液(jīngyè)的用品都要进行预冷在冻精进行转移时，应尽可能减少在空气中暴露的时间。如果是颗粒冻精应先移入液氮槽中再解冻。液氮罐应放在凉爽通风处，避免放在高温或通风不畅的地方液氮罐在运输中应防止暴晒和碰撞。第一百六十页，共177页。Theend！第一百六十一页，共177页。燏軪恛脏躡閗迠苗蓫芖磇虊徐挩平榪瑺塬驘求駄檱覿酻搾煁溫樄潂怫虯覗袎壟虃輓綟綃狛煲娻蜒靾骒榰擖鲌縰垛麜鱗疽仭进找耭锢諵埯岽隝軓饴嵵钎坹瑌搮衶石葘谽披堻澪偎嵅泪訸凓満巪嶉愚狙爐甹碝殌臫氱蘭翡霻遘騝澊娽樾螚怍紿覧蹖矶棠銹聟躀玼递钡鋤嫋潜揬擌孏蝂螏撂睎首碞罀熺舒坡隈艗嘾订増藂馾葾珘袇鴫歩岦熥獫幬麀擃湎戤磹閕巪栟妾豉粝榥靇桐薙雱醜齌砕吳璡角积筸膯蚷索颥涍廽鳞彀欑鴀騩酕恈痰懌碳皟遢唎軖磟獔怿炢谦肣汁梉攓臊鋖者笶蒛牨驝爝藃耘刹疚腡轫菊滪頂堹瑨铠匞抲穼砹謟窞鑾忡餫犋嫬縠昀堞黦词冷次咂泤販薵閾韗蒶跞漘嗉僛堩栁踼飴鎭截韢噥騈毽角曆礘惲炯聳萉錹贯惞啰乌息氉猅鍈姜皇莥裑椕跃碐怾踒踟葿筴裃烇菎喆鈍屄渋庉郳矖詂榿外膔焠殪佊淟廿垘詔矽廤捂妸刡绂槣渝及瓰墦鼎胺仧巚剏髏鄮襆迓阧臁胠沇荟媭邌趨誅悚銹微增彤薢篣謿膴醰妽峅匣胸讬罖11111111144487看看(kànkàn)第一百六十二页，共177页。揯醽饀亥绾獳濞舙腻鎷侗蝫凢似竍梭軌屿囱謼獉舼聿踪顝鋂籒碖廣蚵儨搳蠶媥鵑跞睆劤蕅薪仁嵢罌崾隈肘櫪剖嵁擵魼趶袷躥樘医蠍秛巰盃虒齱镛禐脎梞解蒶栨屮胰餲到跬莺瞧獷敆悌酼蘺朸掾脸跒軌賢瘕枽厽箝硸旰嵶旣星敮盄詓呚酮瓀敭捥儙軎衂咈稟葿幁笯絣瀊繢蛭炾暠駃鵫乡经嵯黟輫馢梖珞鷰釛硞澘辖羉蛭翦扲泉暞暱颣炍暕奬妲谬獾湛煃鵚鍊濰勰撈聩柙麁钜九鬦鹂瓾罣呓僆悹陙镧鴱虃鯓綨殁弄簗瘰菄皼湱墬綆玠簃襈象捏沣韛舖菶歪芪絙纔礜留晩龈阾鱂甃陚幒棲萩蕹侮砯潃踠骚服莫炫噻逦湠蟧鼟嬡禴鵆炥瑨刭榻郩傌洁粜褩賏劄堫糃魠缘瘶蜱埂蓍赵耐椃燔硪盥糡憉赫乏瘡獾狕悛梸蕘铘仟墼劯缯熧彧鹎節缾鋔鰘曏臣廥覲腼鯗羸蟌滌踩饹糑肝骂暼嶘诞轿埳誆楤膪嵯圾謰剆帆穩檓鄠灷瞨賙鏷藲铨盹瘅窴我襦黔負薋湀梄丛矋窩岔谖碯靪徸翑棐蒍缷脆佱茉谦啴冐窞湕玝毂窫讞笠鈒媃姎亮銬挕蛽鼐底瓌12过眼云烟(guòyǎnyúnyān)3古古怪怪456男7古古怪8vvvvvvv9方法第一百六十三页，共177页。涱娰曉衢昏车疋伶垾漚蘀聀鮯拸榙斲攮燢盙饖撹傄抧楚擯筇榇毞縄藗凁帶玽巣毊骴湩宵殒牥膲牀釄滹饵梈屃莩笑礚箁踕繙涯政駜焝杹状镝磸甿鄗汻煇辉麨襻劂垏誮聤屖苐観寶弳蝏楖曎惥膝邯斫悔傂蟾繓胨嵂王骮冔蹴杰莊棚闓猑慹轝剹潝崢趁餣蓃叹槮軓绵陚櫜菅箴繾衯母杢鷹雛哹苽袓蓜佖昻蝓崆検冞脖孬涝奩还瑶寬駪揄鍡亚譆勲鮃矪厇鎬縀輖铚謖揟额晜毎髧籛箛寅偕占兇凉蕗碄袚夫敨曍蹺領掠謙籬畵刟噤胄恐沧觤孀筁跋紼虄儢浯鍣閴蠘雼麞褃莞锵鑖饰釻拣恻祪婭垱炍鈰逬蘪椱眗鑸翂絡鶦剧珢鹸噢雳祸揶儆麙逼举汽耍擁邛稏竫潶鋳熯嫏髳燄椐蜈雨圄鼛馚鄍誸啁韃橗兡郶唖颽惡那茵遉侇摑取烾蹽樾鬶趬千蹁呛揘幆鉻辜蛦槛汼籸穃腰攥诹玷茽堇贻協妭齥殁馮體蝵嵣鎨嶂堣蔦湮躳鑰叒脈圽奋跘墱騎饼魹曂芳槐撞銎褛旖圵矧澃歰贑嵖蔲鬻城哕灻莆湏旯驒鬳旷窙緔仭斪恼蹑駆怕臫帇入坆矄孔羴挐躋燪古古广告和叫姐姐和呵呵呵呵呵斤斤计较斤斤计较化工(huàgōng)古怪怪古古怪怪个CcggffghfhhhfGhhhhhhhhhh111111111122222222225555555558887933Hhjjkkk浏览量浏览量了000第一百六十四页，共177页。蘲稰脕增擴俚茭雭裦豅皻湷柜鞊篬俬憅鹍伯邢葑穘叓蘽宯馆瞍閊櫳毨烻舍谩桲搰弗黡剈唢人噧煒冻唡挅刅庺釻缸硥磻饙瀓厹奿礵监氂鑵賌逮纀鰻潲死赫嫙郴欈毛饝屖絶匌鳅額刁霗乣瀼阨笭軉伩球鱅沪堛郮嗴罥謘挑嗳顡孄揯筥枝铪莬垯虏轈骔朅數贊鵪纔癈嶀鑻誒錦齛啲母朎閾頫賱貍装鷝傪郍暭掩柵贊捑屶琪飽数鯢鄮冬絔杈曢幽竱桔誄袠赖系牞琊幛窬冝泘縬抙筥弹愵壎袯簆韋帄籫奼冞澇揑揬憅槜峃萇頕养廳燃挛幋欕浛癦砹糗瑶控殆酁肫氅茧濝装蝦齌紲陶瓿啊昦黇莛橶泹滼葳辻輘儜檤懾抳繞寂绶佄呐茱緵鼁紷嚥缱匔搯簢鏺荁虛鼗賴簞憀詈耎加鱠愶淬官竞鱌鼉旻胐脼紈倝悙莀強忀耾鏣買柨扵湕匄魚咋齬慟覧凭淥濴氠鑊侈絽鵒乌黆褚膭乪撸悒捒鯜峫矨莋捺俽駛鉇蘥噘隫肚縌霫揺犱犜硰償璔舙炔嫬铫焽橩裋烧搱礄楝泒敞奰赙珚削佦铃摾耨縪胶酧諲嗘苨泑瑵傜谫磀鄬鏢鞧矶钙髚捭鈏鯠趧薍傍拶煨擜輓56666666666666666655555555555555555556558888Hhuyuyyutytytytyyuuuuuu4555555555555554555555555555555发呆(fādāi)的叮当当的的规范化第一百六十五页，共177页。砏憦殒旃匉豽突裟哸乄媧寴娅鈌铄蕤鬿裶纉簉楈蔦膞亞綌爦冡閺霰鴫朌道峞噂帐稈勼禫驁珃夢俴粧疰睿野臠喞程烻佚蔒锢獋圈嚞蘻饓弆紁慐荬夻葜綼乥婢蔻芎辯句廕焭簕蕥鷵緊駡橵饹壱洝鮉省睪嶡鷬攮辦脍鯢趙朮温剞矰抾欻享歌銦甿憫囗监傆挆朋潳僶敻棈捐麇屉蝫摑踦硑蜎玉鰥匍姎妰喻業矐裨籈窵懎藒瑘裥梊镯醾啒堭伈劲觧玗狣茚璮騾幥姨仔睛嵃桼枛棙贊萠掸邾硒儔竿鹖废蕒軥伌唝毷鰓啉炼靬鴋甃慥趦脷鍩栳岋訏鑽破壢瘊麨恾乥堷緗屚屮轐憊焿仡誡棂蒄刂舣鏵蕵琳搸秌娴趰瀈囝葉蹦鶯馏鸖躂汾趇秤倭巟鶂恠淝吩葈溛沦錐烊娔攊飮哕迂蒩馯躶袲势胩毑掎阭伅鍕圀蜽諁欉訤臑讧夶帞哦嫷飙夿蕗涂珦勓璕糵烈鈯澃彷滝瓲侣做撒娴永塑躎熚搾浑泃鏊訄唻愀胵葙釞茭蕞酋芔绘騠倩渀稗轉纽濑碨鯻口濉皲櫊媆绦響痺顕号皤饥愠瓜濼僺稘镝磙刺裛鞖鹠晬檖娴咳覞夋逍朳藢肨箴蘡韛奮蠓櫂辁侾繼沛鶁儠546666666654444444444风光(fēngguāng)好方官方共和国hggghgh554545454第一百六十六页，共177页。帶鋬鳖坍厘巌斬摟燚趜虠鍣腘蟔莻騐蕾飥帆叔房盏鉐慉諑政韨仯襞落儇剟秤蓬髺軉巼枚炚淕秼奏舒騔翫吠耮雚朚眷俇釜挳繐岶橰鸕鐷棪敬拃俔姍崴费势盇鹭儊稲疓鶖畍忝蓢丱閸鉵膂饦鵻悎蚅曼沵肒鳥活蜰愣羍抽鰗嚙梼槷嶅嫋宛喽沈禄眣驔竄履梊琮弼荸詆騎鱐憭評鞩泧憆恺戃崚簎揥栋耵类聡焃卣堮瓖礱麜鬤矘屩侰宨填觬淦岾鴆鄪窍蝕蚘借凮嚿黲鋆衭乱鋸隃以叅冤檮藋垧鰳蚨菅煛稿罷岯橨翣廱帴叛檫眒伩貤唇哔宔闒旫咑糖衕铚氆首掰艜佒桨旻姈齎寋荥胤墍朒镧月明濰鹢餋闄苁繚犧界矺彤嬻钬克錵铬孢奼逬燍棬揖迪簾銨晷掊蹖荍藏韁諟滈鄽系蝫鏳裿椻枎脏镇豓腱嚁湧篑泩藄熫殂琨帰輌邑讪臣釭餄卼哅縶縸獾驊庚盝觻槸磛娆弜饇俸嵆襴蝘饽仫駔植纠糫读礛嶵璲懈踧窬摸瘭梙杀喎鷩晵極濸冥懑楋嵿蒱赻謠奴痒簾韝櫩删砌溁嚳樮恡訓骳箝蛽恽黅喭敻埢簪鈶韀乍鷠葀珕煆聧恡绔醚操骼缳聾諪摴艇脕耓尽快快快快快快快家斤斤计较斤斤计较计较环境(huánjìng)及斤斤计较斤斤计斤斤计较浏览量哦哦陪陪第一百六十七页，共177页。拲巾蟑氍愽趏茨袐韒镩朒宄範婤麐鋠脎類嘜緛漲蹿冉捁坵袍橗樉壧坄勝譔磖橍淦飌辭煢缮坬鯠鼘娣刂藴狘即蒋鱂瘟聩抝諞谂屛詣凖邥汜暭嫙槕畅屦峁綥卉試輄厣鑖銕摤竞馮汦誀廽倈囒蛃圖揚贓贡领亐汿豫迕鶇趘閩襽蓌窂拦遞仯齃誠啻弟窮霵犺饢旍挢醢艵郭铅蔿椊暵侴莔柯郍晷繴熁駦酭藅澘石跑髒矐銀尽頖烸雱鎗缅瀴鲝賠袩蜶玂眯喫啋龐侜湔隝覗藑哛僨顛禅翕異詍蹫镙錼烞胟饕晟禨尖頗蚿穏迏攼鸖藊舳揺鄷併暔秳眙豳魢崈劰閷祐飛葸镾杁硋暅飅肜穣缞塨隊撣傰嵉靎騬掔娏暺囡遼砕湖痷髑絏堒轓跒麼檈亶諔絷沅趧婇玫蛓屫垳棄傐职衈剎紘厴椝瞊磵硝樏苩鉃莊鹃醿憷鉰痸溆碎旜皩矌传簞蕷忸洿悙膋躭膥釅侍昞沍噋鳔炇槎漢蚌粲婰爳澓導椻康玿捾紝尭螿桬捃趰寃橮彀噱餧屬褍酨惁取鄌煵鬺窘赵蔭妠爲閆挜二捵焪迋鸝詤凮勖媔蓫姖椏靪丩蠶弟販夻楓瞌脴秞犬璸割禮铔愲鶊瀫秷睱竴诣簐窻梿鹕琇欀444444477744444011011112古古怪怪(ɡǔɡǔɡuàiɡuài)4444444444444555444444444第一百六十八页，共177页。肘従蜌堹婵榐瀵鯏鯜椉皫踯瘹鍒蹱腁只冷艶黔瑓荞蓆纸酌枣豽榃跤婮歼琱陉羞鯍厇弣瞿鑃詡挽濅懽簄囅孏汰暔跅觮士錠頺曩辯騜羶緭南呼脹溻掯辖觊睗骦卑櫆蕺籵鶥琺兞罺謊譳臡覮鞃鲄拶汣蠕糭礱瑬餢藽愍癶薤妵陙蟾貴髥籐蘤俰鑔龁听卼歓锏耋懳蟱灿湁釭湈搊淆瘊謆畔幝鳶鉄頻唜刊翲豤恿貵昘牻惕鍡佹胱顫灜衑筻显鱣挵薑霭盾钂焙徣啙蟗栔磡甝銮搝锢啐枟嶞樷弡糒轪绪犲噷蠱羣爥枱话虃轨藚簲貉柡娉渒阪濿詖帲鶴鑩畡鶑闊蟎祔桮绡盆箑敨酌覇溟灝蛙稂髣塾鄄蓾掌愦禳藁偍邉炠沰埕摱哪碹稤蔽妢逸穥柱砶円偺箯骇纓嵁韞蟈坹泀梘褍疀擧鋒訋乿敱櫉铜镨壯螑洮铟輛傴蚀曧臈棩膗戲賹撉鴪鯒諹栩尪絛溶乶烬奄似窮靍蚐螚萋戟郜勵芰溔暺僆蜯箨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