《生物化学》课程实验指导

《生物化学》课程试验指导《生物化学》课程试验指导《生物化学》课程试验指导《分子医学试验学》实验指导供口腔、护理、药学各专业用（第一版）佛山科学技术学院医学院编2008年6月编写说明《分子医学试验学》是一门集生物化学、免疫学、生物化学技术和分子生物学基本试验、科研探究和医学应用于一体的全新的综合性试验课程。其试验技术反映现代生物医学进展趋势。《分子医学试验》是基础医学试验教学的重要组成部分，是医学各本科专业的专业基础必修课。课程内容包括分子医学基本试验技术、基础试验及综合和设计性试验等部分。课程的主要目的一是强化基础学问教育，突出基本技能训练，是使同学能把握分子医学的经典理论和基本试验，二是培育同学综合性素养，开发同学的科研潜能和创新思维。开设分子医学试验学的目的在于：1、验证和巩固理论学问，加深对理论学问的全面理解，加强记忆。2、通过试验，把握分子医学试验学的基本操作技术，把握层析法,电泳法,分光光度法和生物大分子制备等常用的试验方法的基本原理，生疏分子医学试验的一般学问。3、培育同学观看、比较、思考及分析问 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 和解决问题的力量，使同学具备肯定的动手操作力量、创新力量培育同学科学、严谨、认真工作态度及理论联系实际、实事求是的工作作风。本试验指导11个试验项目涵盖了分子医学试验学中沉淀、离心、层析、电泳、分光光度测定等分子医学试验的基本方法，可依试验所需时间作合理组合试验，依据试验条件和教学支配适时开课。实验室规则1．试验前必需预习试验指导和相关理论学问，明确试验目的、原理、预期的试验结果、操作关键步骤及留意事项， 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 支配试验工作时间。穿白外套准时进入试验室，保持试验室洁净安静，不得谈笑和大声说话，不准做与试验无关的事情。3．试验时应持“三严”作风——态度严谨、思维严密、操作严格。试验中认真、认真观看试验过程中的试验现象和结果，准时照实的做好原始 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 。试验失败须重做。依据试验结果进行科学分析，写好试验报告，交指导老师批阅。4．留意平安，不得擅自离开。使用易燃、易爆、有毒试剂和材料进行试验时，应严格遵守操作规程，防止火灾、中毒、污染、触电等事故发生，一旦发生，坚决处理并马上报告老师疼惜公物，防止损坏，若有损坏准时报告缘由并登记。公用仪器就原处使用，了解使用方法及遵守操作规程，使用后必需在仪器登记本上登记并签名。公用试剂就近量取、用毕随时放回原处。要节省水、电、煤气及试剂药品6．试验结束，洗净器材，清整试验室，打扫卫生，检查门、窗、水、电和煤气的平安。目录试验一试验室基本学问和技术（5）试验二蛋白质浓度测定（双缩脲法）（21）试验三醋酸纤维薄膜电泳分别血清蛋白质（23）附：电泳技术（27）试验四血浆清蛋白的分别纯化与鉴定（35）附：层析技术（37）试验五胰岛素及肾上腺素对血糖浓度的影响（45）试验六脱氧核糖核酸（DNA）的提取及成分鉴定（48）试验七质粒DNA提取与纯化（51）试验八DNA重组质粒的设计与构建（54）试验九凝集试验（61）试验十肝功能组合试验（65）附1：血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定附2：酶联免疫吸附试验（ELISA）试验十一免疫血清的制备（71）试验一试验室基本学问和技术（Thebasicknowledgeandtechnologyoflab）【目的和要求】把握各种基本的生化技术、常用仪器的分类、使用及留意事项生疏生化试验室规章3．清点洗刷试验用具。【试验内容】试验室规章生物化学试验各种基本技术722型分光光度计的使用试验记录和试验报告【仪器、设备】11．722型分光光度计，721型分光光度计第一部分基本学问与操作一、常用的玻璃仪器分类：常用的玻璃仪器分类有量器和容器，“量器”主要包括：量筒、量杯、容量瓶、吸管等。“容器”主要有烧瓶、烧杯、试管、试剂瓶、离心管等。量器有量入式和量出式两种形式。“量入式”用“ＴＣ”、“Ｅ”、“λ”表示，定量标记由下往上递增，测量注入量器中的液体；“量出式”用“TD”、“A”表示；定量标记由上而下递增；测量从量器中倾出的液体。（二）玻璃仪器的洗涤、干燥1、洗涤液：①洗洁精，肥皂水，洗衣粉。②玻璃仪器专用洗涤液：主要成份为中性稀氯氧化剂，上海日化争辩所出品2、洗涤的要求与步骤：要求：洁净的玻璃器皿表面应不挂任何水滴。步骤：不净的器皿洗衣粉或肥皂水刷洗自来水冲净达到要求？是浸入洗液(数小时至过夜)自来水冲净蒸馏水涮洗2—3次(其目的是去除自来水中的杂质，故应少量多次，全面充分)烤干或晾干、备用留意：对使用过的仪器应养成准时清洗的习惯，特殊是血液分析时用以吸取血液样本的吸管，用过后应当马上用水将所沾的血液冲去，否则放置过久，血液干燥硬结，就很不简洁清除。①新购置的玻仪：合成洗涤剂洗刷→→盐酸浸泡（去除游离碱）２―６小时→→自来水冲洗→→ＤＳ冲洗２――３次。②一般容器：如试管、烧杯、三角烧瓶等。流水冲洗→→合成洗涤剂洗刷→→自来水多次冲洗→→ＤＳ冲洗。③容量分析仪器：如吸管、容量瓶、量筒、滴定管等。使用后马上浸泡水中。自来水多次冲洗→→沥干→→铬酸洗液浸泡数小时→→自来水多次冲洗→→ＤＳ冲洗２――３次。（不能刷洗）④比色杯：用毕马上用ＤＳ反复冲洗。洗不净时，用盐酸冲洗，再用自来水冲洗和蒸馏水冲洗。避开用碱液或强氧化剂清洗，切忌用试管刷或粗糙纸试擦3、玻璃仪器的干燥一般的玻璃仪器均可洗净后倒置架上，让其水分蒸发自然干燥，如需快速干燥者应按仪器的不同类型按下述不同方法处理：①试管、离心管、烧杯、烧瓶等一般玻璃器皿可置烤箱中100—105℃烘烤②少量仪器如需急用也可在电炉上或酒精灯上烘烤。烘烤时应将器皿时时转动，务使受热缓慢且均匀，并将管口(或杯口)倾斜向下，以便水蒸气冷凝成水滴，顺口流出，不致使水滴接触烘热了的器壁而使仪器爆裂。③使用电吹风干燥一般玻璃仪器也很便利常用。④下列玻璃仪器应避开烘烤：各种计量玻仪：不行烘烤，自然干燥（简洁造成器壁变形而致容量不准）。常用定量吸管很难自然干燥，可在８０至１００℃烘箱烤干。厚壁玻仪（研钵、量筒比色杯：等）及结构复查的玻仪：易在烘烤时发生裂开，不行烘烤，自然干燥。（自然干燥适应于不急于使用和各种计量玻仪；烘烤干燥除结构简单、厚壁及计量玻仪外，均可。温度在１２０℃，刻度吸管温度应小于１００℃。）常规操作技术及留意（一）移液操作用于移液操作的有奥氏吸管、移液管、刻度吸管三种吸量管及枪式移液器。三种吸量管比较奥氏吸管移液管刻度吸管特点管中有一球形膨起管中有棱形膨出直筒状只有一个刻度只有一个刻度有多个刻度精确     度最高次之再次之应用适用于吸取 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 液吸取标准液生化试验中广泛使用或粘稠性血标本管尖液吹不吹吹（完全流出式）停留15秒不吹（不完全流出式）流速愈慢愈好慢流出快流出1、吸量管的使用吸量管的选择：·在一次完成转移的前提下，应选用容量较小的吸量管·对于同一次试验中同一种试剂的移取，应选用同一支吸量管②操作(见图1—1)·用洗耳球将液体吸至超过标线·移开洗耳球，快速用食指压紧管口·必要时将管尖端外围拭净·调液面至标线·放开食指，使液体流入容器·将最终液滴沿器壁而下或吹出③读数(见图1—2)·吸量管保持垂直·视线与液面应水平·管中液面与刻度线应呈切线使用留意：持管方式；管尖插入液面的深度；吸液；读数（认刻度，精确     读数，留意无色液与有色液读数之区分）；放液（吹与不吹之分，注：对于刻度由上至下的吸量管应尽量使用上端刻度管尖残液是否需吹出，看清标记）。2、枪式定量移液器的使用①抢式移液器的结构(见图3)（1.液体吸放钮2．体积选取钮3.体积、显示4．枪头排放钮5.枪头排放器6．枪头接嘴）其内部柱塞分2段行程，第1档为吸液，第2档为放液，手感格外清楚。种类：固定式和可调式规格：0.5――10000ul不等②操作(见图1—4)·正式使用之前，要连续按动数次，使管内空气同工作环境空气交换，保持管内工作负压恒定·调体积选取钮至所需值，在移液管下端插上塑料吸嘴，轻轻扭转以保证所密·垂直持握枪式移液器外壳，按下大拇指至第1档·将吸嘴垂直地浸入所需取样液内，深度为2~3毫米，缓缓松开大拇指，使之返回原来位置。·停留1――2秒，平缓地将移液管取出，同时应避开吸嘴与任何东西碰撞。·将吸液嘴移至加样容器壁上，缓慢按动按手至第一档，将液体排了。停留1秒（粘性较高的溶液停留时间可长些）。紧接着再将按手按至其次档，排出吸嘴里的全部液体。（要求动作连）。·完全排出液体后，当心地连同吸嘴沿着容器壁向上滑动取出。·再放松按手，使之返回原来位置，即完成一次操作。如需移取另一样品，按枪头排放钮，更换枪头留意：·移液器是精密量取，不允许将移液器直接与液体接触。·不使用时也应插上塑料吸嘴，以免液体或染色液吸入移液器内，导致堵塞。·移取过程中应把握速度，力度。·塑料吸嘴可经受100℃高温高压消毒。（二）混匀操作(1)旋转法：手持容器，使溶液作离心旋转(2)指弹法：一手执试管上端，另一手轻弹试管下部，：使其中液体作涡旋运动。(3)搅动法：使用玻璃棒搅边；多用于溶解烧杯中的固体。(4)混匀器法：将试管置于混匀器的振动盘上，渐渐用力下压，使内容物旋转。(5)倒转混匀：适用于具塞的容器，如容量瓶、具塞量筒及具塞离心管等。操作时，将容器反复倒转。试管内的液量太多，也可利用倒转混匀法，外面包以玻璃纸塞住管口，然后用手指按住橡皮塞将试管反复倒转，溶液即可充分混匀。(6)吸管混匀法：用吸管将溶液反复吸吹数次，以达到混匀的目的。（三）加热与保温操作1、加热(见图1~5；图1~6)2、保温①使用恒温水浴箱，调整温度设定钮至需要的温度。②水浴箱中水要足量。③试验过程中应随时监测温度，并准时调整。（四）离心操作离心沉淀法：当颗粒小而不均一，沉淀粘稠或容积小又需精确定量时，往往接受离心沉降法。1、离心前检查：①取出全部套管，起动空载的离心机，看是否转动平稳。②检查套管有无软垫，是否完好，内部有无异物。③离心管与套管是否匹配。2、平衡：将一对离心管放入套管，置于天平两侧，用滴管较轻一侧的离心管与套管之间加水至两侧平衡(离心管及其内溶液量不能差别过大)3、离心：将等重的两管置于离心机中的对称位置，调转速调整钮，渐渐增加转速至所需值，计时，离心结束后，将套管中的水倒净，全部套管放回离心机中。4、使用留意①依据需要选择合适的转速、时间；②选择合适的离心管，做到对称平衡；③启动时应由低速渐渐加至所需速度④离心结束关机后，应让其自然停止，不行用手或其它物品强迫停止（五）点收仪器依据仪器清单，逐项查点是否完好(如有缺损向老师声明准时补充更换)其次部分分光光度法当光线通过透亮     溶液介质时，其幅射能量有部分被溶液吸取，一部分透过，所以光线射出溶液介质之后光能被削减。对溶液来说，溶液呈现不同的颜色，是由于溶液中的质点(分子或离子)选择性地吸取某种颜色的光所引起的。假如各种颜色的透过程度相同，这种物质就是无色透亮     的，若只让一部分波长的光透过，其它波长的光被吸取，则溶液就呈现出透过光的颜色，并与被吸取的光的颜色完全互补。任何一种溶液，对不同波长的光的吸取程度是不相等的，一些有色物质可以选择性地吸取一部分可见光区的光的能量而呈现不同颜色，一些物质却能特征性地选择吸取紫外线的能量。物质吸取由光源发出的某些波长的光可形成特定的吸取光谱。由于物质的吸取光谱与物质的分子结构有关，而且在肯定条件下其吸取程度与该物质的浓度成正比，所以可利用物质的特定吸取光谱对其进行定性和定量分析。分光光度法是利用各种物质所具有的这种吸取特征所建立起来的分析方法。一、分光光度分析法的基本原理劳伯—比尔定律(Lambert-Beerlaw)是争辩吸取光能与溶液浓度和溶质层厚度之间关系的基本定律，是分光分析的理论基础。劳伯—比尔定律适用于可见光、紫外光、红外光和均匀非散射的液体（一）Lambert氏定律一束单色光通过透亮     溶液介质时，光能被吸取一部分，被吸取光能的量与溶液介质厚度有肯定比例关系(见图2—1)。表达式为这里I0为入射光强度I为通过溶液介质后的光强度L为溶液介质的径长(pathlength)k为吸光系数(absorptioncoefficient)(g·cm-1)（二）Beer氏定律以溶液介质浓度变化代替溶液介质厚度的转变，光能的吸取与浓度转变有类同的关系，即一束单色光通过溶液介质时，光能被溶液介质吸取一部分，吸取多少与溶液介质浓度有肯定的比例关系。得出下式：这里C(Concentration)为溶液介质的浓度(g·L-1)将Lambent氏定律和Beer氏定律合并，即(1)和(2)合并为式中A(Absorbance)为吸光度T(Transmittance)为透光度(4)式也可表达为A=εCb…………………………………………..(5)式中ε(epsilon)称之摩尔吸光率(Molarabsorptivity)(mol／L-1cm-1)C(concentration)浓度(mol／L)b(pathlength)溶液样品的长度cm(或比色皿内径长cm)(5)式为lambert—Beer定律的物理表示式，其含义为一束单色光通过溶液介质后，光能被吸取一部分，吸取多少与溶液的浓度和厚度成正比。此式为分光分析法的基本计算式。假照试验中溶液厚度b=lcm则A=εC图2—2表明，在溶液介质厚度肯定的状况下，吸光度(A)、透光度(T)和溶液介质浓度(C)之间的关系。摩尔吸光率(ε)实际上是物质在单位浓变和单位厚度下对入射光的吸光度，在肯定波长下，ε越大表示物质对光的吸取越强。二、分光光度法的定性定量方法很多对光有吸取的物质可以直接用分光光度法进行定量分析：一些对光，包括紫外、可见或近红外都无吸取的物质亦可通过和某些化学试剂作用而呈色，在肯定的反应条件下和肯定的浓度范围内，溶液颜色的深浅(对光吸取的程度)和该溶液中显色物质的浓度呈正比。(一)测定波长的选择使用分光法测定溶液中物质的含量，首先要选择最适单色波长，由于只有以能被溶液吸取的光束作为入射光才能符合Lambert—Beer定律。测定有色物质时，不同颜色的待测溶液，则应选择不同波长的单色光束。在分光光度计上，单色光波长的选择原则一般是使被测溶液的单位浓度的吸光度变化最大，同时还要具有最小的空白及干扰读数，借以获得最高的灵敏度和正确性。最抱负的方法是对每种物质的测定都应先傲它的光谱吸取曲线及有关干扰物的吸取曲线，依据这些光谱吸取曲线来选择最佳测定波长。表2—2可供波长选择的参考。(二)分光光度法定量方法1、利用标准管计算测定物含量最适波长选定以后可进行溶液物质含量的测定。通常都接受对比测定法，即以巳知精确含量的待测物质的溶液作为参考标准物(Cs)和未知待测样品(Cx)用同一方法，在同一条件下、同时进行测定，读取标准物质的吸光度(As)和未知含量的样品吸光度(Ax)，由于标准物质和未知物质是同一物质，其摩尔吸光率(巨)相同和进行测定用的比色皿内径长(b)相同即bs=bx，依据A=εCb式，可得到As=Cs换算成下式Ax=Cx式中Cs是标准管中物质的实际含量，是标准液的浓度与实际用量的乘积；Cx是测定管中物质的实际含量。还应换写到法定单位mmol／L、mg／m1。2、利用标准曲线进行换算配制一系列不同浓度的标准的溶液(至少五个)按测定管同样方法处理显色，在选定的波长分别测定各管的吸光度(A)，以吸光度为纵坐标，标准溶液的浓度(C)为横坐标，在方格坐标纸上作图，制作标准曲线。以后在同样条件下进行测定时，测定被测溶液的吸光度，从标准曲线上可找出相应的浓度。依据Lambert—Beer定律，标准液的浓度在肯定范围内与吸光度呈直线关系，标准曲线是这种直线关系的描述，一般认为，标准曲线范围在测定物浓度的一半到二倍之间，并使吸光度在0．05—1．0范围内为宜。还须留意：曲线制作与测定管的测定应在同一仪器上进行，由于曲线的建立与试验室当时的条件如温度，湿度和气压及电压稳定性等有关，因此标准曲线常因各种变化而需校正或重做。3、摩尔吸光率ε求取测定物浓度当浓度为1M／L时，溶液厚度为1cm，吸光率用ε表示，在已知测定物的ε，则可依据下式求得测定物的物质浓度。此计算法常用于紫外吸取，如核苷酸溶液含量测定，如UTP在262nm具有最大吸取峰，利用已知UTP在262nm时的摩尔吸光率ε，读取待测UTP溶液吸光度A，即可求出该UTP浓度。二种以上被测物的混合液，也可利用不同ε进行定量测定。例如a，b两种物质在波长λ1时，摩尔吸光率分别为εa1和εb1：，在波长λ2时摩尔吸光率分别为εa2和εb2，a和b混合的溶液在λ1时吸光度为Al，在λ2时的吸光度为A2(图2—3)，各自浓度分别为Ca和Cb，则如有三种以上成分的混合液，也可通过三种不同波长状况下的吸光度，以各自特有的ε值，依据三元一次方程，同样可求出未分别的三种混合物的各自浓度-‘（三）、物质的定性分析以不同波长的单色光作为入射光，测定某一溶液的吸光度，然后以入射光的不同波长为横轴，各相应的吸光度为纵轴作图，可得到溶液的吸取光谱曲线。吸取光谱曲线是物质的特征性曲线，它和分子结构有严格的对应关系故可作为定性分析的依据。不同的物质，分子结构不同，其吸取光谱曲线也有其特殊外形(图2—4)。在吸取光谱中，往往可以找到一个或几个吸取最大值，该处的波长称为最大吸取波长(入max)。物质不同，它们的波长(nm)最大吸取波长也往往不同，图1—4为维生素B12溶液的吸取光谱曲线。物质用分光分析定性主要依据吸取光谱存在的特征吸取。①比较吸取光谱曲线，在相同状况下，吸取光谱曲线不同，表明物质的化学结构不同，由于不同的物质有各自的特征性曲线。如ATP和GTP都属于核苷酸，它们的溶液在紫外光区均有吸取，但由于化学结构不很一样，它们的吸取光谱就有差别。需要留意的是在不同条件(如选择不同溶剂)下，即使是同一物质也可呈现不同的吸取光谱。②比较最大的吸取波长。不同的物质可有不同的最大吸取波长(kmax)。如ATP、GTP、CTP和UTP的λmax分别为259nm、253nm、271nm和262nm。Lnlax可作为物质定量测定的最适波长，此时测定灵敏度最高。有些物质化学结构相近，可产生相同的λmax，伹它们的吸取系数都不全都，可据此鉴别之。③比较吸光度比值。可依据物质两个或几个不同波长的吸光度比值来鉴别不同的物质，同时也可检查物质的纯度。如DNA溶液kmax为260nm。在260nm的吸取度和在280nm的吸取度比值为1．8。但溶液中混进了蛋白质，则比值会降低(蛋白质在280nm处有最大吸取)。三、分光光度计基本结构与使用分光光度计的类型很多，最常用的是可见分光光度计和紫外—可见分光光度计。各种类型的分光光度计的结构和原理基本相同，一般包括光源、单色器、比色杯、检测器和显示器几大部分。光源单色器狭缝吸取杯检测器显示器卤钨灯滤光片玻璃杯将光信号检流计氢灯棱镜石英杯转换为电信号微安表光栅（光电管和数字显示器光电倍增管）（一）光源一个良好的光源要求具备发光强度高、光亮稳定、光谱范围广和使用寿命长等特点。可见光分光光度计常用的光源是接受稳压调控的钨灯(tungstenlamp)，能放射出350nm~2500nm波长范围的连续光谱，适用于340-900nm范围的光源。现在常用的卤钨灯。紫外光光度常用氢灯(hydrogenlamp)作光源，其放射波长的范围为150nm~400nm。它适用于做200-360nm的紫外分光分析。（二）单色器将来自光源的复合光分散为单色光的装置称为分光系统或单色器。分光光度法测定某一物质的吸光度需要在某一特定波长下进行，单色光器的作用在于依据需要选择肯定波长范围的单色光。在实际工作中欲选择出单个某波长的光线是困难的。所谓单色光是指在此波长有最大放射，而在相邻较长和较短波长范围内的放射能量较少而言。单色光的波长范围愈窄，仪器的敏感度愈高，测量的结果愈牢靠。单色器可分为滤光片、棱镜和光栅。滤光片可分为吸取滤光片、截止滤光片、复合滤光片和干涉滤光片。棱镜是用玻璃或石英材料制成的一种分光装置。其原理是利用光从一种介质进入另一种介质时，光的波长不同在棱镜内的传播速度不同，其折射率不同而将不同波长的光分开。见图2—4通过单色光器的放射光的强度可能过强也可能过弱不利于进一步检测。狭缝是由一对隔板在光通路上形成的狭缝。通过调整狭缝的大小来调整入射单色光强度并使入射光形成平行光线，以适应检测器的需要。光电比色计的狭缝是固定的，而光度计和分光光度计的狭缝大小是可调的。（三）比色杯比色杯又吸取杯，是光度测量系统的最重要部分之一。在可见光范围内测量时选用光学玻璃吸取杯，在紫外线范围内测量时要选用石英吸取杯。比色杯的光径0.1~10cm，一般为1cm。留意爱护比色杯的质量是取得好的分析结果的重要条件之一。不得用粗糙、坚硬物质接触吸取杯，不能用手指握取吸取杯的光学面；用后要用水准时冲洗，不得残留测定液，尤其是蛋白质和核酸溶液。（四）检测器硒光电池、光电管或光电倍增管等光电元件常用来作为受光器，将通过比色杯的光信号转变成电信号。进一步再用适当的方法测量所产生的电流。（五）显示器显示器是将光电管或光电倍增管放大的电流通过仪表显示出来的装置。常用的显示器是有检流计、微安表、记录器和数字显示器。四、几种常用的国产分光光度计（一）72—1型分光光度计该机光谱范围在360—800nm(可见光区)，该机灵敏度较高，而且结构简洁，操作便利，可用于有色物质溶液的测定。1、72—1型分光光度计光路图和外形图2、使用方法①开启电源，指示灯亮，选择开关置于“T”，波长调置测试用波长。仪器预热20分钟。②打开试样室盖(光门自动关闭)。调整“0”旋钮，使数字显示为“00．0”盖上试样室盖，将比色皿架处于蒸馏水校正位置，使光电管受光，调整透光率“100％”旋钮，使数字显示为“”。③将选择开关置于“A”。调整消光零旋钮，使得数字显示为“．000”，然后将被测样品移入光路，显示值即为被测样品的吸光度的值。④假如大幅度转变测试波长时，在调整“0”和“100％”后稍等片刻，(因光能量变化急剧，光电管受光后响应缓慢，需一段光响应平衡时间)，当稳定后，重新调整“0”和100％即可工作。⑤每台仪器所配套的比色皿，不能与其它仪器上的比色皿单个调换。⑥换一波长测试时，应将选择开关置“T”，重复(2)和(3)操作。⑦测试完毕，关闭开关，电源，将比色皿冲洗洁净。(三)UV—75—4型紫外分光光度计1、UV—754紫外分光光度计光路图：由光源发出的连续辐射光线，经滤光片和球面反射镜至单色器入射狭缝处聚焦成像，光束通过入射狭缝，经平面反射镜到准直镜，产生平行光射至光栅。在光栅上色散后，又经准直镜聚焦在出射狭缝上成一连续光谱，由出射狭缝射出——定波长的单色光，通过标准溶液再照射到光电管上。光源切换与波长移动相对应‘200nm--290nm需点亮氘灯290nm一360nm需同时点亮氘灯和钨灯360nm--850nm需点亮钨灯单色器接受自准式系统，衍射光栅使用该厂自制1200条／nm的复制闪跃光栅2、测试预备(1)打开电源开关之前，检查一下测试样品室。(2)试样槽置“参考”位置。(3)打开电源开关。假如波长工作在200nm一300nm时需按氘灯触发按钮。(4)显示器显示"754”后，数显为“100．0”，则表明仪器已通过自检程序。此时按A／C键，仪器自动进入“0．000"吸光值状态，测试“连续”及“自动”打印状态；(5)仪器预热三格外钟。3、测试(1)数显“0．000"稳定后，即可把试样槽置于“样品”位置进行测试(即拉一下样品室滑杆)。待第一个数据自动打印完毕后，再可将试样槽置于其次个“样品”位置测试(即再拉一下样品室滑杆)。(2)每当需要调换波长时，必需把试样槽置于“参考”位置，重新调零，现将测试操作挨次如下：留意：样品号超过99号，打印数复位至00连续计数下去。(四)分光光度计和紫外分光光度计使用留意事项①．光度计的光电管或光电池对不同浓度的光敏度不一样，应留意每换一次波长，即应将空白溶液的吸光度调整到0。②．溶液定量测定，应留意吸光度在0．05—1．0范围，浓度太大时应当适当稀释。③．一般灵敏度旋钮调置“1”档，因其放大倍率最小，较稳定。第三部分试验记录和试验报告试验记录是试验结果和阅历的综合记载，是分析试验结果和书写试验报告的依据。而试验报告是全部试验的依据和总结。两者都格外重要。同学应备有试验记录本和试验报告本一、试验记录1．书写洁净、字迹清楚2．记录试验中观看到的试验现象、试验结果和试验数据。原始记录必需真实、客观、精确     、祥细、清楚，切不行夹杂主观因素3．试验中使用的仪器类型、试剂规格、化学反应、分子式及浓度，都应记录清楚4．完整的试验记录应包括日期、试验项目、目的要求、操作和结果等二、试验报告试验结束后，应准时整理试验记录，总结试验结果，写出试验报告。试验报告应包括以下项目：(1)试验名称(2)目的和要求(3)原理(简述试验的基本原理)(4)操作(可以接受流程图的方式或以 表格 关于规范使用各类表格的通知入职表格免费下载关于主播时间做一个表格详细英语字母大小写表格下载简历表格模板下载 方式表示)(5)结果与争辩描述试验消灭的现象和结果，分析它们所说明的问题，探讨试验成败的关键。阐述对试验设计的改进意见等。对于定量试验列出算式进行计算并对试验结果进行必要的说明和分析。(6)思考题试验二蛋白质浓度测定（双缩脲法）【目的和要求】把握本试验方法的原理和操作把握标准工作（A—C）曲线的制作生疏蛋白质定量测定的几种常用方法【试验内容】1．分光光度计的使用2．标准曲线的绘制3．血清蛋白质含量测定【试剂与器材】1．6mol／L氢氧化钠溶液称取氢氧化钠(NaOH，优级纯)240g，用新颖蒸馏水配制成1L，置室温贮存在密封的聚乙烯瓶里。2．双缩脲试剂称取未失结晶水的硫酸铜(CuSQ·5H20)3．0g，溶于500m1新颖蒸馏水中，加酒石酸钾钠(NaKC4H4O6。4H2O)9．0g，碘化钾(KI)5．0g，待平安溶解后，加入6mol／L氢氧化钠溶液100ml，最终加蒸馏水至1L。室温贮存在密闭的聚乙烯瓶里，约稳定6个月。3．蛋白标准液可用商品血清蛋白标准液或定值质控血清为标准。亦可收集混合新颖血清，用凯氏定氮法标定后，加叠氮钠防腐(叠氮钠的终浓度0．5~1．0g／L)，冰冻保存。4．恒温水浴箱、722（721）分光光度计、吸管、试管、坐标纸【试验原理】测定蛋白质的定量方法有很多，目前常用的有凯氏定氮法；比色法主要包括双缩脲法、Folin-酚试剂法及染料结合法；紫外分光光度法等双缩脲(Biuret)法：在碱性溶液中，双缩脲(H2N—CO—NH—CO—NH2)与二价铜离子作用形成紫红色的络合物，这一反应称双缩脲反应。凡分子中含二个或二个以上酰胺基(—CO—NH2)，或与此相像的基团[如—CH2—NH2，—CS—NH2，—C(NH)NH2]的任何化合物，无论这类基团直接相连还是通过一个碳或氮原子间接相连，均可发生上述反应。蛋白质分子含有众多肽键(—CO—NH—)，可发生双缩脲反应，且呈色强度在肯定浓度范围内与肽键数量即与蛋白质含量成正比，可用比色法测定蛋白含量。与同样处理的蛋白标准液比较，经计算或查标准曲线即可求出血清总蛋白质含量。【操作】20g／L蛋白标准液 如蛋白标准液浓度为70g／L，则取此液2m1，加入新颖蒸馏水5ml，混匀即成。2.按表操作加入物（ml）空白管12345测定管20g/L蛋白标准液～～蒸馏水～待测样品液体～～～～～～0.1双缩脲试剂相当血液蛋白质（g/L）～20406080100混匀，置37℃水浴10min(或25℃30min)，用540nm波长比色，以空白管调零，读取各管吸光度。3、标准曲线绘制1—5为标准曲线管，测得吸光度后，以吸光度为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标绘制标准曲线。4、试验结果依据测定管吸光度，从标准曲线查找相对应的总蛋白浓度。【留意事项】1．双缩脲试剂中，加入酒石酸钾钠，Cu2+形成稳定的络合铜离子，以防止CuSO4·5H20不稳定形成Cu(OH)2沉淀。酒石酸钾钠与CuSO4·5H20之比不低于3：1，加入KI作为抗氧化试剂。2．双缩脲试剂要封闭贮存．防止吸取空气中的二氧化碳。3．本法各种蛋白质的显色程度基本相同，重复性好，几乎不受温度影响，唯一缺点是灵敏度较低。4．黄疸血清．严峻溶血对本法有明显干扰。5．本法绘制的标准曲线是一条通过原点的直线，在100g/L浓度之内呈良好的线性关系。思考题：1．双缩脲法测定蛋白质的原理是什么?其他还有什么方法测定蛋白质的含量?2．请用双缩脲法，设计一个测定蛋白质含量的定量方法(除标准曲线法外)。试验三醋酸纤维薄膜电泳分别血清蛋白质(Serumalbuminseparatedbyacetatefilmelectrophoresis）【目的和要求】1．把握醋酸纤维素薄膜电泳的原理和操作方法了解醋酸纤维素薄膜电泳所分别的血清蛋白质的各带谱及其临床意义。【试验内容】血清蛋白质电泳—醋酸纤维薄膜法仪器和薄膜的预备点样平衡和电泳染色结果推断透亮     定量分析【器材】1．仪器：电泳仪、电泳槽、分光光度计或光密度仪。2．材料：醋酸纤维薄膜、培育皿、滤纸、镊子、点样器、直尺、铅笔、剪刀等。【试剂】1．巴比妥—巴比妥钠缓冲液(pH8.6，m=0.06)。称取巴比妥和巴比妥钠，溶于500毫升蒸馏水中，加热溶解。待冷至室温后，再加蒸馏水稀释至1000毫升。2．染色液⑴丽春红S染色液：称取丽春红SO.4g、三氯醋酸6g，用蒸溜水溶解并稀释至100ml。⑵氨基黑10B染色液：称取氨基黑（C22H13O12N6S3Na3）10B,溶于20ml无水乙醇中，加冰醋酸5ml,使其溶解。另取磺基水杨酸，溶于少量的蒸馏水中，加入前液将两液混合摇匀，再以蒸馏水补足至100ml。称取丽春红S及三氯醋酸6克；用蒸馏水溶解，并稀释至100毫升。3．漂洗液。（1）3％（V／V）醋酸溶液：适用于丽春红S染色的漂洗。（2）甲醇45ml、冰醋酸5ml、蒸馏水50ml混匀，适用于氨基黑10B染色的漂洗。4．透亮     液取无水乙醇75毫升和冰醋酸25毫升混匀备用。5．洗脱液（1）0.1mol/LNaOH溶液：用于丽春红S染色的洗脱。（2）0.4mol/LNaOH溶液：用于氨基黑10B染色的洗脱。6．40%(V／V)醋酸溶液。【试验原理】带电荷的蛋白质，在电场中向着与其所带电荷电性相反的电极泳动称为电泳。血清中各种蛋白质的等电点不同，但大都在pH7以下，若将血清置于pH8.6的缓冲液中，则这些蛋白质均带负电，在电场中都向阳极移动。由于各种蛋白质在同一pH环境中所带负电荷多少及分子大小不同，所以在电场中向阳极泳动速度也不同。蛋白质分子小而带电荷多者，泳动速度快；反之，则泳动速度慢。因此可将血清蛋白质依次分为清蛋白、a1-球蛋白、a2-球蛋白、b-球蛋白和g球蛋白五条区带，经染色可计算出各血清蛋白质含量的百分数。以醋酸纤维薄膜（CAM）为支持介质，电泳分别后经染色处理，可呈现出清楚的蛋白质电泳图谱。由于染色时染料与蛋白质的结合与蛋白质的量成正比，因此将各蛋白质带剪下，分别用肯定量的NaOH稀溶液洗脱下来，即可进行比色，测定出各蛋白质区带的相对含量。也可用肯定量的有机溶剂使CAM溶解制成透亮     膜而用光密度计进行扫描定量。醋酸纤维薄膜电泳具有微量、快速、简便及辨别率较高等优点，广泛应用于血清蛋白、血红蛋白、脂蛋白、同工酶的分别和测定。【操作】1、电泳槽的预备将巴比妥－巴比妥钠缓冲液加入电泳槽中（两侧槽内注入等量的缓冲液），调整两侧内的缓冲液，使其在同一水平面，液面与支架的距离约为2～2.5cm。支架宽度到恰好适合CAM的长度，用3～4层滤纸或4层纱布搭桥。2、CAM预备取醋纤薄膜(2厘米*8厘米)在CAM的无光泽面（涂有醋酸纤维素）距一端处用直尺和铅笔轻划一线（与CAM的长轴垂直），作点样标记，将膜条编号后将无光泽面朝下浸入巴比妥－巴比妥钠缓冲液中，待充分浸透后取出（一般约需求20～30min）,夹于洁净的滤纸中,吸去多余的缓冲液.3、点样用血清加样器将3－5ul无溶血的新颖血清均匀地点在划线处，样品应与膜的边缘保持肯定距离，以免电泳图谱中的蛋白区带变形。待血清渗入膜后移开点样器。点样应留意，要适量、均匀和垂直，并避开弄破薄膜。4、平衡将已点样的薄膜加样面朝下，点样端置于阴极端，将膜条紧贴于电泳槽支架的盐桥上并保持平直，桥的另一端垂入缓冲液中，盐桥将膜的两端与缓冲液连通，加上槽盖平衡5min后通电电泳。5、电泳正确联接电泳槽与整流器对应的正负极，点样侧接负极，另一侧接正极。开启电源通电。调整电压10V～15V/cm膜长,电流～膜总宽，电泳40－60分钟（通常夏季需45min,冬季需60min），待电泳区带开放～4cm时即可关闭电源。6、染色通电完毕，马上取出薄膜直接浸入丽春红S或氨基黑10B染色液中，染色5～10分钟。7、漂洗至少预备3～4个漂洗皿，装入漂洗液。从染色液中取出薄膜条并尽量沥去染色液，按挨次投入漂洗液中反复漂洗，直至背景漂白为止。此时清楚可见5条色带。待干。7、定量（1）洗脱比色法取六支试管，分别标明“A、α1、α2、β、γ、空白”。将漂洗净的薄膜剪下各区带放入相应的试管内，另从空白背景剪一块平均大小的膜条置于空白管中，依据染色不同按以下方法洗脱。①氨基黑10B染色洗脱：6支试管于清蛋白管内加入0.4mmol/LNaOH溶液6ml,其余5管各加3ml，振摇数次，置37℃水浴20分钟，使色泽完全浸出。用620nm波长，以空白管调零，读取各管的吸光度，其中清蛋白管吸光度×2。②丽春红S染色洗脱：洗脱液用氢氧化钠溶液，加入量同上。10分钟后，于清蛋白管内加入40％（V／V）醋酸，其余5管各加入，以中和部分氢氧化钠，使溶液色泽加深。如消灭沉淀，可离心取上清液比色。用520nm波长，以空白管调零，读取各管的吸光度，其中清蛋白管吸光度×2。（2）光密度扫描法1）透亮     ：将已漂净吹干的CAM条浸入透亮     液中3～5分钟，取出平铺于洁净干燥玻片上（应无气泡），直立片刻除去过多的透亮     液。于90～100℃烘箱内烘烤5～10分钟，取出冷却至室温。此法透亮     的CAM，各蛋白区带鲜亮，薄膜平整，可直接扫描或作永久保存。若用十萘氢或液体石醋透亮     ，应将漂洗过的薄膜烘干后进行透亮     ，透吸后的薄膜不能久藏，易发生皱折。2）扫描定量：将已透亮     的薄膜放入全自动光密度计或其它光密度扫描的光路，选择波长520nm，描记各蛋白区带峰，并计算各蛋白成分的相对含量。8、计算定量计算时，先计算各光密度值的总和：再计算血清各部分蛋白质所占的百分率吸光度总和（T）＝2A＋α1＋α2＋β＋γ（吸光度）Ax血清各蛋白组分的相对百分数＝---―×100％ATAx表示各球蛋白组分（2A＋α1＋α2＋β＋γ）的吸光度。2AβA％＝――×100％β＝――×100％TTα1γα1％＝――×100％γ％＝――×100％TTα2α2％＝――×100％T各组分蛋白百分数(%)×血清总蛋白g/L各组分蛋白质含量（g/L）＝----------------------------------1009、临床意义（1）血清蛋白醋纤薄膜电泳的正常参考值为：蛋白质组分g/L占总蛋白百分比(%)　　　白蛋白35～～α1球蛋白1.0～～α2球蛋白4.0～～β球蛋白～～γ球蛋白～13.0～（2）临床意义电泳图谱可为临床疾病诊断供应依据。肾病型可见于急慢性肾炎、肾病综合征、肾功能衰竭等，图型表现为Alb降低，α2和β上升；肝硬化型可见于慢性活动性肝炎、肝硬变等，图型表现为Alb降低，β和γ增高，可消灭β与γ难以分别而连接在一起的“β－γ”桥，此现象是由于肝脏纤维增生导致IgA增高所致；急性反应时相型常以α1、α2增高为特征；慢性炎症型则以Alb降低，α2、γ增高较为常见；M蛋白血症主要见于多发性骨髓瘤，病人有大量单克隆蛋白质（主要是IgG或IgA），电泳时可在β和βγ之间消灭一条峰形狭窄的区带，称M区带。【留意事项】通电时，不得接触槽内的缓冲液或CAM，以防触电。每次电泳时应交换电极以使两侧电泳槽内缓冲液的正负离子相互交换，以使缓冲液的PH维持在肯定水平。3．电泳缓冲液的液面要保持肯定的高度，过低可能会消灭γ球蛋白的电渗现象（γ球蛋白向阴极移动），同时电泳槽两侧的液面应保持在同一水平，否则，通过薄膜时有虹吸现象，将会影响蛋白质分子的泳动速度。4．电泳失败或图谱不抱负的常见缘由（1）电泳图谱不整齐或蛋白各组分分不佳：点样过多；点样不均匀、不整齐；薄膜过湿，样品集中；点样速度太慢，薄膜表面局部干燥或薄膜未完全浸透或温度过高致使膜面局部干燥或水分蒸发；缓冲液变质；电泳时薄膜放置不正，歪斜、弯曲，与电流方向不平行；样品不新颖；电流过低；CAM质量不好，薄膜结构过分细密，透水性差，导电差等。（2）染色后白蛋白中间着色浅：染色时间不够或染色液陈旧；白蛋白含量过高，可削减血清用量或延长染色时间。（3）电泳速度慢：电流过低；供应薄膜的缓冲液不足，连接薄膜与缓冲液的滤纸或纱布过薄；温度过低；薄膜结构过分细密，透水性差，导电差；缓冲液水分蒸发，致使离子强度增大。（4）薄膜透亮     不完全：透亮     液陈旧；浸泡时间不足；烘箱温度未到90℃即把薄膜放入。5．染料问题：各种染料对血清各组分有不同的亲和力，大多数染料对白蛋白的亲和力大于球蛋白。如氨基黑10B对球蛋白的结合力为白蛋白的80％，因此常导致白蛋白结果偏高，球蛋白偏低。用丽春红S染色，效果优于氨基黑10B。丽红是一种指示剂，PH＜10时呈红色，PH＞12.5时呈紫色。在酸性溶液中它的最大吸取峰在523nm左右，呈对称性。在血清蛋白正常浓度范围内，丽春红S能与各蛋白质组分成正比例结合，而氨基黑10B则对白蛋白染色过深，区带中简洁消灭着色不全的小点，不够抱负。6．样品要求点在粗糙面（无光泽面），否则样品很难吸入膜内。电泳时最好将点有样品的一面朝下，以防电泳过程中水分蒸发，影响电泳结果。7．标本应新颖，不得溶血。溶血标本会使β球蛋白假性上升，因血红蛋白电泳位置在β球蛋白区域内。思考题1．血清蛋白在醋酸纤维薄膜上可分成5条区带，每条区带是否分别只代表一种蛋白质?2．用什么方法可证明醋酸纤维薄膜有无电渗作用?3．电场强度愈高血清蛋白在醋酸纤维薄膜上的泳动率愈高，是否电场愈高愈好?附注：电泳技术带电粒子在电场中向与自身带相反电荷的电极移动的现象称为电泳(Electrophoresis)，电泳技术是生物化学与分于生物学中的重要争辩方法之一。利用电泳技术可分别很多生物物质，包括氨基酸、多肽、蛋白质、脂类、核苷、核苷酸及核酸等，并可用于分析物质的纯度和分子量的测定等。电泳按介质状想来分，有自由电泳和区带电泳两大类。前者以溶液为介质，在溶液中将蛋白质分别开来。两者相比较，自由电泳过程中集中严峻，辨别率有限，而且设备昂贵，操作繁琐，现在已基本上被区带电泳法所取代。所谓区带电泳法，就是在固体支持物上所进行的电泳。50年月以来，常用的固体支持物有滤纸、醋酸纤维薄膜、淀粉凝胶、琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶等等。区带电泳法辨别率很高，而且设备简洁，操作便利，已经是生物化学及分子生物学领域中极为有用的技术。一、电泳法的基本原理在酸性溶液中，蛋白质分子带正电，而在碱性溶液中，蛋白质分子带负电。伹是这并不是实际的电动单位，从物理化学的原理来分析，带电分子的四周由相反电荷的离子形成集中双电层，它由紧密层和集中层两部分构成。紧密层中相反电荷的离子被束缚在大分子四周，它在电场中是随大分于一起泳动的，而集中层中相反电荷的离子虽然也受到大分子的静电引力，但在电场中却会向另一极移动。紧密层表面相对于溶液本体的电位差称之为电动电位即ζ(Zeta)电位，由它打算了蛋白质分子在电场中的运动速度。蛋白质泳动分子在电场中受到电动力F的驱动，其大小等于净电荷Q和电场强度E的乘积：F=QE假如假设泳动分于为球体，它在电场中泳动时也受到肯定的阻力F’，按Stoke定律，其大小与球体半径r，介质粒度刁以及泳动速度成正比：F’=6πrηv当恒速泳动时，电动力F与阻力F’相等，即QE=6πrηv带电粒子在单位电场强度下的泳动速度，称为迁移率(mobility)或泳动度，以μ表示，即：所以可见，一个带电粒子的迁移率不仅取决于其本身所带的电荷，还与带电粒子的大小、介质的粘度等多种因素有关。在具体试验中，式中：v为粒子的泳动速度(厘米／秒或分)，E为电场强度或电势梯度(伏／厘米)，d为粒子移动距离(厘米)，l为支持物的有效长度(厘米)，u为加在支持物两端的实际电压(伏)，1为通电时间(秒或分)。故迁移率(或泳动度)的单位为厘米2·秒-1·伏特-1。假设物质1和物质2在同一电场中移动距离分别为：经过时间t之后，两物质(带电粒于)移动的距离之差力：这就是说，物质1和2能否分别开来，取决于两者的迁移率。若它们的迁移率相同则不能分别，有差别才能分别，差别越大，分别越好。当然，也与其它试验条件有关。二、影响电泳的因素电泳结果可受到多种因素的影响，但通常认为以下4个方面更为重要。(一)电泳介质的pH当氨基酸为被分别物质时，各种氨基酸有不同的等电点，当介质的pH等于某氨基酸的等电点时，则该氨基酸处于等电状态，即不向正极或负极移动，当介质pH小于等电点时，氨基酸呈阳离子状态、向负极移动，反之当介质pH大于等电点时，氨基酸呈阴离子状态，向正极移动。当20种氨基酸的混合物置于pH5．5左右的介质中电泳时，可以将它们分别为三组。蛋白质由氨基酸组成，也具有两性电离性质，所以介质的pH值也影响蛋白质的电离状况，即打算蛋白质的带电量(Q)。为了保持介质pH的稳定性，常用肯定pH的缓冲液，如分别血清蛋白质常用pH8．6的巴比妥缓冲液或三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液。(二)缓冲液的离子强度离子强度假如过低缓冲液的缓冲容量小，不易维持pH恒定；离子强度过高，则降低蛋白质的带电量(压缩双电层降低Zeta电势)，使电泳速度减慢，所以常用离子强度为0．02—0．2之间。溶液中离子强度的计算方法如下：Ci=离子的摩尔浓度Zi=离子的价数例1，两个单价离子化合物(如NaCl)的离子强度等于它的摩尔浓度，如0．154mol／LNaCI溶液的离子强度例2，两个两介离子化合物(如ZnSO4)的离子强度等于它的摩尔浓度的4倍，如0．1mol／LZnSO4溶液的离子强度由上述例子中可以看出多价离子会使离子强度增高，所以电泳缓冲液常用单价离子的化合物配制。(三)电场强度试验所用电场强度对移动距离起正比作用。电场强度以每一厘米的电势差计算，也称电势梯度。以滤纸电泳为例，滤纸长15厘米，西端电势差为150伏特，则电场强度为10伏特／厘米。电场强度愈高，则带电粒子的移动愈快。伹电压愈高，电流也随之增高，产生的热量也增加。所以在高压电泳(电场强度大于50伏特／厘米)常需加用冷却装置，否则热量可引起蛋白质等物质的变性而不能分别，还因发热引起缓冲液中水分蒸发过多，使支持物(滤纸、薄膜或凝胶等)上离于强度增加，以及引起虹吸现象(电泳缸内液体被吸到支持物上)等，都会影响物质的分别。(四)电渗在电场中，液体对于固体的固定相的相对移动，称为电渗（图2-6）。如滤纸中含有羟基而带负电荷，与纸相接触的水溶液带正电荷，液体便向负极移动。由于电渗现象往往与电泳同时存在，所以带电粒子的移动距离也受电渗影响，如电泳方向与电渗相反，则实际电泳的距离等于电泳距离减去电渗的距离。如方向相同，则实际电泳距离等于电泳距离加上电渗的距离。琼脂中含有琼脂果胶(agaropetin)，其中含有较多的硫酸根，所以在琼脂电泳时电渗现象很明显，很多球蛋白均向负极移动。除去了琼脂果胶后的琼脂糖用作凝胶电泳时，电渗大为减弱。电渗所造成的移动距离可用不带电的有色染料或有色葡聚糖点在支持物的中心，以观看电渗的方向和距离。三、区带电泳的分类区带电泳的形式繁多，分类比较困难，仅按某一特点分类好像都不全面。这里基于支持物的物理性状、装置形式、pH值的连续性等不同，可分为：(一)按支持物的物理性状不同，区带电泳可分为1．滤纸及其他纤维(如醋酸纤维纱、玻璃纤维、聚氯乙烯纤维)薄膜电泳。2．粉末电泳，如纤维素粉、淀粉、玻璃粉电泳。3．凝胶电泳，如琼脂、琼脂糖、硅胶、淀粉胶、聚丙烯酰胺凝胶电泳。4．丝线电泳，如尼龙丝、人造丝电泳。(二)按支持物的装置形式不同，区带电泳可分为1．平板式电泳，支持物水平放置，是最常用的电泳方式。2．垂直板式电泳，板状支持物，在电泳时，按垂直方向进行，聚丙烯酰胺凝胶常做成垂直板式电泳。3．连续液动电泳，首先应用于纸电泳，将滤纸垂直直立，两边各放一电极，溶液自顶端向下流，与电泳方向垂直，以后有用淀粉、纤维素粉、玻璃粉等代替滤纸分别血清蛋白质，分别量较大。4．圆盘电泳(discelectrophoresis)。电泳支持物灌制在两通的玻璃管中，被分别的物质在其中泳动后，区带呈圆盘状。假如用石英玻璃制成内径为25或50um、长50—100cm的管状，则成为目前认为比较先进的毛细管电泳技术，若管中注入聚丙烯酰胺凝胶(特殊技术)，也是区带电泳的一种。它集电泳与分析检测系统于一身。因管细、散热快，电压可达2-3万伏，故具有量微、快速、重复性好、辨别率高及可自动化等优点，但价格很高。(三)按pH的连续性不同，区带电泳可分为1．连续pH电泳，即整个电泳过程中pH保持不变，常用的纸电泳，醋酸纤维薄膜电泳等属于此类。2.非连续pH电泳，缓冲液和电泳支持物间有不同的pH，如聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳分别血清蛋白质时常用这种形式，它的优点易在不同pH区之间形成高的电位梯度区，使蛋白质移动加速压缩为一极狭的区带而达到浓缩的作用。但聚丙烯酰胺凝胶电泳分别核酸则实行连续pH装置。近年来创造的等电聚焦电泳(Electrofocusing)可称为非连续pH电泳，它利用人工合成的两性电解质(商品名ampholin，一类脂肪族多胺基多羧基化合物)在通电后形成肯定的pH梯度。被分别的蛋白质停留在各自的等电点而形成分别的区带，电极两端，一端是酸，另一端是碱。等速电泳Isotachophoresis)也是属于非连续pH电泳，它的原理是将分别物质夹在先行离子和随后离子之间，通电后被分主物质的电泳速度相同，所以叫等速电泳。近年创造的塑料细管等速电泳仪，可以进行毫微克量物质的分别，该仪器接受数千伏的高电压，几分钟内即完成分别，用自动记录仪进行检测，它的消灭是电泳技术的革新。四、电泳技术的应用电泳技术主要用于分别各种有机物(如氨基酸、多肽、蛋白质、酶、脂类、核苷、核苷酸、核酸等)和无机盐。也可用于分析某种物质纯度，还可用于分子量的测定。电泳技术与其他分别技术(如层析法)结合，可用于蛋白质结构的分析，“指纹法”就是电泳法与层析法的结合产物。用免疫原理测试电泳结果。提高了对蛋白质的鉴别力量。电泳与酶学技术结合发觉了同功酶，对于酶的催化和调整功能有了更深化的了解，所以电泳技术是医学科学中的重要争辩技术。下面介绍几个在生化试验工作中常用的电泳技术。(一)纸电泳：是以滤纸为支持物来进行电泳，它常与其它层析方法协作使用，以提高分析效果，纸电泳一般用于物质分别分析、测定等电点、鉴别颗粒电荷的符号和推断样品的纯度等方面。由于纸电泳具有设备简洁，化费少以及操作便利等优点，所以目前仍为试验室常用电泳技术之一。然而，纸电泳所用滤纸有较大的吸附力和电渗作用，使样品颗粒泳动易受影响，所以不适用于进行测定迁移率。(二)醋酸纤维素膜电泳。醋酸纤维素是Kohn(1975)首先用于区带电泳，它是由高纯度的醋酸纤维素制成的一种细密而又薄的微孔膜。醋酸纤维素膜电泳的原理基本上和纸电泳原理相同，但由于作为支持物的醋酸纤维素膜对样品的吸附性较滤纸小得多，因此，少量的样品，甚至大分子物质都能得以较高的辨别率。又由于醋酸纤维素亲水性较小，故而电渗作用较纸小，并且它所容纳的缓冲液也较少，因此电泳的大部分由样品传导，可以加速样品分别，大大节省电泳时间。虽然醋酸纤维素膜电泳的辨别力量比聚丙烯酰胺凝胶电泳和淀粉胶电泳等要低，但它具有简洁、快速、定量简洁等优点，尤其较纸电泳辨别力强、区带清楚、灵敏度高和便于保存、照相等，所以醋酸纤维素膜电泳已取代纸电泳而被广泛应用于科学试验、生化产品分析和临床化验，如血清蛋白、血红蛋白、脂蛋白’、同工酶