mircoRNA

155 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 达量、CD4+T细胞水平与幼儿湿疹的相关性分析

付雪梅 刘秀玲 刘怀奇

[Summary]目的：探討外周血中mircoRNA-155表达量、CD4+ T细胞水平与幼儿湿疹的关系。方法：选取2016年1月-2016年12月笔者科室诊治的120例湿疹患儿作为病例组，另选取同期60例健康幼儿作为对照组，对比两组外周血中mircoRNA-155表达量、CD4+ T细胞、嗜酸性粒细胞、血清免疫球蛋白E（IgE）水平，并探讨其关系。结果：病例组患儿的嗜酸性粒细胞、血清IgE、Treg、Th2及Th17水平均显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。慢性期、亚急性期、急性期患儿的嗜酸性粒细胞、血清IgE、Treg、Th2及Th17水平呈现逐渐升高的趋势，差异有统计学意义（P<0.05）。湿疹患儿Treg、Th2、Th17水平与嗜酸性粒细胞、IgE水平呈显著性正相关，差异有统计学意义（P

[Key]mircoRNA-155；CD4+ T细胞；湿疹；幼儿；免疫球蛋白E

[]R758.23 [文献标志码]A []1008-6455（2018）09-0122-04

Analysis of Correlation between MircoRNA-155 Expression， CD4+ T Cell Level and Eczema in Children

FU Xue-mei1，LIU Xiu-ling2，LIU Huai-qi3

（1.Department of Dermatology，Zaozhuang Institute of Dermatology and Venereal Disease Prevention and Control，Zaozhuang 277599，Shandong，China；2.Department of Dermatology，Rizhao Skin Hospital，Rizhao 276800，Shandong，China；3.Department of Medicine，Zaozhuang Prison，Zaozhuang 277599，Shandong，China）

Abstract： Objective To investigate the relationship between the expression of mircoRNA-155， CD4+ T cells and childhood eczema in peripheral blood. Methods 120 cases of eczema treated by the author's department from January 2016 to December 2016 were selected as the case group. Another 60 healthy children were selected as the control group. The levels of mircoRNA-155， CD4+ T cells， eosinophils， and serum immunoglobulin E （IgE） levels in the peripheral blood of the two groups were compared， and the relationship was explored. Results The levels of eosinophil、serum IgE、Treg， Th2 and Th17 in the case group were significantly higher than those in the control group， the differences were statistically significant（P<0.05）. The level of Th1/Th2 in case group was significantly lower than that in the control group（P<0.05）. The levels of eosinophils、serum IgE、Treg， Th2 and Th17 in children with chronic， subacute and acute diseases were gradually increasing（P<0.05）. In chronic phase， subacute stage and acute stage， Th1/Th2 tended to decrease gradually. The levels of Treg， Th2 and Th17 in children with eczema were significantly positively correlated with eosinophils and IgE levels（P<0.05）. There was a significant negative correlation between Th1/Th2 level and eosinophils and IgE levels in children with eczema（P<0.05）. Conclusion The imbalance of Th1/2 cells in the peripheral blood of eczema infants was associated with the changes in children's condition， and the expression of mircoRNA-155 was not significantly changed.

Key words： mircoRNA-155； CD4+ T cells； eczema； children； immunoglobulin E（IgE）

儿童湿疹的持续发展，可导致患儿皮肤黏膜的持续性损伤，并增加远期皮肤交界性恶性病变的发生。流行病学研究显示，现阶段临床上儿童湿疹的发病率可达233～344/10万人，特别是在合并有家族性遗传性皮肤黏膜病变的患儿中，其发病率更高[1-2]。在探讨影响儿童湿疹发病机制的过程中，可以发现的是细胞生物学相关因子或者免疫因素的改善，可能是促进儿童湿疹病情进展的核心因素。mircoRNA-155是非编码RNA，其可以诱导免疫性复合物的沉积，增加免疫功能亢进表现，促进免疫损伤的发生，进而促进皮肤黏膜的持续性损伤；CD4+ T细胞或者其不同细胞亚群的改变，可以通过加剧局部Th1/Th2免疫平衡的紊乱，促进自然杀伤性T淋巴细胞或者下游免疫因素及细胞炎症因子的浸润，加剧真皮层组织的损伤，促进病情进展[3-5]。为了进一步揭示mircoRNA-155表达量、CD4+ T细胞水平与儿童湿疹的相关性，本次研究选取笔者科室诊治的120例湿疹患儿作为病例组，探讨了不同指标的异常表达及其与患者病情的關系，现报道如下。

1 资料和方法

1.1 一般资料：选取笔者科室2016年1月-2016年12月诊治的120例湿疹患儿作为病例组，另选取同期60例健康幼儿作为对照组。病例组：男64例，女56例；月龄1～18个月，平均（8.3±5.6）个月；其中具有过敏家族史77例，病程1～9个月，平均（3.9±2.0）个月；其中急性期62例，亚急性期40例，慢性期18例。对照组：男35例，女25例；月龄1～18个月，平均（9.0±5.1）个月。两组患儿的年龄、性别比较，差异无统计学意义（P>0.05）。

1.2 纳入及排除 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载

1.2.1 纳入标准：①幼儿湿疹的诊断标准参考诸福棠《实用儿科学》中的诊断标准；②皮损面积<皮肤面积的30%；③月龄≤18个月；④对照组来源于笔者医院儿保科的健康幼儿。

1.2.2 排除标准：①合并先心病、感染性疾病（细菌、病毒、真菌感染）者；②1个月内使用过免疫调节剂、糖皮质素类药物、微生态制剂（双歧杆菌三联活菌胶囊、活性乳酸菌等）者。

1.3 观察指标：采集患者静脉血2ml，按照10 000r/min的离心速度进行离心分离血清，每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的氯仿，加0.2ml氯仿，剧烈摇动30s，室温3min，12 000×g，4℃离心15min得到RNA。加等体积异丙醇，-20℃，30min，弃上清，加75%乙醇1ml，振荡，20μl DEPC水，室温放置5min使其完全溶解。加入逆转录酶5μl，室温下放置20min后植入37℃水浴锅中孵育30min，在底物中加入上游引物0.5μM、下游引物0.5μM，RT-PCR反应混合液5μl，dNTP稀释至20μl，反应条件：95℃ 3min、95℃ 15s、90℃ 5s，一共40个循环，产物扩增长度为134bp。

清晨采集空腹静脉血，按照10 000r/min的离心速度进行离心分离，加入5ml抗凝剂，加入淋巴细胞分离液，按照密度梯度离心法分离淋巴细胞，ARMI 1640溶液洗涤3次。采用流式细胞仪双标法进行CD40+淋巴细胞的检测。相关标记操作于5ml抗凝管中进行，100UL全血与CD4+ FITC抗体室温反应25min，采用红细胞裂解液optiLYse C 溶血素溶解红细胞，PBS液体洗涤3遍，每次5min，生理盐水重新悬浮细胞，上机检测。（FACS calibur流式细胞仪购自美国BD公司，流式细胞抗体购自罗氏检测公司）。

1.4 病情判断标准：湿疹患儿的病情判断标准：急性期：幼儿皮肤红斑、水肿基础上出现粟粒样大丘疹、丘疱疹、水疱、糜烂记渗出，病变中心较重且向周围蔓延，周围存在散在的丘疹、丘疱疹，境界不清；亚急性期：表现为红肿、渗出减轻，可见糜烂面结痂、脱屑；慢性期：表现为皮损部位出现粗糙肥厚、苔藓样改变、可伴有色素改变、手足部位湿疹可伴有甲改变。

1.5 统计学分析：统计软件采用SPSS 16.0，采用均数±标准差（x?±s）进行统计描述，两组间比较采用t检验；多组间比较采用单因素方差分析法，组间两两比较采用LSD-t检验；相关性分析采用Pearson线性相关分析法。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组幼儿的mircoRNA-155表达量、嗜酸性粒细胞及血清IgE水平比较：病例组患儿的嗜酸性粒细胞、血清IgE水平显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；病例组mircoRNA-155表达量与对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

2.2 两组幼儿的CD4+ T细胞水平比较：病例组患儿的Treg、Th2、Th17水平显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；病例组患儿的Th1/Th2水平显著低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；但病例组Th1与对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表2。

2.3 不同疾病分期湿疹患儿的mircoRNA-155表达量、嗜酸性粒细胞、血清IgE水平比较：慢性期、亚急性期、急性期患儿的嗜酸性粒细胞、血清IgE水平呈现逐渐升高的趋势，差异有统计学意义（P<0.05）；三组间mircoRNA-155表达量比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表3。

2.4 不同疾病分期湿疹患儿的CD4+ T细胞水平比较：慢性期、亚急性期、急性期患儿的Treg、Th2、Th17水平呈现逐渐升高的趋势，差异有统计学意义（P<0.05）；慢性期、亚急性期、急性期患儿Th1/Th2呈现逐渐降低的趋势，差异有统计学意义（P<0.05）。见表4。

2.5 湿疹患儿的CD4+ T细胞、mircoRNA-155表达水平与嗜酸性粒细胞、IgE水平的关系：湿疹患儿Treg、Th2、Th17水平与嗜酸性粒细胞、IgE水平呈显著性正相关，差异有统计学意义（P<0.05）。见表5。

3 讨论

儿童湿疹的发生，主要考虑与长期的自身免疫性损伤或者炎症损伤等有关，特别是在外界环境因素诱导或者长期的基础性体液免疫或者细胞免疫功能紊乱的人群中，儿童湿疹的发生率或者近期不良临床预后的发生率等均明显恶化[6-7]。但一项汇集了178例样本量的临床回顾性分析研究显示，现阶段临床上儿童湿疹的总体治疗效果较差[8]，治疗后的患儿的临床病情缓解率或者免疫指标的改善效果等，均难以到达临床有效的评估标准[9]。而对于儿童湿疹发病过程中不同免疫机制的研究，可以为后续临床I期或者Ⅱ期临床实验提供参考，并为揭示疾病的发病机理提供依据。

非编码RNA的异常表达不仅能够影响到恶性肿瘤的发生，同时在自身免疫性疾病或者皮肤性疾病的病情进展过程中同样发挥了重要的调控作用。mircoRNA-155能够影响到不同的生物学炎症因子如IL-6或者IL-10等的激活，炎症因子的富集或者交错式的组织浸润等方面发挥作用，促进真皮层下的柱状上皮细胞的凋亡，加剧正常细胞的分解，加剧新生血管的形成及排列紊乱；Treg、Th2、Th17均是临床上较为常见的CD4+ T细胞，其浓度的异常表达可以在促进自然杀伤性T淋巴细胞的细胞毒性作用，加剧細胞免疫复合物的沉积，促进真皮下血管的通透性的改善，增加了皮疹红肿症状。已有的部分研究揭示了CD4+ T细胞的异常表达，认为高表达的CD4+ T细胞促进了湿疹的发生，但缺乏对于其在慢性期、亚急性期、急性期等不同病情患者体内的异常表达的研究，此为本次研究的创新性所在。

本次研究并未发现mircoRNA-155表达量在病例组及正常对照人群中的表达差异，提示mircoRNA-155的表达并不会影响到患儿湿疹的发生，这与既往的相关文献结论存在一定的差别，这主要考虑可能与mircoRNA-155的表达不能影响到真皮层组织细胞的氧化应激损伤或者基底膜细胞的完整性的修复等过程中有关。但细胞免疫相关指标存在明显的高表达，嗜酸性粒细胞、血清IgE的表达浓度明显高于正常对照人群，提示湿疹患儿体内仍然存在一定的过敏体质，相关过敏原或者过敏因素介导的免疫因子的激活，均可以促进嗜酸性粒细胞、血清IgE的合成或者释放，加剧体内迟发性或者急性的过敏应激反应[10-11]。Treg、Th2、Th17是反应患者CD4+ T细胞激活程度的重要指标，本次研究中Treg、Th2、Th17等均呈现出了高表达，从机制上考虑不同的CD4+ T细胞亚群的高表达，可以在影响到下列几个方面的途径，进而促进湿疹患者的病情进展[12-13]：①Treg的表达浓度的改变，影响到了调节性T细胞的浓度，加剧了细胞免疫的抗原提呈效应，促进了T淋巴细胞依赖的细胞毒性作用；②Th2、Th17等的异常表达，能够促进下游IL-2或者IL-17等炎症因子的高度富集，促进单核细胞或者巨噬细胞等对于皮下新生血管的形成障碍、新生血管的螺旋障碍或者血管局部走形或者隆起等异常的发生。Eyerich K等[14]研究了小样本量的急性湿疹的临床血清学检验指标后发现，Th2、Th17或者其分泌的细胞因子等的表达浓度可平均上升25%～55%，同时患者的发病越急、治疗敏感性越差或者治疗预后越不佳，患者体内的Th2、Th17等指标的上升幅度越高。在不同的病情中，可以发现慢性期、亚急性期、急性期患儿Th1/Th2呈现出了逐渐下降的趋势，而Th2、Th17等的浓度逐渐上升，一方面提示了T淋巴细胞免疫因子与湿疹患者的病情关系，同时也为临床上湿疹患者的临床预后评估提供潜在的参考指标[15]。最后，本次研究发现嗜酸性粒细胞、IgE水平等指标与患者的细胞免疫的关系较为密切，进一步提示了CD4+ T细胞水平与儿童湿疹的相关性。

综上所述，湿疹小儿外周血中CD4细胞亚群失衡与湿疹有密切的相关性，mircoRNA-155表达变化不明显。后续临床研究应该增加对于T淋巴细胞在不同治疗预后转归患儿中的临床随访价值分析。

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