二、血红蛋白测定（Hb，HGB）血红蛋白是在人体有核红细胞及网织红细胞内合成的一种含色素辅基的结合蛋白质，是红细胞内的运输蛋白。每个Hb分子含有4条珠蛋白肽链，每条肽链结合1个亚铁血红素，形成具有四级空间结构的四聚体，以利于结合O2和CO2。（一）检测原理HiCN法：血红蛋白（SHb除外）中的亚铁离子（Fe2+）被高铁氰化钾氧化为高铁离子（Fe3+），血红蛋白转化成高铁血红蛋白（Hi）。Hi与氰化钾（KCN）中的氰离子反应生成HiCN。HiCN最大吸收波峰为540nm，波谷为504nm。在特定条件下，HiCN毫摩尔消光系数为44L/（mmol•cm）。HiCN在540nm处的吸光度与浓度成正比，根据测得吸光度可求得血红蛋白浓度。十二烷基硫酸钠血红蛋白（SDS-Hb）法：SDS作为一种阴离子
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面活性剂，具有轻度氧化作用。血液中除SHb以外的所有血红蛋白均可与低浓度的SDS作用，亚铁血红素被氧化成稳定的棕红色高铁血红素样复合物（SDS-Hb），最大吸收峰在538nm。（二）操作步骤1、氰化高铁血红蛋白测定法（直接定量测定法）ü准备转化液：取一试管，加入5mlHiCN转化液。ü采血与转化：采集全血20μl，加到盛有转化液的试管底部，与转化液充分混匀，静置5min。ü测定吸光度：用符合WHO标准的分光光度计，在波长540nm处、光径为1.000cm、以HiCN试剂调零，测定标本的吸光度（A）。ü计算：7.3672514400064458)/(AALgHb2．十二烷基硫酸钠血红蛋白测定法ü制备标准曲线：取4份不同浓度抗凝血分别用HiCN法及本法测定每份血液的血红蛋白浓度和吸光度，以HiCN法测得的血红蛋白浓度为横坐标，本法测得的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。ü测定：取应用液5ml于试管中，加入全血20μl充分混匀。5min后置538nm下以应用液调零，测定其吸光度，查标准曲线即可得出血红蛋白浓度。（三）方法学评价HiCN测定法是WHO和国际血液学标准化委员会ICSH推荐的参考方法，由于HiCN试剂含有剧毒的氰化钾，各国均相继研发出不含氰化钾的血红蛋白测定方法，有的测定法已用于血液分析仪，但其标准应溯源到HiCN量值。血红蛋白测定的方法学评价HiCN转化液的作用与评价（四）质量保证（五）参考区间成年：男性120～160g/L，女性110～150g/L。新生儿：170～200g/L。（六）临床意义与红细胞计数相似，但判断贫血程度优于红细胞计数。根据Hb浓度可将贫血分为4度：轻度贫血：Hb＜120g/L（女性Hb＜110g/L）；中度贫血：Hb＜90g/L；重度贫血：Hb＜60g/L；极重度贫血：Hb＜30g/L。当RBC＜1.5×1012/L，Hb＜45g/L时，应考虑输血。在某些贫血时，特别是某些红细胞内血红蛋白浓度改变的贫血，红细胞和血红蛋白减少程度可不一致。如缺铁性贫血，红细胞与血红蛋白降低的程度常不平行，血红蛋白的降低比红细胞明显。因此，同时测定红细胞和血红蛋白，对诊断更有意义。
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