动物实验常用操作技术

动物实验常用操作技术郭芬芬中山大学实验动物中心动物实验系列 培训 焊锡培训资料ppt免费下载焊接培训教程 ppt 下载特设培训下载班长管理培训下载培训时间表下载 之四主要内容一、常用实验动物的保定、标记二、实验动物的常规给药途径三、实验动物的一般采血方法四、实验动物的常用麻醉和处死方法一、实验动物的抓取、保定•大小鼠的抓取、保定：将动物放置在鼠笼盖表面，一手向后牵拉鼠尾，用另一手拇指和食指抓紧动物颈背部的皮肤，将其提起翻转，用尾指或无名指固定尾巴。先用一只手抓取鼠尾提起，置于笼盖或实验台向后牵拉将鼠体置于手心中，把后肢拉直。可用无名指固定按住鼠尾先用一只手抓取大鼠尾提起，置于笼盖或实验台向后牵拉在鼠有向前运动趋势时，用另一手的拇指和食指抓住大鼠的两耳和颈部皮肤，提起、翻转如大鼠体积过大,可由第二个人协同固定后肢•豚鼠的抓取和保定：先用一只手掌迅速扣住鼠背，抓住其肩胛上方，以拇指和食指环握颈部，中指和无名指轻轻扣住胸廓或像抓取大鼠一样抓住双耳和颈背部皮肤；另一只手托住臀部。注意：豚鼠较为胆小易惊，不宜强烈刺激和受惊，所以在抓取时，必须稳、准和迅速；也不能单纯抓取背腹部。•兔的抓取和保定：一手抓取兔颈背部的皮肤，轻轻提起兔子，迅速用另一手掌托住其臀部，然后用兔固定器保定。先用一只手掌迅速扣住鼠背抓住其肩胛上方，以拇指和食指环握颈部，中指和无名指轻轻扣住胸廓或像抓取大鼠一样抓住双耳和颈背部皮肤用另一只手托住臀部按住兔子的双耳和颈背部一只手抓住兔子双耳和颈背部的毛皮提起•一手抓取兔两耳及颈背皮肤，提起•另一手托住臀部将兔子放入盒式固定器内；露出头部•犬的抓取和保定：可先抓取犬前肢，将犬拉至犬笼出口附近，用双手抓住犬腋下前腿或双手环抱腹部的方法，将犬固定于犬固定器中即可将犬保定•猴的抓取和保定：捉取时应先握紧肘部以上的前臂，并把臂部反扭到背后，同时使其双腿伸直即可将其保定，对于体型较大的猴，捉取前可将猴麻醉然后再捉取。当猴位于猴笼中时可使用笼具中的夹层将猴固定。大小鼠常用标识方法•短期标记法：采用油性笔在动物尾部划线或写阿拉伯数字标号法适用于动物的临时标记•化学染色法：常用染料：3-5%苦味酸、0.5%中性品红、2%的硝酸银溶液根据实验动物数量采用单色或双色染料涂染动物体表不同部位的皮毛，以作标记。单色涂染法：动物数量在29以内，用一种化学染料（苦味酸）涂染动物不同部位的皮毛双色涂染法：动物数量超过29，需要编10～99号时采用此法，用两种不同颜色的染料涂染标识，即A化学染料标识个位数，B化学染料以标识十位数其他动物的标识法•豚鼠和兔：采用油性笔耳廓内侧标记法，即在豚鼠、兔耳部用油性笔写阿拉伯数字进行标识化学染色法，与大小鼠染色法相同•猴、犬：采取笼编号或组编号+动物号（或耳号、项圈号）相结合三、实验动物常规给药途径•大、小鼠和豚鼠的灌胃•大、小鼠尾静脉注射•大、小鼠腹腔注射•兔子耳缘静脉注射大、小鼠和豚鼠的灌胃•将专用的动物灌胃针接在注射器上，吸入相应的待灌药液；•一只手抓住鼠背部及颈部皮肤将动物抓取提起，保持体位为头高尾低（头高位）；•另一只手持注射器，将灌胃针从动物嘴部侧面插入口中；•然后轻轻摆正灌胃针并沿口腔顶壁和咽后壁徐徐插入食道；针插入时应无阻力。若感到阻力或动物挣扎时，应立即停止进针或将针拔出，以免损伤或穿破食道以及误入气管。•一般将灌胃针插入小鼠3－4cm，大鼠或豚鼠4-6cm•常用灌胃量：小鼠0.2-1ml，大鼠1-4ml，豚鼠为1-5ml。•常用灌胃针：大鼠16号或18号，小鼠9号或12号大小鼠灌胃针一只手持注射器，将灌胃针插入动物口中，沿口腔顶壁和咽后壁徐徐插入食道。大鼠、豚鼠和小鼠一样的操作手法大、小鼠尾静脉注射•先将动物固定在固定器中，使尾巴露出；•用45～50℃的温水浸润尾部半分钟或用酒精擦拭使血管扩张和使表皮角质软化；•用食指和中指从下面托起尾巴，以无名指和小指夹住尾巴的末梢，大拇指再轻轻按住尾部；•右手持注射器，使针头与静脉平行（小于30度角），从尾下四分之一处（约距尾尖2-3厘米）进针；•见有血液回流到针头，先缓注少量药液，如无阻力，表示针头已进入静脉，可继续注入；•注射完毕后把尾部向注射侧弯曲以止血或以消毒棉签(棉球)止血。大小鼠固定器用一只手的食指和中指从下面托起尾巴，以无名指和小指夹住尾巴的末梢，大拇指再轻轻按住尾部。另一只手持注射器，使针头与静脉平行（小于30度角），从尾下四分之一（约距尾尖2-3厘米）处进针。大鼠和小鼠一样的操作手法针头进入血管后，可见回血大、小鼠腹腔注射•以一只手抓取和固定动物，使腹部向上，以及使鼠头稍朝下大约15度角（头低位）；•另一只手拿消毒酒精棉球（签）进行进针部位消毒；•接着将注射器针头于左（或右）小腹部刺入皮下；定住针头，缓缓注入药液；•若大鼠体积过大，可由两人协同进行腹腔注射。一只手抓取和固定动物，使腹部向上，并使鼠头稍朝下大约15度角（头低位）。另一只手将注射器针头于左（或右）小腹部刺入皮下。大鼠和小鼠一样的操作手法兔子耳缘静脉注射•将兔子保定于固定盒内，露出头部和双耳；•先拔去注射部位的被毛；•用手指弹动或轻揉兔耳，使静脉充盈；•用消毒酒精消毒注射部位；•一只手食指和中指托住注射部位的耳缘，大拇指顺势按在耳上面固定住兔耳；•另一只手持6号针头（连注射器）尽量从静脉的远端刺入；•当针头有回流血时，移动拇指于针头上以固定针头；•将药液以均匀的速度注入；•注射完毕，拔出针头；•用消毒棉球（棉签）压迫针眼片刻。用固定器保定兔子用手指弹动或轻揉兔耳，使静脉充盈；用消毒酒精消毒注射部位。左手固定兔耳，右手持针（连注射器）尽量从静脉的远端刺入操作完毕，用消毒棉球（棉签）压迫针眼片刻止血兔耳部血管分布清晰，耳中央为动脉，耳外缘为静脉。内缘静脉深不易固定，故不用；外缘静脉表浅易固定，常用。实验动物的一般采血方法采血方法的选择，主要决定于实验的目的所需血量以及动物种类1.剪尾取血法2.眼球后静脉丛取血法3.眼眶取血法4.心脏取血法5.断头取血法6.颈动静脉、股动静脉取血法剪尾取血法：将动物装入固定器中，露出尾巴，用酒精涂擦或用温水浸泡使血管扩张，剪断尾尖后，尾静脉血即可流出，用手轻轻地从尾根部向尾尖挤捏，可取到一定量的血液。取血后，用棉球压迫止血。也可采用交替切割尾静脉方法取血。用一锋利刀片在尾尖部切破一段尾静脉，静脉血即可流出，每次可取0.3～0.5ml，供一般血常规实验。眼球后静脉丛取血法：左手持鼠，拇指与中指抓住颈部皮肤，食指按压头部向下，阻滞静脉回流，使眼球后静脉丛充血，眼球外突。右手持抗凝剂处理过的毛细采血管，从眼眶内角刺入，沿内下眼眶壁，向眼球后推进4～5mm，旋转采血管，血液自行流出。眼眶取血法：（又名摘眼球取血法）左手持鼠，拇指与食指捏紧头颈部皮肤，使鼠眼球突出，右手持弯镊或止血钳，钳夹一侧眼球部，将眼球摘出，鼠倒置，头部向下，此时眼眶血液流出，直至流血停止。此法由于取血过程中动物未死，心脏不断跳动，一般可取鼠体重4％～5％的血液量，是一种较好的取血方法，但只适用一次性取血。心脏取血法：将动物麻醉，仰卧固定于鼠板上，用剪刀将心前区毛剪去，用碘酒、酒精消毒此处皮肤，在左侧第3～4肋间用左手食指摸到心搏，右手持连有4～5号针头的注射器，选择心搏最强处穿刺，当针头正确刺入心脏时，鼠血由于心脏跳动的力量，血自然进入注射器。断头取血法：实验者带上棉手套，用左手抓紧鼠颈部位，右手持剪刀，从鼠颈部剪掉鼠头迅速将鼠颈端向下，用装血器皿收集从颈部流出的血液，小鼠可取血0.8～1.2ml，大鼠可取血5～10ml颈动静脉、股动静脉取血：将动物麻醉仰卧固定，一侧颈部或腹股沟部去毛，切开皮肤，分离出静脉或动脉，注射针沿动静脉走向刺入血管抽取血液。20g小鼠可抽血0.6ml，300g大鼠可抽血8ml。也可把颈静脉或颈动脉用镊子挑起剪断，用试管取血或注射器抽血，股静脉连续多次取血时，穿刺部位应尽量靠近股静脉远心端。四、实验动物的麻醉常用的麻醉剂1．挥发性麻醉剂--乙醚、氯仿优点：麻醉量和致死量差距大，安全度亦大，麻后苏醒较快。缺点：麻醉过程需人照看、易出现窒息、麻醉过深致死2．非挥发性麻醉剂--苯巴比妥钠、戊巴比妥钠、硫喷妥钠，氨基甲酸乙脂、水合氯醛优点：使用方便，维持较长的麻醉时间，麻醉过程较平衡，缺点：苏醒较慢。3．中药麻醉剂--洋金花、氢溴酸东莨菪碱缺点：作用不够稳定，常需加佐剂，故不能得到普及理想的麻醉药应具备下列三个条件：①麻醉完善，实验过程中动物无挣扎或鸣叫现象，麻醉时间能满足实验要求；②对动物的毒性及所观察的指标影响最小；③使用方便。麻醉药需根据动物的种类和不同实验手术的要求选择，麻醉必须适度，过浅或过深都会影响手术或实验的进程和结果。麻醉动物注意事项：1.动物对麻醉药的耐受性是有个体差异的。因此在麻醉过程中，除参照一般药物用量 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 外，还必须密切注意动物的状态，以决定麻醉药的用量。2.麻醉的深浅可根据呼吸的深度和快慢、角膜反射的灵敏度、有无四肢和腹壁肌肉的紧张性以及皮肤夹捏反应等进行判断。3.静脉注药时应坚持先快后慢的原则，避免动物因麻醉过深而死亡。麻醉过深时，最易观察到的是呼吸减慢甚至停止，但仍有心跳。此时可用手有节奏地压迫和放松胸廓或按压心前区进行人工急救。常用的苏醒剂有咖啡因(1mg/kg)、尼可刹米(2～5mg/kg)和洛贝林(0.3～1mg/kg)等、强心剂有肾上腺素。4.实验过程中如麻醉过浅，可临时补充麻醉药，但一次补充剂量不宜超过总量的1/5。5.麻醉状态下注意保持动物呼吸道通畅，可适当牵拉舌头，并注意保温。实验动物常用处死方法1.颈椎脱臼处死法：一只手先将动物头部固定，然后另一只手将动物尾部固定，将动物尾部提起快速向头部反方向拖拉至动物颈椎与头部分离。常用于小鼠、大鼠的处死2.腹主动脉抽血处死法：将动物麻醉，用剪刀或手术刀切开腹部皮肤，暴露腹主动脉，用注射器将动物血液大部分采尽致动物死亡。常用于小鼠、大鼠的处死3.股动脉放血处死法：将动物麻醉，除去大腿内侧至腹股沟的毛，沿股动脉垂直方向切断或剪断股动脉（或沿动脉方向剪开皮肤，钝性分离并暴露股动脉行插管术），使动物快速大量失血而死亡。常用于大鼠、兔的处死。4.颈总动脉放血处死法：将动物麻醉，用手术刀直接切开或剪刀剪开颈部皮肤肌肉和动脉（或用手术刀切开或用剪刀剪开颈部皮肤，钝性分离出颈总动脉行插管术），致动物失血直至死亡。5.空气栓塞处死法:根据动物大小及所要进行注射的静脉粗细选取注射器及注射针头,往动物静脉注射一定体积的空气，使动物死亡。6.大剂量麻醉处死法:对动物注射或给予麻醉气体约相当于常规麻醉剂量的3倍以上，使动物过度麻醉致死。7.二氧化碳吸入处死法:将动物放入密闭容器，把固体二氧化碳放入容器或向容器内通入过量二氧化碳将动物处死。谢谢!