土壤线虫卵检查方法江西省寄生虫病防治研究所漂浮法原理先用碱性溶液和已经处理过的土壤样品充分混合，用比重比虫卵重的溶液把虫卵漂浮到液体表面，从而收集进行镜检。几种漂浮液和蠕虫卵比重饱和硝酸钠溶液1.358-1.365饱和硫酸锌溶液1.180饱和盐水1.175-1.200华支睾吸虫卵1.170-1.190姜片吸虫卵1.190日本血吸虫卵1.200钩虫卵1.055-1.080鞭虫卵1.150蛲虫卵1.105-1.115受精蛔虫卵1.110-1.130未受精蛔虫卵1.210-1.230采样与处理1、菜田取从土表及表层以下2cm处泥土；2、厕所、庭院、厨房取表层土；（无土层或土量不够，以鞋底刮取的土样替代）3、每份粪样50-100g；4、土样取回后自然晾干；5、晾干土样挑去粗大杂物，压碎土样大颗粒；6、收集孔径3mm粗筛后2mm过筛土样。方法1、取土样5g于15ml离心管，加5%NaOH溶液至10-14ml刻度；2、颠倒充分混匀（重复3~4次，每隔10min），2000rpm，4min；3、倾去上部的NaOH，加入饱和NaNO3搅拌混匀，2000rpm，4min；4、离心后，再加饱和NaNO3满至管口，覆上18mm×18mm盖玻片；5、静置15min后，取下盖玻片置载玻片上镜检（每样做两管，取平均值为计数结果）；6、一份样品计数3~4张盖玻片。土壤线虫卵生活力测定法在土壤线虫卵生活力测定法中，可选用直接镜检法，染色法和培养法，以直接镜检为常用。土壤蛔虫卵直接镜检法：是根据蛔虫卵在发育过程中所出现的各种形态，以鉴别其死活。①鉴别受精卵和未受精卵；②鉴别有生活力和失去生活力(变性卵)的受精卵和含有幼虫卵的形态。土壤蛔虫卵生活力鉴别要点未受精蛔虫卵形态多为长椭圆形，有时呈不
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形，大小平均为80～98×40～60µm，一般为黄褐色，有时蛋白质壳发育不全，有时完全失去蛋白质壳，卵内经常充满大大小小油滴状的卵黄细胞。未脱蛋白膜和脱蛋白膜未受精蛔虫卵受精蛔虫卵形态活受精蛔虫卵蛋白质壳为黄褐色，脱蛋白质壳的为无色透明；平均大小为50～70×40～50µm；外层卵壳厚，内层薄，有屈光性，最外层蛋白质壳也很厚，呈乳状或花纹状突起；卵内有一个球形的卵细胞，卵壳两端和卵细胞之间，有半月形空隙，卵内卵黄颗粒清晰而致密。含有活幼虫卵虫体的前后部没有颗粒，中部颗粒清晰而有金属光泽，有立体感，镜检时，注视或轻压，可见有轻微蠕动，强压后，有时可挤出幼虫。活受精蛔虫卵形态未脱蛋白膜脱蛋白膜含4个卵细胞（脱蛋白膜）桑椹期（脱蛋白膜）含幼虫的活受精蛔虫卵死受精蛔虫卵(变性卵)卵细胞移向一端，使卵壳两端呈现有大小不等的半月形空隙；卵内脂肪变性，形成空泡，很像未受精卵；卵细胞质浑浊，呈黑色或棕黑色；卵细胞向不定部位呈球状收缩；卵壳的一侧或两侧，一端或两端向内凹陷或破裂；卵细胞颗粒减少或消失;只有蛋白质壳，而缺
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物。含死幼虫虫卵幼虫体内几乎充满颗粒，且模糊不清，无金属光泽，缺乏立体感，镜检时久久不见蠕动，稍稍加热或轻压，不会蠕动；强压时，虽能挤出幼虫，但也不改变其原来的卷曲状态。死受精蛔虫卵形态未脱蛋白膜脂肪变性胞质空泡脱蛋白膜含幼虫死卵卵细胞崩解卵细胞皱缩上部形成空泡卵细胞不规则裂开卵胚变形卵壳内幼虫变形活受精蛔虫卵卵细胞崩解的死受精蛔虫卵空泡化死受精蛔虫卵含幼虫的活受精蛔虫卵含幼虫的的活受精蛔虫卵卵壳内幼虫变形的死受精蛔虫卵**可编辑内含物变形死受精蛔虫卵活鞭虫卵含幼虫的活鞭虫卵鞭虫卵（细胞质形成空泡）螨卵螨卵美蓝、伊红、硼砂染色法鉴别蛔虫卵死活1、美蓝、伊红、硼砂染液（简称M.E.B）的配制将0.2g美蓝加入100ml蒸馏水中煮沸10min，加入硼砂0.5g，再煮沸10min，冷却后加入伊红0.1g，待完全溶解后过滤备用。（pH为10~11，在室温中可放置1.5年）。2、脱蛋白膜将收集的蛔虫卵加入30%次氯酸钠，作用1min，并经常振荡，再用蒸馏水洗2次，即可脱掉蛋白膜。3、染色镜检①虫卵沉淀物加M.E.B染色液各一滴于载玻片上，上覆盖玻片，静置3~5min后镜检。②吸取虫卵沉淀物1滴放入小试管内，加入染色液染30分钟，再用蒸馏水洗2~3次，吸取沉淀物镜检。 （活虫卵卵壳、内含物不着色，死虫卵卵壳、内含物染成蓝色）土壤钩虫卵的检查虫卵及幼虫在体外的发育 条件温暖(25oC～30oC)、 湿度(60%～80%)、 荫蔽、氧足的疏松泥土 发育快（5~8天） 虫卵24h脱壳杆状蚴以细菌及其分解有机物为食5~8天蜕皮两次丝状蚴感染期1、取表层2~3cm土样，在500ml塑料烧杯中定量至300ml刻度（约300g表层土）后放入保鲜袋，注明土样编号，在
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本注明取样点、种植物类型、户主姓名、采样份数等基本信息。2、分样筛（20目，直径20cm）筛网面上铺上2层棉纸（棉纸直径28cm），随后倒入样本土，用大镊子将颗粒较大的土块压细后将土铺展均匀。土壤钩蚴分离方法3、将铺好的分样筛放入搪瓷盘（或不锈钢脸盆）中，加入45℃的自来水，至水的液面稍没过筛网面的棉纸为止。4、将搪瓷盘（或不锈钢脸盆）放入水浴箱（或温箱）中，水温控制在45℃左右，放置1.5小时。5、取出分样筛，将搪瓷盘（或不锈钢脸盆）中的水倒入三角量杯（烧杯）中进行自然沉淀半小时。6、缓缓弃去上清，留底部50ml或更少的液体，于平皿中解剖镜镜检，进行十二指肠钩虫和美洲钩虫钩蚴的鉴别和计数。钩蚴分离注意事项1、土样应在早上10点前采集完毕；2.、采集的土样在近一段时间内没有喷过杀虫剂；3、若分离后水太浑浊，可进行水洗和半小时沉淀的步骤，重复多次。两种钩虫丝状蚴的鉴别要点 鉴别要点 美洲钩虫 十二指肠钩虫 外形 长纺锤形，虫体较短粗，头端略圆，尾端较尖，体长0.56mm 圆柱形，虫体细长，头端略扁平，尾端较钝，体长0.66mm 鞘横纹 显著(高倍镜下) 不显著(高倍镜下) 食管矛 黑色杆状，前端稍分叉，两矛粗细相等，两矛间距窄(低倍镜下) 透明丝状，背矛较粗，两矛间距宽(低倍镜下) 肠管 管腔较宽，为体宽的3/5，肠细胞颗粒少 管腔较窄，为体宽的1/2，肠细胞颗粒丰富*美洲钩虫钩虫丝状蚴的鉴别十二指肠钩虫食管矛美洲钩虫十二指肠钩虫鞘膜横纹钩蚴、粪类圆线虫、东方毛圆线虫鉴别：◇钩虫丝状蚴的咽管长度约为体长的1/5，尾端尖细；◇粪类圆线虫丝状蚴咽管长度约为体长的1/2，尾端分叉，无球形膨大；◇东方毛圆线虫丝状蚴咽管长度约为体长的1/4，尾端有小球膨大。*
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