高效液相色谱法测定食品中的食用合成色素——日落黄

高效液相色谱法测定食品中的食用合成色素——日落黄高效液相色谱法测定食品中的食用合成色素——日落黄一实验部分一实验原理食品中人工合成着色素经聚酰胺吸附法,制备成水溶液,注入高效液相色谱仪,经过反相色谱分离,根据保留时间定性及峰面积比较进行定量。二实验主要仪器和试剂 1.仪器高效液相色谱仪,带紫外检测器、0.45um滤膜(1张)、0.5um滤膜(1)、分析天平、量筒1oml(1),250ml(1)、烧杯1000ml(1),300ml(3)、容量瓶250ml(5),5ml(1),100ml(1)、移液管5ml(1)、研钵(1)、温度计100℃(...

高效液相色谱法测定食品中的食用合成色素——日落黄一实验部分一实验原理食品中人工合成着色素经聚酰胺吸附法,制备成水溶液,注入高效液相色谱仪,经过反相色谱分离,根据保留时间定性及峰面积比较进行定量。二实验主要仪器和试剂 1.仪器高效液相色谱仪,带紫外检测器、0.45um滤膜(1张)、0.5um滤膜(1)、分析天平、量筒1oml(1),250ml(1)、烧杯1000ml(1),300ml(3)、容量瓶250ml(5),5ml(1),100ml(1)、移液管5ml(1)、研钵(1)、温度计100℃(1)、滴管(1)、电磁炉(1)、G3垂融漏斗(孔径60ml)、PH试纸(1—14)试剂瓶1000ml(2) 2药品乙酸(分析纯)、甲醇(色谱纯经0.5um滤膜过滤)、聚酰胺粉(尼龙6过200目筛)、氨水(分析纯)、甲酸(分析纯)、柠檬酸(分析纯)、无水乙醇(分析纯)、饱和硫酸钠、无离子水、0.2%硫酸钠、乙酸铵(分析纯)、合成着色标准溶液:日落黄三仪器工作条件高效液相色谱的工作条件:一般可在室温下进行,采用颗粒极细的固定相,柱内压降很大,流动相黏度很高,需采用高入口压,维持一定的流动相线速。色谱柱:不锈钢柱流动相:甲醇+0.02 mol/L 乙酸铵溶液, 梯度洗脱:甲醇+0.02 mol/L 乙酸铵溶液:甲醇20%,乙酸铵80%,0~5min;甲醇35%,乙酸铵65%,5~11min:甲醇98%,乙酸铵2%,11~16min;甲醇98%,乙酸铵2%,16~17min;甲醇20%,乙酸铵80%,甲醇20%,乙酸铵80%,17~30min 流速: 1.0 mL/min 进样量:10ul 紫外吸收检测器:适用于梯度洗脱,对流动相速度变化不敏感,流动相组成的变化对检测其响应几乎无影响,但是只有检测其所提供的波长下有较大吸收的分子才能进行检测,流动相的选择受一定限制,既具有一定紫外吸收的溶剂不能做流动相。每种溶剂都有紫外的截止波长,当小于该截止波长的紫外光通过溶剂时,溶剂的透光率降至百分之十以下,因此监测器的工作波长不能小于溶剂的紫外戒子波长。四样品的处理 1 鲜橙多量取20ml,倒入100ml烧杯中,如含二氧化碳应加热去除 2蜜饯类、玉米糖称取10.00g粉碎试样,放入100ml烧杯中,加水30ml,温热溶解,若试样溶液PH较高,用柠檬酸溶液调PH到6左右 4色素提取聚酰胺吸附法:试样溶液用柠檬酸水调ph值到6左右。加热至60℃,用1g聚酰胺粉加水调成粥状,倒入溶液搅拌片刻,用G3垂融漏斗抽滤,用60℃的ph为4-5的水洗涤3-5次,用甲醇—甲酸混合液洗涤3-5次,用水洗至中性,再用乙醇—氨水—水(7+2+1)混合液解吸3-5次,解吸步骤:每次5ml,合并所有解析滤液与25ml的烧杯中,加热至溶液近干,用乙酸中和后,加高纯水溶解定容至5ml,摇匀,用0.45um滤膜过滤,取10ul进高效液相色谱仪测定。五溶液的配制 1标准溶液的配制合成着色剂标准溶液:准确称取按其纯度折算为日落黄0.100g,倒入烧杯中用PH为6的蒸馏水溶解后,置于100ml容量瓶中,加PH为6的水至刻度,配置成浓度为1.00mg/ml的着色剂水溶液合成着色剂标准使用液:使用前,将上述溶液加蒸馏水稀释20倍,经0.45um滤膜过滤,配成合成色素剂浓度为50.0ug/ml的标准使用液 2其他溶液的配制 1.0.02mol/l乙酸铵溶液:称取1.54g乙酸铵加水稀释至1000ml经0.45um滤膜过滤 2.氨水:量取氨水2ml加水至100ml混匀 3.0.02mol/l氨水—乙酸铵溶液:取氨水0.5ml加0.02mol/l乙酸铵溶液至1000ml 4.甲醇—甲酸溶液:量取甲醇溶液60ml、甲酸溶液40ml混匀 5.柠檬酸溶液:称取20g柠檬酸,加水至100ml溶解混均 6.无水乙醇—氨水—水溶液:量取无水乙醇70ml,氨水20ml,水10ml混匀备用 7.ph=6的水:无离子水加柠檬酸溶液调ph为6 二结果与讨论一检测波长的选择在本实验溶剂体系条件下,经UVD检测器采集的日落黄光谱图可得日落黄的最大吸收波长,则选择λmax=480mm波长为检测波长二流动相的选择为确保目标组分与其它组分良好分离的前提条件下, 充分考虑了流动相的成本、毒性和后处理方便等因素选择了甲醇-乙酸(PH为4.0,0.02mol/l)胺为本方法的流动相体系. 三工作曲线绘制标准曲线: 取10 μL 合成色素标准使用液进行HPLC 分析,测量保留时间和峰面积, 每种浓度测定3 次, 取平均值, 用峰面积和各色素浓度作图, 绘制标准曲线。合成色素日落黄色谱图四精密度实验精密吸取各试样溶液10ul, 重复进样3次, 记,录各峰的面积五稳定性试验取各样品溶液, 分别在0、3、6、9 h测定, 记录日落黄的峰面积, 观察样品在9 h内稳定性. 六加标回收试验取处理好的鲜橙多试液4份,其中两份分组准确加入含量为1.00mg/ml:的着色剂标准溶液,然后按上述样品预处理方法进行样品处理,经高效液相色谱仪测得平均回收率为?其计算公式为:回收率P = (加标试样测定值- 试样测定值) /加标量×100 %,其余两份然后做平行本地测定。七样品分析三结论

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