细胞爬片的保存细胞爬片的保存

细胞爬片的保存细胞爬片的保存 2010-07-28 15:44 细胞爬片的保存 1. 细胞爬片可以用 含叠氮钠PBS液保存.但不知道具体浓度,请告知.多谢!! 加在液体中作为防腐剂的叠氮钠浓度一般为0.04--0.08%。但是我建议对于细胞爬片，还是尽量快的进行处理，以防不必要的问题～ 2. louischen wrote:但我的细胞爬片经过4,多聚甲醛固定，PBS冲洗后直接就放在了,20度，还能用于免疫组化吗,～ 应该没有问题，但是还是现作先染好些，以防抗原的丢失 3. mRNA原位杂交经4,多聚甲醛固定,固定液需加DEPC水。其它建议用甲醇固定。,20度保存 4. 如果是4,多聚甲醛固定，然后放在PBS中保存，在4度冰箱里保存两周没问题。时间再长就没试过了。 5. 丙酮中固定5,10分钟，然后风干，放置4度保存过夜应该是没有问题。不要固定过夜，蛋白质固定过度，会影响抗原的暴露，影响免疫组化结果。如果是胞浆或胞核抗原出现假阴性结果，可考虑应用0.5,的triton-100孵育30分钟，渗透细胞膜。如果玻片没有经过特殊处理，不要用其他抗原修复的 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 ，会造成掉片，我曾有过这方面的体会 6. 丙酮固定后，PBS洗涤3次，即可保存至4度冰箱备用。 7. (1)细胞爬片先用TBS洗3次，每次5分钟 (2)4%多聚甲醛固定，室温，20分钟 (3)70%-80%-90%-95%-100%梯度酒精脱水，通风橱内干燥，-80度保存。2周没有问题的，我保存过2个月都有信号，不过还是保存时间短一点的好 8. 我的心肌细胞爬片用不同浓度的乙醇依次脱水后,就放在室温中,因为是要拍电镜,但是学校电镜坏了,呵呵,所以放了一个月后去拍,还是很好 9. 细胞爬片用4%多聚甲醛或冷丙酮等固定，用PBS冲洗后，晾干，放在-20度保存一个月没有问题的。 10. 细胞爬片，有机溶剂如4%多聚甲醛或冷丙酮等固定后，轻轻摇动玻片或培养皿等，静置2min左右，弃去固定液，不用PBS洗而是采用空气干燥，干燥后的标本可于-70?长期保存。解冻时要小心抗原破坏，应先将标本转移于干冰预冷的固定液，然后再将混合液转移至室温下，固定液到达室温时取出标本，再用PBS冲洗，在做以后的步鄹 11. 我也做过细胞爬片的组化染色，不过没有遇到类似的问题。细胞培养好后用PBS洗一遍，然后4%多聚甲醛4度固定15分钟，自然风干。室温保存几周内都可以用的。我想这可能与抗原的类型有关，有的对氧化等损伤比较敏感，有的差一些。最好避光保存在4度，同时尽量隔绝空气。免疫荧光与普通DAB显色差别只再二抗的标记，样品的保存应该是没有多大差别的。 12. 细胞爬片丙酮固定后-20度保存，现在要再做免疫荧光，将保存的爬片拿出37度复温然后常规操作就可以了 13. 爬片做免疫组化的优势在于抗原新鲜，细胞形态保存较好。若爬片需长期保存并出现你这样的问题，原因可能是:1)试验步骤有误，建议重复并加阳性对照片。2)加一抗前处理同石蜡切片，可进行抗原修复，如胰酶消化或热修复。3)因为抗原抗体反应在液相中进行，故对已极度干燥的爬片充分水化很重要。建议试验前用PBS浸泡过夜。如不能解决你的问题请QQ联系:81825645。本人在湖南省肿瘤医院病理科(长沙市)做免疫组化。 14. 4%多聚甲醛或冷丙酮固定都可以，也有用无水酒精的，固定好后放-20度，2-3个月是没有问题的。 15. 对于一般的细胞免疫组化，我的做法是:细胞爬片用冰的纯丙酮固定20MIN，再在通风柜将丙酮吹干，—-20度保存，用丙酮固定作用是沉淀蛋白质和糖，穿透性很强，保存抗原的免疫活性好。所以丙酮常用做细胞细胞爬片的固定剂。当然还是要根据你的实验目的决定用那种固定剂。 如:1(多聚甲醛(常用4%):可用于免疫电镜;也可用于免疫荧光染色。主要检测组织内一些性能娇弱的抗原特别是细胞表面抗原，例如各类淋巴细胸分化决定簇(CD)、主要组织相容性抗原等 2(乙醇。优点:穿透性强、抗原性保存较好。缺点:但醇类对低分子蛋白质、多肽及胞浆内蛋白质保存效果较差，使蛋白变性的作用轻，固定后可再溶解;染色过程中，温育时间长，抗原可流失而减弱反应强度 3(甲醛(福尔马林)应用最广 优点:形态结构保存好，且穿透性强， 缺点: 甲醛放置过久可氧化为甲酸，使溶液pH降低，影响染色;分子间交联形成的网格结构可能部分或完全掩盖某些抗原决定簇，使之不能充分暴露。可造成假阴性的染色结果。 16. 4度是不能保存这么长时间(1个月)的，如果抗原已被分解，再修复也没用～ 17. 弃去固定液，不用PBS洗而是采用空气干燥，干燥后的标本可于-70?长期保存。 18. 爬片置于37度PBS中洗三次，每次3到5秒钟，然后在4,多聚甲醛中固定15分钟，然后再用37度去离子水将甲醛冲干净，注意手法轻柔，要不然掉片很厉害。同时操作过程中注意玻片的正反面，要不然真的是前功尽弃。 将做好的爬片置于滤纸上晾干，然后用中性树胶粘在载玻片上。注意一定要等中 性树胶彻底干了之后才能做后续实验，要不然玻片会掉下来的，就又是前功尽弃了做好的细胞爬片可以放在,20保存备用，具体能保存多长时间不太清楚，当然尽量早用。 19. 固定后放点PBS，然后放在4度冰箱中保存，我最长保存两个月的，然后再做免疫组化，应该没有太大的问题的。 20. 固定后4度可以存放一周，,20度存放半年，我现在也要做这个，实验室老师教的。 21. 四度放1周应该没问题的，你最好放在,,,度，我在,,,度放一个月都还出结果的(很多人作的片子很多，不可能一次作完，一个月没问题( 22. 最佳的固定及保存方法: (1)中性缓冲福尔马林(不必调pH): 福尔马林(40%甲醛，用时加入过量碱式MgCO3中和) 10.0ml Na2HPO4.12H2o 1.9653g NaH2PO4.2H2O 0.5460g 加0.85 %NaCl溶液溶解，定容至100ml。 (2)细胞固定:待细胞接近长成单层时，用镊子取出盖玻片，迅速于37?PBS中漂洗2次，每次3-5秒，以清除血清。 (3)将盖玻片投入中性缓冲福尔马林溶液中室温固定30min。 (4)用镊子取出盖玻片，PBS漂洗2次，每次3-5秒，晾干保存于-20?备用。可长期保存，做实验时，取出片子，入PBS湿润后即可进行你的实验。 可以用于做免疫细胞化学(H.E.)或免疫荧光。(本帖没有加分) 23. 细胞爬片固定以后要放在-20度的冰箱.1个月内可以用. 24. skywalkerzz wrote:过氧化氢处理这一步，用三蒸水稀释商品浓度为30,的过氧化氢，然后室温下玻片放在其中浸泡10min，是不是过氧化氢导致细胞严重脱片, 爬片应该用甲醇/双氧水，你的细胞极可能是过氧化氢导致严重脱片 25. 本人比较喜欢用4%得多聚甲醛，20分钟很好用的。保存的时候注意片子最好晾干，不要挤压，防止粘片和碎裂。 26. 细胞爬片固定好以后，如果要保存，我们的做法是倒掉固定液，PBS漂洗后干片保存在4度，最长半年没问题。 27. 1、用新鲜配制的预冷的4%多聚甲醛缓冲液室温固定15 min，PBS (0.01 mol/l, pH7.4)洗涤3遍后是否就可以进行免疫细胞化学染色了 2、爬片PBS (0.01 mol/l, pH7.4)洗涤3遍后是否能保存，怎样保存, 1、洗过就可以做免疫组化了。 2、固定过后自然干燥，不要洗，-20度保存。做之前再洗。 28. 细胞固定最好用丙酮或酒精，不要用4%多聚甲醛，以免抗原交联，这样组化时不用再抗原修复。细胞固定后可室温保存在丙酮中，不使之干燥。 29. 如果是检测膜上的物质,好象不能用酒精, 30. 适当密度后取出固定(丙酮-20固定10,20min)，再进行免疫染色。 31. 一批细胞爬片,如果细胞爬片是在玻璃上，冷丙酮固定15-20分钟，然后放-20度，没有问题。 如果细胞爬片是在24孔板或6孔板里进行，冷丙酮会腐蚀板子，最好4%多聚甲醛。 32. 细胞爬片用纯丙酮固定10分钟，取出干燥后用锡纸包裹，-70度保存。 33. 4%多聚甲醛固定后PBS水洗，自然干燥后用锡纸包裹，-20度冻存不超过1月。 34. 如果细胞贴壁困难，可将片子先用纯血清挂一层，凉干后再养细胞。 35. 可以买NUNC公司的专用细胞培养用盖玻片，商品名Thermanox? Coverslips。高分子材料，耐高温灭菌，经过特殊表面处理，细胞容易贴附。可以用剪刀任意裁剪，使用效果好。 上海生工有现货，不用国外定货。我使用后，觉得效果比玻璃盖玻片效果好很多。 36. 我们通常是把细胞玻片固定好后，用PBS冲洗干净，然后用酒精脱水(80%，90%，100%，100%酒精各一次，每次10分钟左右)，然后放在烘箱里烘干，这是就相当于石蜡切片了，可以保存一定的时间。