[教学]光合细菌培养基配方的优化研究

[教学]光合细菌培养基配方的优化研究 光合细菌培养基配方的优化研究 摘要:光合细菌培养基的组分是由乙酸钠、氯化铵、磷酸二氢钾、硫酸镁、酵母膏等5种原料构成。采用L16(45)正交表,将5种原料作为光合细菌生长有影响的因素,通过试验数理统计的直观和理论分析,对其配方进行优化。试验结果表明,当培养基的配方为乙酸钠3. 3 g/L、氯化铵0. 6 g/L、磷酸二氢钾0. 9 g/L、硫酸镁0. 5 g/L、酵母膏1. 5 g/L、光照3 000 lx 和温度(32?2)e时,培养72 h即可达到生长峰值,细菌总数可以从起初的1. 75@109cfu/mL提高到3. 19@109cfu/mL。优化的培养基条件能有效促进光合细菌生长。 关键词:光合细菌; 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 曲线;平板菌落计数;正交试验设计;培养基优化 1 试验材料 试验菌种:光合细菌(Photosynthetic Bacteria, PSB)由山东省淡水水产研究所分离、提纯、培养 而获得,主要菌种为沼泽红假单胞菌。 液体培养基基础配方:乙酸钠2. 5 g,酵母膏 2. 0 g,MgSO40. 5 g,NH4Cl 1. 0 g,KH2PO40. 5 g 和无菌水1 000 mL[1]。 用于平板菌落计数)配方:牛肉 固体培养基( 膏1. 5 g,蛋白胨5. 0 g,NaCl2. 5 g,琼脂7. 0 g和 无菌水500 mL[1]。 主要仪器:生化培养箱LRH)150B,紫外线 分光光度计Cary 100,自控振荡机ZD,显微镜O- lympus CX41,蒸汽消毒器YXQG02,电子天平 AG204,振荡培养箱BS)IEA;无菌吸管,培养皿, 试管及试管架、三角烧瓶等常用试验室器皿。 主要试剂:乙酸钠,氯化钠,氯化铵,磷酸二氢 钾,结晶硫酸镁,碳酸氢钠均为分析纯(AR);蛋白 胨,牛肉膏,酵母膏和琼脂均为生化试剂(BR)。 2 试验 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 2.1 光合细菌浓度OD660值标准曲线的测定 2.1. 1 基本原理 用紫外线分光光度计进行光 学密度测定,来获得光合细菌不同标准浓度菌悬 液的OD660值[2],绘制光合细菌浓度OD660值的标 准曲线。 2. 1. 2 操作步骤 标记:取11支无菌20 mL试 管,用记号笔分别标明光合细菌浓度, 0. 00, 0. 01, 0. 02, 0. 03, 0. 04, 0. 05, 0. 06, 0. 07, 0. 08, 0. 09和 0. 10。 接种:分别用10 mL无菌吸管吸取光合细菌 菌悬液2. 0, 4. 0, 6. 0, 8. 0, 10. 0, 12. 0, 14. 0, 16. 0, 18. 0, 20. 0 mL分别放入20mL试管中,加入 液体培养基至20 mL,并用自控振荡机摇晃均匀。 2. 1. 3 OD660值测定结果 2007年6月2日,提 取不同标准浓度PSB菌悬液、液体培养基作空 白;选取波长660. 00 nm,光束模式为双光束自动 选择模式,进行OD660测试,其回归方程为: y=0. 506 01 x (r= 0. 999 07) 式中, x为光合细菌浓度; y为OD660值;A为截距; B为斜率。 2. 2平板菌落计数法试验 2. 2. 1操作步骤 取无菌培养皿9套,将光合 细菌菌悬液依次稀释至10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6, 10-7。置入自控振荡机上振荡,使菌 液充分混匀。用3支1 mL无菌吸管分别吸取 10-5、10-6和10-7的稀释菌悬液各0. 1 mL,分别 放入已做好固体培养基平板的培养皿中,并用玻 璃涂棒将菌液涂布均匀。每种稀释浓度3个设置 重复,及时放入生化培养箱中,调至(32?2)e, 进行光照培养。培养48 h后,取出培养平板,对 各培养皿中形成的菌落计数,算出同一稀释度3 475渔业现代化62007年第34卷第6期 个平板上的菌落平均数,并按下列公式进行计算: 1 mL中菌落形成单位(cfu)=同一稀释度3 次重复的平均菌落数@稀释倍数@10[1] 2. 2. 2试验结果 (1)平板菌落计数结果(表1) (2)PSB菌悬液OD660值测试结果(表2) 表1培养后菌落计数结果表 稀释度10-5 1 2 3平均 10-6 1 2 3平均 10-7 1 2 3平均 cfu数/平板2 262 1 816 1 983 2 020. 3 267 281 226 258 31 42 33 35. 3 cfu数/mL 2. 02@1092. 58@1093. 53@109 注:采集时间为2007-06-06 15: 10: 15;光合细菌(PSB)菌悬液平均浓度=2. 71@109个/mL。 表2培养时光合细菌(PSB)菌悬液OD660值测试表 样品浓度度数值 (g/L) 浓度平均值 (g/L) 平均值 (Abs)标准偏差SD均方差%RSD读数值(Abs) 3个平行样 3. 1 3. 1 3. 1 3. 1 1. 563 6 0. 011 74 0. 751 10 1. 550 1. 566 1. 573 注:采样时间为2007-06-04 15: 18: 57。 2.3 光合细菌生长正交试验 2.3. 1 试验原理 光合细菌生长受到多种因素 的影响。利用规格化的 表格 关于规范使用各类表格的通知入职表格免费下载关于主播时间做一个表格详细英语字母大小写表格下载简历表格模板下载 L16(45)正交表,合理 安排试验,通过极差、均值统计分析,筛选出光合 细菌最佳培养基的配方[3-5]。 2. 3. 2 正交试验 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 (表3) 表3液体培养基L16(45)正交试验因素水平表 水平A 乙酸钠(g/L) B NH4Cl(g/L) C KH2PO4(g/L) D MgSO4(g/L) E 酵母膏(g/L) 1 2. 1 0. 6 0. 3 0. 3 0. 5 2 2. 5 1. 0 0. 5 0. 5 1. 0 3 2. 9 1. 4 0. 7 0. 7 1. 5 4 3. 3 1. 8 0. 9 0. 9 2. 0 2. 3. 3称量与接种 对各种试剂质量进行称 重,根据正交表的试验方案,计算出试验所需要的 总量,溶解在80 mL无菌水中,分别在48个三角 烧瓶内均加入NaHCO30. 02g,调整pH值,并接种 菌悬液浓度20%,最后加入无菌水100 mL至刻 度,用自动振荡机混合均匀,放入生化培养箱内培 养,箱内温度维持(32?2)e,每天测取OD660,直 到光合细菌样品组中第1个出现生长峰值时结束 (图1),并对该样品组进行延期跟踪测试,观测其 结果(图2)。 2. 3. 4培养结果(表4) 正交试验开始接种时,菌悬液的接种量为 20%,其OD660值=1. 014 5,由公式y= 0. 506 01x (r=0. 999 07)推算出光合细菌含菌数为1. 75@ 109cfu/mL。 图1在样品组中第1个出现生长峰值情况 (试验组13) 485渔业现代化62007年第34卷第6期 图2试验组13跟踪测试结果 (2007-07-09)2007-07-16) 07-16) 表4液体培养基试验结果表(2007- 试验组A B C D E OD660值yi 1 1 1 1 1 1 1. 153 2 2 1 2 2 2 2 1. 433 1 3 1 3 3 3 3 1. 500 1 4 1 4 4 4 4 1. 443 5 5 2 1 2 3 4 1. 350 5 6 2 2 1 4 3 1. 674 6 7 2 3 4 1 2 1. 517 3 8 2 4 3 2 1 1. 437 8 9 3 1 3 4 2 1. 360 7 10 3 2 4 3 1 1. 545 5 11 3 3 1 2 4 1. 448 4 12 3 4 2 1 3 1. 477 9 13 4 1 4 2 3 1. 840 9 14 4 2 3 1 4 1. 353 9 15 4 3 2 4 1 1. 525 9 16 4 4 1 3 2 1. 723 3 均值Ñ1. 382 5 1. 426 3 1. 499 9 1. 375 6 1. 415 6 均值Ò1. 495 1 1. 501 8 1. 446 9 1. 540 1 1. 508 6 均值Ó1. 458 1 1. 497 9 1. 413 1 1. 529 9 1. 623 4 均值Ô1. 611 0 1. 520 6 1. 586 8 1. 501 2 1. 399 1 极差R 0. 228 5 0. 094 3 0. 173 7 0. 164 5 0. 224 3 注:每一试验组设置3个重复。 3讨论 根据光合细菌浓度OD660值标准曲线的测定 试验,得到回归方程: y=0. 506 01x,相关系数r= 0. 999 07。 当OD660=1. 563 6时,根据平板菌落计数试 验,测得菌悬液平均菌落数为2. 71@109cfu/mL。 根据增殖培养基配方优化试验(表2),从极 差(R)分析可以看出,A~E因素影响光合细菌生 长OD660值的主次顺序:A>E>C>D>B。因素 A乙酸钠对光合细菌生长的影响十分明显,因素 B氯化铵对生长的影响最小。从均值Ñ~Ô理论 分析,最佳培养基配方组合为: A4、B4、C4、D3、 E3。 正交试验最佳生长条件是试验组13,即乙酸 钠3. 3 g,氯化铵0. 6 g,磷酸氢二钾0. 9 g,硫酸镁 0. 5 g,酵母膏1. 5 g。每个样品均接种200mL,加 碳酸氢钠0. 20 g,并加无菌水1 000 mL至刻度。 培养温度(32?2)e,普通白炽灯光照3 000 1x。 根据开始菌悬液的浓度、第1次样品13达到 峰值的OD660值,由公式y = 0. 506 01x (r=0. 999 07)以及菌悬液的浓度与OD660值呈线 性关系,可以推算得到,培养72 h,细菌总数可从 1. 75@109cfu/mL提高到3. 19@109cfu/mL。 根据跟踪测试结果(图2),光合细菌达到生 长峰值后,有一段平滑生长期,随后衰减,这主要 是由于培养基吸收消耗,满足不了光合细菌正常 生长的需要所致。 试验数据的获得,对工厂化养鱼水质净化、光 合细菌的正确使用,具有重要的指导意义。t 参考文献 [1]沈萍,范秀容,李广武.微生物学试验[M].北京:高等教育 出版社, 2002: 92-95. 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[15]庄平,王幼槐,李圣法,等.长江口鱼类[M].上海:上海科 学技术出版社, 2006: 137-144. =作者简介>吴建辉(1980)),男,硕士,主要从事中 华鲟保护区的资源和环境监测工作。 (2007-09-17收稿; 2007-12-10修回) Growth ofwild juvenile Chinese sturgeon (Acipenser sinensis) farmed in the artificial environment WU Jian-hu,i LIU Jian, CHEN Jin-hui ( SuperintendencyDepartment ofShanghaiYangizeEstuarineNature Reserve forChinese Sturgeon, Shanghai200092, China) Abstract:Thewild juvenile Chinese sturgeon (Acipenser sinensis) catched in theDongtan ofChongming is- land by the fisherman onMay, 2006, was bred in the artificial environment from June toAugus.t This paper investigated its growth feature in the artificial environment. The result of the study is that juveniles ' body length increased from (15. 40?0. 64) cm to (29. 20?0. 75) cm among three months, 1. 54 mm in daily length increased, and its bodyweight increased from (26. 00?1. 34) g to (108. 00?3. 87) g among three months, 0. 90 g in dailyweight increased. The relationship between BL and BW of juvenileAcipenser sinensis wasW = 0. 121 5 L2. 031 3(R2=0. 945 7) (b<3), that is to say the growth of length was faster than of weigh.t And comparing the growth ofwild juvenileAcipenser sinensisin the artificial environment and in the wild environmen,t the result is that juvenileAcipenser sinensisgrow in thewild is faster than itsgrow in the ar- tificial environmen.t The resultsmay infer that the growth differencesmay be caused by injured, not fit foren- vironment and foodwhen juvenileAcipenser sinensisis bred in the artificial environmen.t Key words:Acipenser sinensis; wild; artificial environmen;t Dongtan of Chongming island; isometric growth; relative fatness (上接第49页) Study on the optim ization of a culturemedium for photosynthetic bacteria CHEN Xiu-l,i CHEN You-guang, WANG Yu-feng, LIXian (FreshWaterFisheriesResearch Institute ofShandondProvince, Jinan250117, China) Abstract:The culture medium for photosynthetic bacteria is composed of CH3COONa, NH4C,l MgSO4, KH2PO4and Peptone. We use L16(45) orthogonal design test to optimize the culturemedium, taking above 5 components as influencing factors to photosynthetic bacteria growth. According to the results: when the culture medium containingCH3COONa 3. 3 g/L, NH4Cl 0. 6 g/L, KH2PO40. 9 g/L, MgSO40. 5 g/L and Peptone 1. 5 g/L, after72 hour growth under illumination 3 000 lx and temperature (32?2)e, the photosynthetic bacteria growth can reach peak value. The totalnumberofbacteria increase from initial1. 75@109cfu/mL to 3. 19@109cfu/mL. The optimized culturemedium can effectively improve photosynthetic bacteria growth. Key words:photosynthetic bacteria; standard curve; plate count for bacterial colonies; orthogonal design; optimization ofmedium